王宏燕

（遼寧省動物疫病預(yù)防和控制中心 遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧 沈陽 110164）

兩種不同ELISA法在檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體中的選擇與應(yīng)用

王宏燕

（遼寧省動物疫病預(yù)防和控制中心 遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧 沈陽 110164）

豬繁殖與呼吸綜合征（簡稱豬藍(lán)耳?。┦且鹉肛i繁殖障礙和仔豬、育成豬呼吸道癥狀的一種高度接觸性傳染病。本文比較了兩種常用的檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的ELISA方法，確定IDEXX豬藍(lán)耳病抗體ELISA檢測試劑盒適合藍(lán)耳病感染抗體的檢測和早期診斷；LSI豬藍(lán)耳病抗體ELISA檢測試劑盒適合藍(lán)耳病免疫抗體的監(jiān)測。兩種ELISA方法在應(yīng)用范圍和診斷意義方面完全不同，因此在日常監(jiān)測中，應(yīng)根據(jù)監(jiān)測目的合理選擇豬藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒。

豬藍(lán)耳病；抗體；檢測；ELISA

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度接觸性的傳染病，以引起母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀及高死亡率為主要特征。PRRSV病毒根據(jù)抗原特異性不同分為美洲型毒株和歐洲型毒株。該病于1987年首次爆發(fā)于美國[1]，之后在世界范圍內(nèi)迅速傳播，2006年P(guān)RRS在我國大部分省份流行起來，后經(jīng)證實為高致病性豬藍(lán)耳病，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的危害和經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。疫苗免疫是防控該病最重要的手段之一，但是免疫后豬群能否得以保護(hù)以及免疫后是否還發(fā)生藍(lán)耳病的問題一直備受關(guān)注，解決這個問題關(guān)鍵在于對豬群健康狀態(tài)的監(jiān)測和把握。藍(lán)耳病抗體水平是衡量豬群健康狀態(tài)的一個重要指標(biāo)，對藍(lán)耳病抗體水平的監(jiān)測可以判斷豬群對藍(lán)耳病的抵抗力，從而了解豬群的相應(yīng)狀態(tài)。目前藍(lán)耳病抗體的監(jiān)測主要依賴成熟的診斷試劑盒，國內(nèi)使用較多的為IDEXX-ELISA和LSIELISA豬藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒，這兩類試劑盒基于不同的藍(lán)耳病蛋白建立了不同的方法，因此應(yīng)用范圍和診斷意義也不同。

1 IDEXX-ELISA豬藍(lán)耳病抗體試劑盒

1.1 以核衣殼蛋白（N N蛋白）為主要包被抗原核衣殼蛋白（N蛋白）由ORF7編碼，是PRRSV衣殼蛋白的重要組成部分。美洲型與歐洲型毒株N蛋白各含123和128個氨基酸，N蛋白在全病毒中含量最高，約占病毒粒子蛋白總量的20%～40%；免疫原性最強(qiáng)，具有4個明確的抗原表位。豬感染PRRSV后，早期免疫應(yīng)答主要是針對N蛋白，產(chǎn)生非中和性抗體。N蛋白在病毒的早期感染診斷和致病免疫機(jī)理研究中具有重要意義。因此，IDEXX-ELISA豬藍(lán)耳病抗體試劑盒檢測的抗體與血清的中和活性無相關(guān)性，只對早期自然感染和人工感染PRRSV具有診斷意義。

1.2 檢測N N蛋白抗體N蛋白最早誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，其次是M蛋白，最后是GP5蛋白[4]?；疃窘臃N后8～14 d、滅活苗接種后2～3周產(chǎn)生N蛋白抗體，但持續(xù)時間很短，約2個月，且與機(jī)體的保護(hù)力無關(guān)。1.3 用于藍(lán)耳病感染抗體的檢測和診斷 由于感染后N蛋白抗體產(chǎn)生早，該試劑盒適合于藍(lán)耳病早期感染的檢測和診斷。N蛋白誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體是非中和性的，檢測結(jié)果不能體現(xiàn)機(jī)體免疫狀況，不適用對免疫豬群的抗體監(jiān)測。

2 LSI-ELISA豬藍(lán)耳病抗體試劑盒

2.1 以膜蛋白（M M蛋白、GP GP55等）為主要包被抗原M蛋白由ORF6編碼，是非糖基化蛋白，美洲型與歐洲型毒株M蛋白各含174和173個氨基酸，并且在兩種毒株間高度保守，含有主要的中和表位[5]，是免疫應(yīng)答的主要抗原。GP5蛋白由ORF5編碼，美洲型和歐洲型毒株分別由200和201個氨基酸組成，為囊膜糖蛋白，包含主要中和表位[6]，具有6個抗原決定簇[7]，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，該抗體在體內(nèi)和體外均能有效中和PRRSV[8]，表明GP5在誘導(dǎo)PRRSV特異性免疫中具有重要作用。

2.2 檢測膜蛋白抗體膜蛋白誘導(dǎo)的抗體能有效中和病毒，在體內(nèi)出現(xiàn)時間晚，但維持時間長?；疃窘臃N后14～21 d、滅活疫苗接種后3～4周產(chǎn)生膜蛋白抗體，該抗體在體內(nèi)能持續(xù)4～5個月，是機(jī)體主要的中和抗體，和機(jī)體的保護(hù)力相關(guān)。

2.3 用于疫苗免疫效果評價和母源抗體檢測由于膜蛋白抗體與中和抗體高度相關(guān)，該試劑盒可以檢測保護(hù)性抗體，用于疫苗免疫效果評價，同時也能用于檢測哺乳仔豬和斷乳仔豬的母源抗體。

3 小結(jié)

近年來，藍(lán)耳病在我國感染狀況越來越嚴(yán)重，很多地方呈區(qū)域性暴發(fā)流行。對健康的豬進(jìn)行藍(lán)耳病的免疫，使豬群產(chǎn)生特異性免疫力，已經(jīng)成為防控豬藍(lán)耳病的重要措施。眾所周知，抗體效價檢測是評價疫苗使用效果的主要手段[9]。目前市場上用于藍(lán)耳病抗體檢測的試劑盒很多，大致分為兩類，一類以N抗原為包被抗原，另一類以膜抗原為包被抗原，最有代表性的為IDEXX-ELISA藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒和LSI-ELISA藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒。通過上述比較，這兩種試劑盒在診斷時機(jī)、診斷范圍和診斷意義上有很大不同。因此，在藍(lán)耳病抗體檢測中，應(yīng)根據(jù)檢測的目的，選擇適合的方法，這樣得出的結(jié)果才更有科學(xué)性。例如，了解豬群藍(lán)耳病早期感染情況，選擇IDEXX-ELISA藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒；了解疫苗免疫后抗體消長規(guī)律，選擇LSIELISA藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒。

[1]Col l ins JE,Benf ield DA,Christianson WT,et al.Isolation of swine inef r ti l iy and respiratory syndrome virus (isolateATCCVR-2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic Pigs[J].J Vet Diagn Invest,1992,4(2):117-126.

[2]寧宜寶，鄭杰，張純萍，等.我國南方豬高熱病的研究（Ⅱ）豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的分離、鑒定和致病性測定[J].中國獸藥雜志，2007，41(1)：14-18.

[3]Zhou YJ,Hao XF,Tian ZJ,et al.Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J]. Transbound Emerg Dis,2008,55(3-4):152-164.

[4]Nelson EA,Christopher-Hennings J,Benf ieldDA.Serum immune responses to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus[J]. Vet Diagn Invest, 1994,6:410-415.

[5]Meulenberg,J.J.,Petersen den Besten,et al. Molecular characterization of Lelystad virus [J].VeterinaryMicrobiology,1997,55:197-202.

[6]Ostrowski M,Galeota JA,Jar AM,et al.Identi fication of neutral izing and nonneut ralizing epitopes in the porcine reproductive and respiratory syndrome virus GP5 ectodomain [J].Virol,2002,76:4241-4250.

[7]Plagemann P G.Complexity of the single linear neut ralization epitope of the mouse arterivirus lactate dehydrogenase-elevating virus[J].Virology,2001,290:112-120.

[8]Goninp,Prizadehb.Seroneutral ization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus correlates with antibody response to the GP5 major envelope glycoprotein[J].J Vet Diagn Invest,1999,11:20-26.

[9]王麗娜，郝利忠，韓春曉，等.獸藥殘留檢測中酶聯(lián)免疫試劑盒的選擇原則與使用注意事項[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2013,7:41-44.

（編輯：韓斌）

Comparison of two ELISAmethods to detectantibody againstPorcine Reproductive and Respiratory Syndrome

Wang Hongyan
(Animal disease prevention and cont rol center of l iaoning province,Animal medicine research institute of liaoning province,Shenyang,Liaoning,110164)

Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is a swine infectious disease that causes abor tions and respiratory disorders.This paper compared the two kinds of commonly used ELISA methods.The IDEXX-ELISA kit which used nuclear capsid protein as coated antigen was suitable to detect antibody against PRRS for ear ly diagnosis.The LSI-ELISA kit with membrane protein as coated antigen was suitable to monitor immune antibody against PRRS.Two methods were completely dif ferent in the range of appl ication and diagnostic signi f icance.So in routine survei llance,we should choice di f ferent PRRS antibody detection kits according to the monitoring purpose.

Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS);Antibody;Detection;ELISA

S851.34+7

：A

：1672-9692(2014)04-0060-03

2014-02-10

王宏燕（1981-），女，碩士，獸醫(yī)師主要從事疫病檢測工作。