蔡伊麗 周修森
(河南省信陽市食品藥品檢驗所,信陽464000)
HPLC法測定蕁麻疹丸中歐前胡素的含量
蔡伊麗 周修森
(河南省信陽市食品藥品檢驗所,信陽464000)
目的建立蕁麻疹丸中歐前胡素含量的測定方法。方法采用反相高效液相色譜法,使用DIONEX Acclaim 120 C18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱,以甲醇:水(55∶45)作為流動相,檢測波長300nm,流速1.0 ml/min,柱溫為30℃。結(jié)果歐前胡素在0.02~0.2μg范圍內(nèi)線性較好(r=0.9999),平均回收率為98.72%(RSD為0.75%)。結(jié)論該方法快速、簡便、可靠、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好,結(jié)果穩(wěn)定,可用于蕁麻疹丸中歐前胡素含量測定。
蕁麻疹丸;歐前胡素;HPLC;含量測定
蕁麻疹丸是由吉林龍鑫藥業(yè)有限公司生產(chǎn),其處方由白芷、防風(fēng)、白蘚皮等中藥組成,具有清熱祛風(fēng),除濕止癢作用。用于風(fēng)、濕、熱而致的蕁麻疹、濕疹和皮膚瘙癢。蕁麻疹丸中君藥白芷來源于傘形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。具有解表散寒,祛風(fēng)止痛,宣通鼻竅,燥濕止帶,消腫排膿功效[1],歐前胡素是被分離出來的白芷有效成分之一[2],具有多種藥理作用,為重要的天然活性物質(zhì)。蕁麻疹丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊,標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項,為了控制藥品質(zhì)量,本文建立了高效液相色譜法測定蕁麻疹丸中歐前胡素含量的方法,現(xiàn)報道如下。
1.1 儀器Agilent1200液相色譜儀,UV檢測器(美國安捷倫公司);METTLER AE-240電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);KQ-300型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);基因型1850D超純水機(jī)(重慶摩爾制水設(shè)備有限公司)。
1.2 材料歐前胡素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110826-200511),蕁麻疹丸(吉林龍鑫藥業(yè)有限公司,批號:110202,111016,130612)。甲醇為色譜醇(SIGMA-ALDRICH,批號:SHBC0053V),水為純化水,其它化學(xué)試劑均為分析純。
2.1 色譜條件色譜柱:DIONEX Acclaim 120 C18(250mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-水(55∶45)[1],檢測波長:300nm,流速:1.0ml/min,柱溫:30℃,進(jìn)樣體積為10μl,理論板數(shù)不低于10000。
2.2 試驗溶液的制備
2.2.1 供試品溶液取本品適量,研細(xì),取約4g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇溶液25ml,精密稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷至室溫,再精密稱定重量,用甲醇溶液補(bǔ)足減失重量,搖勻,經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過,備用。
2.2.2 對照品溶液精密稱定歐前胡素對照品10mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶液適量,振搖使溶解,用甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液,精密量取貯備液5ml,置50ml量瓶中,用甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為10μg/ml的歐前胡素溶液,作為對照品溶液。
2.2.3 陰性供試品溶液取不含白芷的空白制劑樣品,按照2.2.1項下供試品溶液制備方法制備。
2.3 系統(tǒng)適用性試驗分別吸取2.2項下對供試品溶液,對照品溶液,陰性供試品溶液各10μl注入色譜儀記錄色譜圖,結(jié)果:供試品溶液和對照品溶液在9.2分鐘出現(xiàn)歐前胡素峰,該峰與其它峰分離完全(見圖1A、B);陰性供試品溶液在歐前胡素出峰位置未見峰出現(xiàn),對試驗不產(chǎn)生干擾(見圖1C)。
圖1 蕁麻疹丸HPLC色譜圖
2.4 方法學(xué)考察
2.4.1 線性關(guān)系取上述對照品溶液分別進(jìn)樣2、5、10、15、20μl,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖2),線性回歸方程為:y=1701.6x+1.0671(r= 0.9999)。表明歐前胡素在0.02~0.2μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
圖2 歐前胡素線性關(guān)系圖
2.4.2 穩(wěn)定性試驗取樣品(批號:110202),按2.2.1項下方法制備。分別于0、4、8、12、16h進(jìn)樣分析,記錄峰面積,其RSD為0.62%,其結(jié)果表明供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定。
2.4.3 精密度試驗精密吸取2.2.1項下對照品溶液10μl,分別重復(fù)進(jìn)樣5次,結(jié)果歐前胡素峰面積的平均值為344,其RSD為0.43%。結(jié)果表明,儀器精密度良好。
2.4.4 重復(fù)性試驗取同一批號(110202)的樣品5份,按2.2.1項下方法制備,測定含量,結(jié)果見表1。
表1 重復(fù)性試驗
結(jié)果表明方法重復(fù)性較好。
2.4.5 回收率試驗取本品(批號:110202)適量,共9份,約為2g的80%、100%、120%,精密稱定,精密加入2.2.2項下貯備液1.0ml,按2.2.1項下方法制備,注入高效液相色譜儀,測定,計算回收率。測得歐前胡素平均加樣回收率(n=9)為98.72%,RSD=0.75%。測定結(jié)果見表2。
表2 回收率實驗(n=9)
結(jié)果表明,用高效液相色譜法測定歐前胡素含量準(zhǔn)確度高。2.4.6含量測定按2.2.1項下方法制備,用0.45μm濾膜濾過,取續(xù)濾液,按2.1項下色譜條件測定,計算含量。(見表3)。
表3 樣品含量測定結(jié)果
3.1 提取溶劑的選擇選用了甲醇、75%乙醇、95%乙醇作為提取溶劑[3-4],測定歐前胡素的含量,結(jié)果基本一致,參照藥典相關(guān)品種項下方法,選用甲醇作為提取溶劑。
3.2 提取方式選擇提取方法比較了超聲提取和回流提取,結(jié)果接近,因超聲相對簡單易操作,且節(jié)省能源,故選用超聲提取。
3.3 提取時間選擇超聲處理時間比較了15、30、60分鐘,結(jié)果超聲15分鐘不能將歐前胡素提取完全,而超聲30、60分鐘均能將歐前胡素提取完全,考慮到節(jié)省時間,故選用超聲處理30分鐘作為供試品的提取時間。
[1]國家藥典委員會.中國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:97-98.
[2]楊小花,胡曉.歐前胡素與異歐前胡素的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2012,95(3):95-96.
[3]戚繼紅,岳莉,沈偉.高效液相色譜法測定風(fēng)濕定膠囊中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2014,20(8):93-95.
[4]劉笑笑,曹蔚,王四旺.歐前胡素的提取分離方法和藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2010,10(20):3954-3956.
Content Determination of Imperatorin in Urticaria Pill by HPLC
Cai Yili Zhou Xiusen
(Xinyang institute of food and drug control,Xinyang464000,China)
Objective To establish a method for content determination of imperatorin in Urticaria Pill by HPLC.Methods The experimental condition of the RP-HPLC method was as follows:DIONEX Acclaim 120 C18 column(5μm,250×4.6mm),with linear gradient elution using methanol and Water(55:45);Detected wavelength was 300 nm.,The flow rate was 1.0ml/min,Column temperature was 30℃.Results Imperatorin demonstrated good linear relationship in the range 0.05~0.4μg(r=0.9999),The average recovery rate was 98.72%with RSD of 0.75%.Conclusion The method is simple,reliable,accurate,reproducible and stable,and It could be used in the determination of Imperatorin in Urticaria Pill.
urticaria Pill;imperatorin,HPLC;content determination
10.3969/j.issn.1672-2779.2014.24.089
1672-2779(2014)-24-0157-02
張文娟 本文校對:周修森
2014-10-22)