沈衛(wèi)陽，宋旻昕，金祥飛，史文吏（中國(guó)藥科大學(xué)理學(xué)院/藥物質(zhì)量與安全預(yù)警教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210009）

GC-MS法測(cè)定一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器中增塑劑DEHP的溶出量

沈衛(wèi)陽＊，宋旻昕，金祥飛，史文吏（中國(guó)藥科大學(xué)理學(xué)院/藥物質(zhì)量與安全預(yù)警教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210009）

目的：建立測(cè)定一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器中增塑劑鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）溶出量的方法。方法：采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法，以鄰苯二甲酸二丁酯為內(nèi)標(biāo)，使用一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器制備營(yíng)養(yǎng)液，測(cè)定室溫放置和模擬臨床輸液24 h后營(yíng)養(yǎng)液中DEHP的溶出量。采用Rtx-5MS色譜柱；進(jìn)樣口溫度：300℃；載氣：氦氣；程序升溫模式：起始溫度200℃，15℃/min升溫至280℃，維持5min；EI離子源，離子源溫度：250℃，接口溫度：280℃；采集模式：選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM）：質(zhì)荷比（m/z）149。結(jié)果：DEHP檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.2～30μg/m l（r＝0.999 8），檢測(cè)限為0.01μg/m l，定量限為0.04μg/m l，平均回收率為102.4%，RSD為4.23%（n＝3），精密度試驗(yàn)RSD為2.7%（n＝5）。室溫放置24 h營(yíng)養(yǎng)液中DEHP溶出量為0.547～17.400mg，模擬臨床輸液24 h后營(yíng)養(yǎng)液中DEHP溶出量為8.779～10.620mg，均小于成人的耐受攝入量（30mg）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，可用于一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器中DEHP溶出量的測(cè)定。

一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器；鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是聚氯乙烯（PVC）類一次性使用輸液器中被廣泛應(yīng)用的鄰苯二甲酸酯類增塑劑。增塑劑是一種增加材料柔軟性或使材料液化的添加劑。由于DEHP與PVC分子之間僅以范德華力和氫鍵相連，在臨床使用過程中，DEHP會(huì)從PVC輸液器中遷移出來，伴隨藥物輸注進(jìn)入人體[1-2]。近年來關(guān)于DHEP的毒性研究表明，DEHP及其代謝產(chǎn)物可對(duì)哺乳動(dòng)物的生殖系統(tǒng)產(chǎn)生很大的危害[3]，并且具有慢性毒性[4-5]，人體內(nèi)的長(zhǎng)期累積對(duì)人類中樞神經(jīng)[6]以及肝臟組織[7-8]均有影響。因此，美國(guó)FDA在其發(fā)表的關(guān)于DEHP增塑PVC醫(yī)療器械安全性評(píng)價(jià)的研究報(bào)告中指出要重視和監(jiān)控醫(yī)療器具中增塑劑DEHP的溶出量[9]。

由于靜脈營(yíng)養(yǎng)液輸液體積大，并且成分復(fù)雜，僅僅使用色譜法并不能滿足試驗(yàn)對(duì)靈敏度以及定性定量的要求。本文選擇臨床上常用的靜脈營(yíng)養(yǎng)液作為研究對(duì)象，建立了檢測(cè)DEHP的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法[10]，對(duì)其進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，并對(duì)一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器在使用過程中DEHP的溶出量進(jìn)行了測(cè)定，以考察其安全性。

1 材料

1.1 儀器

GC/MS-QP2010Ultra氣質(zhì)聯(lián)用儀和AOC-20i自動(dòng)進(jìn)樣器（日本島津公司）；BSA124S型分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

鄰苯二甲酸二丁酯（天津市化學(xué)試劑二廠，分析純）；DEHP對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：350003-201001，純度：99.9%）；正己烷（色譜純，美國(guó)Tedia試劑公司，重蒸后使用）。

1.3 輸液器

一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器（江蘇康進(jìn)醫(yī)療器材有限公司，批號(hào)：20100611B、20100625B、20100708B）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 內(nèi)標(biāo)液。精密稱取鄰苯二甲酸二丁酯0.1 g（實(shí)際稱樣量：0.102 8 g），置于100m l量瓶中，用正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1m l，加正己烷至1 000m l，搖勻即得。

2.1.2 DEHP貯備液（1 000μg/m l）。精密稱取DEHP對(duì)照品0.1 g（實(shí)際稱樣量：0.101 0 g），置于100m l量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.3 DEHP溶液。精密量取DEHP貯備液2m l，置于10m l量瓶中，分別用內(nèi)標(biāo)液稀釋成質(zhì)量濃度分別為200、100μg/m l的DEHP溶液。

2.2 GC-MS條件

2.2.1 色譜條件。Rtx-5 MS色譜柱（30.0 m×0.25mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：300℃，分流進(jìn)樣，分流比：10∶1；進(jìn)樣量：0.1μl；載氣：氦氣；柱流量：2m l/m in，吹掃流量：20m l/m in；程序升溫模式：起始溫度200℃，15℃/min速率升溫至280℃，維持5m in。

2.2.2 質(zhì)譜條件。EI離子源，離子源溫度：250℃，接口溫度：280℃，溶劑延遲時(shí)間：2m in；采集模式：選擇性離子監(jiān)測(cè)模式（SIM）質(zhì)荷比（m/z）149，采集時(shí)間：2～6min。

2.3 方法學(xué)研究

2.3.1 專屬性試驗(yàn)。精密稱取DEHP對(duì)照品適量，用正己烷溶解并稀釋制成1m l含有DEHP 10μg的溶液，進(jìn)樣測(cè)定，質(zhì)譜采集模式為全掃描模式。精密量取100μg/m l的DEHP溶液，加內(nèi)標(biāo)液稀釋成含DEHP為0.2μg/m l的溶液，進(jìn)樣測(cè)定。按照一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器的使用方法，將靜脈營(yíng)養(yǎng)液按配方組成灌裝，室溫條件下，取待測(cè)的營(yíng)養(yǎng)液4m l，置于玻璃離心管中，加內(nèi)標(biāo)液4m l，渦旋10m in，取正己烷層溶液作為樣品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果DEHP的保留時(shí)間為5.54m in，以豐度最大的離子m/z149作為監(jiān)測(cè)離子，正己烷、內(nèi)標(biāo)均不干擾測(cè)定，表明本方法方法專屬性良好。DEHP全掃描模式MS圖見圖1，氣相色譜圖見圖2。

圖1 DEHP全掃描模式MS圖Fig 1 MC spectrogram of DEHP in fullscanmode

圖2 氣相色譜圖A.對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；B.樣品（批號(hào)：20100611B）+內(nèi)標(biāo)；1.內(nèi)標(biāo)；2.DEHPFig 2 GC chromatogram sA.substance control+internal standard；B.sample（No.20100611B）+internalstandard；1.internalstandard；2.DEHP

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。分別精密量取100μg/m l的DEHP溶液適量，用內(nèi)標(biāo)液稀釋成含DEHP質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、1、2、5、10、20、30μg/m l的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別精密量取各標(biāo)準(zhǔn)系列溶液0.1μl注入氣質(zhì)聯(lián)用儀，記錄色譜圖。以DEHP與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為y＝0.673 7x－0.093（r＝0.999 8），結(jié)果表明，DEHP檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍分別為0.2～30μg/m l。

2.3.3 進(jìn)樣精密度考察。取質(zhì)量濃度為10μg/m l的DEHP溶液，精密量取0.1μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積的RSD為2.7%（n＝5），表明該方法進(jìn)樣精密度良好。

2.3.4 檢測(cè)限與定量限考察。取質(zhì)量濃度為0.2μg/m l的DEHP溶液，以稀釋法測(cè)定檢測(cè)限（信噪比為3）及定量限（信噪比為10），結(jié)果表明，本方法DEHP的檢測(cè)限為0.01μg/m l，定量限為0.04μg/m l。

2.3.5 回收率與精密度試驗(yàn)。取10m l玻璃離心管15個(gè)，加入4m l的靜脈營(yíng)養(yǎng)液，再分別加入40、200、1 000μg/m l的DEHP溶液100μl，每個(gè)質(zhì)量濃度5份，渦旋1m in，再加入內(nèi)標(biāo)液4 m l，渦旋10m in，取正己烷層0.1μl進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，代入回歸方程計(jì)算回收率及RSD，結(jié)果平均回收率為102.4%，RSD為4.23%，詳見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

2.4.1 靜脈營(yíng)養(yǎng)液配方。靜脈營(yíng)養(yǎng)液其成分復(fù)雜，處方多樣化。本試驗(yàn)選取的研究對(duì)象為臨床上常用的一種靜脈營(yíng)養(yǎng)液，其配方為：5%葡萄糖氯化鈉注射液1 000m l、20%中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液（C6-C24）250m l、8.5%復(fù)方氨基酸注射液250 m l、0.9%氯化鈉注射液1 300m l、50%葡萄糖注射液180m l、10%氯化鉀注射液20m l、胰島素16 u。

2.4.2 試驗(yàn)方案。按照一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器的使用方法，將靜脈營(yíng)養(yǎng)液按配方組成灌裝于3批輸液器中，分別考察其在室溫放置和模擬輸液兩種條件下DEHP的溶出量[11]。由于靜脈營(yíng)養(yǎng)液要求在24 h內(nèi)使用完畢，因此考察時(shí)間定為24 h。2.4.3 室溫放置條件。按照一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器的使用方法，將靜脈營(yíng)養(yǎng)液按配方組成灌裝于3批輸液器中，將其在室溫（25℃）條件下放置，于0、4、12、24 h分別取出營(yíng)養(yǎng)液50m l，待測(cè)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1 Resultsof recovery test（n＝5）

2.4.4 模擬輸液條件。按照一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器的使用方法，將靜脈營(yíng)養(yǎng)液按配方組成分別灌裝于3批輸液器中，以25滴/min的速度輸出，輸出時(shí)間約24 h，結(jié)束后，用玻璃器皿收集輸出營(yíng)養(yǎng)液，待測(cè)。

2.4.5 分析方法。取待測(cè)的營(yíng)養(yǎng)液4m l，置于玻璃離心管中，加內(nèi)標(biāo)液4m l，渦旋10m in，取正己烷層0.1μl，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀，記錄色譜圖，代入回歸方程計(jì)算DEHP的質(zhì)量濃度和溶出量。室溫放置和模擬輸液條件下營(yíng)養(yǎng)液中DEHP的濃度及溶出量測(cè)定結(jié)果見表2（表中0 h是指靜脈營(yíng)養(yǎng)液灌裝于輸液器中混勻后立即取出的營(yíng)養(yǎng)液）、表3。

表2 室溫放置條件下營(yíng)養(yǎng)液中DEHP的質(zhì)量濃度及溶出量（n＝3）Tab 2 The concentration and dissolution of DEHP in venousnutrition liquid at the room tem perature（n＝3）

表3 模擬輸液條件下營(yíng)養(yǎng)液中DEHP的質(zhì)量濃度及溶出量（n＝3）Tab 3 The concentration and dissolution of DEHP in venousnutrition liquid under simulated conditions（n＝3）

美國(guó)FDA器械與輻射健康中心的《PVC醫(yī)療器械中遷移出的DEHP的安全性評(píng)價(jià)》報(bào)告中指出，成人對(duì)DEHP非腸道攝入的耐受攝入量為0.6mg/（kg·d）[9]，按正常人50 kg計(jì)算，人體每天最大可耐受的DEHP量為30mg。從表2與表3結(jié)果可知，3批樣品在室溫放置與模擬輸液條件下24 h DEHP的溶出量均小于30mg，在人體最大可耐受量范圍之內(nèi)。

3 討論

按照一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器的使用方法，將靜脈營(yíng)養(yǎng)液按一般配方組成灌裝于輸液器中，在室溫放置和模擬輸液兩種條件下測(cè)定的DEHP溶出量應(yīng)均小于人體每天最大可耐受的量。

本文所建立的GC-MS法具有檢測(cè)靈敏度高、線性范圍寬的特點(diǎn)。鑒于靜脈營(yíng)養(yǎng)液輸液體積大、成分復(fù)雜（含碳水化合物、氨基酸、脂肪乳、電解質(zhì)、維生素、微量元素和水等），若采用高效液相色譜法，難以實(shí)現(xiàn)DEHP與靜脈營(yíng)養(yǎng)液中所含組分的有效分離。文獻(xiàn)[1，12]中僅以乙醇水溶液等作為各類藥物的代表，未考慮到藥物對(duì)DEHP測(cè)定的干擾，且樣品預(yù)處理需要旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。筆者通過提取方法的優(yōu)化，結(jié)合MS中的SIM，避免了輸液中藥物對(duì)DEHP測(cè)定的干擾。

綜上所述，本文所建立的GC-MS法靈敏度高、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便可行，可最大程度地排除干擾，且定量準(zhǔn)確，可用于一次性使用靜脈營(yíng)養(yǎng)輸液器輸液過程中DEHP的檢測(cè)。

[1] 劉曦，于晶晶，王紅，等.高效液相色譜法測(cè)定一次性使用輸液器中DEHP溶出量[J].中國(guó)醫(yī)療器械信息，2012（6）：29.

[2]陳琳，錢青，張喆，等.醫(yī)療途徑中增塑劑DEHP的溶出及其安全性研究概況[J].中國(guó)藥房，2011，22（33）：3 073.

[3] 周婉格，王統(tǒng)菲，周任，等.鄰苯二甲酸二辛酯對(duì)哺乳動(dòng)物生殖系統(tǒng)影響的研究進(jìn)展[J].國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志，2013，32（1）：50.

[4] Koch HM，Rossbach B，Drexler H，et al.Internal exposure of the general population to DEHP and other phthalates-determination of secondary and primary phthalate monoestermetabolites in urine[J].Environ Res，2003，93（2）：177.

[5]謝沁珊，王杉杉，蔡鳳云，等.塑料增塑劑DEHP環(huán)境污染水平、人體負(fù)荷及生物毒性的初步研究[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，21（5）：19.

[6] 王蛟，董越，袁琴，等.鄰苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的毒性研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7（9）：178.

[7]鄭滌新，耿媛媛，王婕，等.導(dǎo)管類醫(yī)療器械DEHP檢測(cè)方法辨析[J].化學(xué)工程與裝備，2010（6）：175.

[8] 陳文婕，戴紅，陳敏，等.鄰苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）對(duì)小白鼠肝臟毒性及脂質(zhì)過氧化損傷[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2012，7（1）：93.

[9] U.S.Food and Drug Administration.Safety assessment of di（2-ethyl hexyl）phthalate（DEHP）released from PVC medical devices[R/OL].（2001）[2013-11-10].http：//www. fda.gov/downloads/medicaldevices/deviceregulationandguidance/guidancedocuments/ucm080457.pdf.

[10] 關(guān)皓月，趙霞，孫會(huì)敏.GC-MS/SIM法測(cè)定明膠空心膠囊中的鄰苯二甲酸酯類化合物[J].中國(guó)新藥雜志，2013，22（4）：482.

[11] 王君，欒玲玉，張繼斌，等.食品包裝用PVC中3種增塑劑的殘留及特定條件下的遷移規(guī)律[J].包裝工程，2013，34（1）：29.

[12] 馬明，清江，周韻，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定塑料食品接觸材料中DBP及DEHP遷移量[J].環(huán)境化學(xué)，2013，32（4）：708.

Determ ination of DEHPReleased from Disposable Venous Nutrition Transfusion Instruments by GC-MS

SHENGWei-yang，SONG M in-xin，JIN Xiang-fei，SHIWen-li（School of Science，China Pharmaceutical University/Key Lab of Drug Quality Control and Pharmacovigilance，M inistry of Education，Nanjing 210009，China）

OBJECTIVE：To establish themethod for the determination of the dissolution of di（2-ethyl hexyl）phthalate（DEHP）from disposable venous nutrition transfusion instruments.METHODS：GC-MS analysis was performed.Using dibutyl phthalate as internal standard，the determination was performed on Rtx-5 MS column w ith injector temperature of 300℃using helium as carrier gas by temperature programming：initial temperature 200℃，increasing to 280℃at rate of 15℃/min maintained for 5 min.EI ion source was adopted w ith temperature of 250℃in acquisitionmode；the injector temperature was set at 280℃.The ion monitoring mode was SIM，and the selected ion wasm/z149.RESULTS：The linear range of DEHPwas 0.2-30μg/m l（r＝0.999 8）w ith an average recovery of 102.4%（RSD＝4.23%，n＝3）.The detection limit was 0.01μg/m l，and the limit of quantification was 0.04μg/m l.RSD of precision testwas 2.7%（n＝5）.The dissolution of DEHPwere 0.547-17.400 mg at room temperature for 24 hours.The dissolution of DEHPwere 8.779-10.620 mg after 24 h simulated use in the clinic，which were notmore than the limit of tolerance intake（30 mg）.CONCLUSIONS：Themethod is simple，rapid and accurate，and can be used for the determ ination of DEHP released from disposable venous nutrition transfusion instruments.

Disposable venous nutrition transfusion instruments；Di（2-ethyl hexyl）phthalate；GC-MS

R972；R979.9

A

1001-0408（2014）17-1568-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.17.10

＊副教授，博士。研究方向：儀器分析與藥物質(zhì)量控制。電話：025-86185380。E-mail：wyshen@hotmail.com

2013-11-11

2014-01-21）