古寧艷，楊少軍，王 歡

（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000； 2.甘肅省中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000； 3.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期階段，其發(fā)展為肝硬化的危險性比單純脂肪肝高［1］。目前其發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，缺乏有效的臨床治療藥物。本研究旨在觀察“慈菇消脂丸”對酒精性脂肪肝大鼠肝臟形態(tài)學(xué)、血脂及肝功能的影響，以進(jìn)一步探討“慈菇消脂丸”調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康成年SD雄性大鼠72只，體重為（200±20）g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK2004-006。

1.1.2 藥品與試劑 慈菇消脂丸（濃縮型），主要由山慈菇、澤瀉、山楂、丹參、土鱉蟲、柴胡、黃芩、法半夏、決明子等15味藥物組成（甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心提供，生產(chǎn)批號：071217）。羅格列酮片：成都恒瑞制藥有限公司（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)號H20041399，批號：20090422）。MA-100A型酶標(biāo)儀（杭州博特儀器設(shè)備有限公司），TG、TC、ALT、AST、堿性磷酸酶測定為廈門惠嘉生物科技公司ELISA試劑盒。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模及分組 按文獻(xiàn)方法，取SD雄性大鼠62 只，體重（200±20）g，每日給予大鼠標(biāo)準(zhǔn)食物和飲用水各2次，保持光照和避光循環(huán)飼養(yǎng)各12 h。將所有大鼠以隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只為正常組，每日灌胃生理鹽水4 mL。其余52只采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：給予大鼠40%乙醇8 g/（kg·d）灌胃，每日2次，間隔8 h，至第4周末。第5周開始，將乙醇濃度增至50%乙醇10 g/（kg·d），至第8周末隨機(jī)處死造模大鼠2只，取出肝臟做病理切片，檢測證實(shí)模型復(fù)制成功。造模成功后，正常組繼續(xù)每日灌胃生理鹽水4 mL，造模的50只大鼠按體重大小排列，通過隨機(jī)數(shù)字法分為模型組、陽性對照組、慈菇消脂丸組（包括高劑量、中劑量、低劑量組）5組，繼續(xù)酒精灌胃4 w，并分別灌服相應(yīng)藥物。實(shí)驗(yàn)期間觀察體重、飲食。

1.2.2 給藥 造模完成后，按人與大鼠體表面積比折算成等效劑量。慈菇消脂丸高劑量組按10倍量即3.75 g/100 g體重，慈菇消脂丸中劑量組按5倍量即1.88 g/100 g體重，慈菇消脂丸低劑量組按2倍量即0.75 g/100 g體重，陽性對照組：0.1 g/100 g體重。慈菇治療組（高、中、低組）及陽性對照組均灌胃給藥4 w，每天1次。灌胃體積為1 mL/100 g。正常組每日灌胃等劑量的生理鹽水。

1.2.3 處理方法 末次給藥后，大鼠禁食12 h，飲水不限，稱大鼠體重。大鼠處死后，股主動脈采血制備血清；作腹部正中切口打開腹腔，迅速取出肝臟，稱重，觀察大體外觀后，取肝左葉相同部位0.5 g放入10%多聚甲醛中，供HE染色以及做免疫組化用。保存在-80℃冰箱中。

1.2.4 觀察指標(biāo) 血脂TG、TC、肝功能ALT、AST、堿性磷酸酶等指標(biāo)均采用酶聯(lián)免疫法（ELISA），嚴(yán)格按說明書操作。光鏡下評估肝脂肪變性程度，判斷標(biāo)準(zhǔn)按照脂變細(xì)胞占肝細(xì)胞的百分比進(jìn)行程度分級。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，所有指標(biāo)以（s）表示，組間比較采用兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 慈菇消脂丸對酒精性脂肪肝大鼠血清AST、ALT水平的影響

結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清AST、ALT水平比較 （s）

表1 各組大鼠血清AST、ALT水平比較 （s）

注：與正常組比較，1）P＜0.05）；與模型組比較，2）P＜0.05

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從表1可知，模型組大鼠的血清AST、ALT水平明顯增高，與模型組比較，陽性對照組、慈菇消脂丸中、高劑量組大鼠血清AST、ALT水平顯著降低，低劑量組大鼠血清AST明顯降低（P＜0.05）。慈姑化脂丸各劑量組與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明二者降脂作用相當(dāng)。

2.2 慈菇消脂丸對酒精性脂肪肝大鼠血脂水平的影響

結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠血清TC、TG水平的影響 （s）

表2 各組大鼠血清TC、TG水平的影響 （s）

注：與正常組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05

組別 n 劑量（g/kg）TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）

從表2可知，酒精性脂肪肝大鼠的血脂TC、TG、LDL-C水平明顯增高，慈菇消脂丸對于調(diào)節(jié)模型大鼠的血脂水平具有顯著療效。與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 各組大鼠肝臟病理學(xué)變化

2.3.1 大體觀察 肉眼觀察正常組大鼠肝臟形態(tài)正常。模型組大鼠肝臟外觀呈彌漫性腫大，表面色澤蒼白或帶灰黃色，包膜緊張，邊緣鈍而厚，質(zhì)如面團(tuán)，壓迫時出現(xiàn)凹陷，切面油膩狀。與模型組相比，各劑量組大鼠肝脂肪變性程度均有不同程度的改善。

2.3.2 HE染色光鏡觀察 正常組：肝小葉內(nèi)無脂肪變性炎癥和壞死。模型組：肝小葉內(nèi)出現(xiàn)大量脂肪變性，匯管區(qū)伴有炎細(xì)胞浸潤以及部分點(diǎn)狀肝細(xì)胞壞死。慈菇消脂丸各劑量組，肝臟脂肪變性和炎癥均有不同程度的減輕。與正常組比較，模型組大鼠肝臟脂肪變性程度明顯增高（P＜0.01）。與模型組相比，慈菇消脂丸低、中劑量組脂肪變性程度有所降低（P＜0.05），慈菇消脂丸高劑量組和陽性對照組脂肪變性程度明顯降低（P＜0.01）。結(jié)果見圖1、表 3。

3 討論

慈菇消脂丸（濃縮型）主要由山慈菇、澤瀉、決明子、何首烏、丹參等15味藥物組成，有化痰解毒、消脂散結(jié)、逐瘀通絡(luò)功效。方中君藥山慈菇主要起化痰降脂作用。藥理研究證實(shí)，丹參有改善微循環(huán)、抗氧化、抗自由基、促進(jìn)肝脾回縮的作用；澤瀉可抑制外源性TG、TC的吸收，影響內(nèi)源性TC及抑制肝內(nèi)TG的合成；決明子可升高HDL，降低TC，抗血小板聚集，軟化血管，抗脂肪肝。何首烏對大鼠實(shí)驗(yàn)性脂肪肝過氧化脂質(zhì)含量上升有顯著對抗作用，能使血清游離脂肪酸（FFA）及肝臟過氧化脂質(zhì)顯著下降；其所含的蒽醌類化合物還能促進(jìn)腸蠕動，抑制膽固醇在腸道再吸收，并促進(jìn)膽固醇代謝［2］。

圖1 各組肝組織病理學(xué)變化（HE×40）

表3 各組大鼠肝臟脂肪變性程度

ALT和AST是反映肝細(xì)胞損害的常用的酶學(xué)檢查指標(biāo)。ALT主要分布于細(xì)胞質(zhì)，而AST主要分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體，是一種線粒體酶，極易受到酒精的影響［3］。這可能與乙醇易造成線粒體腫脹、損傷，使大量存在于線粒體中的AST進(jìn)入周圍循環(huán)系統(tǒng)有關(guān)，因此酒精性脂肪肝引起AST升高往往比較明顯。轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損害最敏感的指標(biāo)，反映肝細(xì)胞壞死的程度，其嚴(yán)重程度直接關(guān)系到酒精性肝病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸［4］。

本研究結(jié)果顯示，酒精性脂肪肝大鼠模型血脂、肝功能肝臟脂肪變性指標(biāo)在慈姑消脂丸治療后顯著改善，對TC、TG、HDL-C及LDL-C均有不同程度的改善，能夠減輕肝細(xì)胞脂肪變性，從而起到對酒精性脂肪肝的防治作用。

［1］Hoek J B，Pastorino J.Cellular signaling mechanisms inalcoho-l induced liver damage［J］.Semin Liver Dis，2004，24（3）：257-272.

［2］孟陸亮，楊少軍，白洲霞，等.慈菇消脂丸對脂肪肝大鼠脂代謝和超氧化物歧化酶的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2009，37（5）：23.

［3］French S W.Mechanisms of alcoholic liver injury［J］.Can J Gastroenterol，2000，14（4）：327-332.

［4］于學(xué)美，韓濤，崔西泉，等.補(bǔ)益肝氣方藥對酒精性脂肪肝模型大鼠TNF-α 含量的影響［J］.泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，28（11）：841-843.