王曉亮，李紹剛，李賽飛，康旭，汪亞航，王軍，王東海，金來(lái)倫

（奉化市人民醫(yī)院，奉化 315500）

Bmi－1（B cellspecific moloney murine leukemia virus insertion site1）是多梳基因家族（Polycomb group，PcG）成員中的轉(zhuǎn)錄抑制因子，參與細(xì)胞增殖調(diào)控［1］。本研究通過(guò)檢測(cè)Bmi－1在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)，探討其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機(jī)選擇2001年1月～2005年12月符合美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）乳腺癌分期（第6版）的女性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌病例60例。全部病例術(shù)前均無(wú)放療、化療及其他治療病史，年齡25～87歲，平均年齡 （55±12.9）歲。Luminal A 型 29 例，Luminal B型11例，HER2過(guò)表達(dá)型6例，Basallike型14例；腫塊大?。?.22±1.39）cm，T1 18例，T2 38例，T3 4例；淋巴結(jié)N0 35例，N1 15例，N2 10例；TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期36例，Ⅲ期10例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移12例，隨訪(fǎng)期間死亡9例。

1.2 試劑與方法

乳腺癌組織標(biāo)本均經(jīng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）、E－cadherin、P120和Ki－67，每例乳腺癌組織病理切片均由兩位專(zhuān)家確認(rèn)診斷為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。癌旁乳腺組織取自上述60例標(biāo)本距癌組織3cm以上乳腺組織。

鼠抗人單克隆抗體Bmi－1購(gòu)自美國(guó)SantaCruz公司，ER、C－erbB－2、PR、E－cadherin、P120和 Ki－67均購(gòu)自福州邁新生物開(kāi)發(fā)公司。

采用免疫組織化學(xué)SP法。將標(biāo)本連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，經(jīng)3%的H2O2消解內(nèi)源性過(guò)氧化物酶后，高壓抗原修復(fù)，一抗（鼠抗人 Bmi－1、C－erbB－2、ER、PR單克隆抗體）、二抗（生物素標(biāo)記）作用后，用DAB顯色，蘇木精復(fù)染后脫水透明，常規(guī)中性樹(shù)膠封固后顯微鏡下觀察。以PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定

Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒。隨機(jī)取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分率。染色結(jié)果根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比率分為4個(gè)等級(jí)，陰性：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%；弱陽(yáng)性：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為5%～25%；中陽(yáng)性：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為26%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%。根據(jù)這4個(gè)等級(jí)（陰性＝－；弱陽(yáng)性＝＋；中陽(yáng)性＝＋＋；強(qiáng)陽(yáng)性＝＋＋＋）的表達(dá)水平評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，并采用Spearman相關(guān)性分析，顯著性水準(zhǔn)a＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 Bmi－1蛋白在癌旁乳腺組織和乳腺癌組織中的表達(dá)

乳腺癌組織中Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒（見(jiàn)圖1），也有少量胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒。在60例癌旁乳腺組織中，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)10例；在60例乳腺癌組織中，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)53例。Bmi－1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在癌旁乳腺組織中和乳腺癌組織中分別為16.7%和88.3%，兩者表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 Bmi－1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

60例乳腺癌標(biāo)本，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在淋巴結(jié)N0、N1、N2中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，R＝0.339）；Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在 T1、T2、T3分別為72.2%、94.7%、100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，R＝0.431）；Bmi－1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在TNM分期Ⅰ期64.3%、Ⅱ期94.5%、Ⅲ期100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，R＝0.360）；Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中分別為85.4%、100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，R＝0.302）；而B(niǎo)mi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)在乳癌相關(guān)基因ER、PR、CerbB－2中，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1）。

表1 Bmi－1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

圖1 乳腺癌組織中Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)

3 討論

Bmi－1是PcG家族成員之一，調(diào)控細(xì)胞的增殖［1］，對(duì)哺乳動(dòng)物的骨骼、神經(jīng)發(fā)育及造血有重要作用［2］。研究［3－5］表明 Bmi－1 在惡性腫瘤如胃癌、肺癌、宮頸癌中高表達(dá)，提示Bmi－1的高表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。因此，高表達(dá)Bmi－1的細(xì)胞被認(rèn)為是“腫瘤干細(xì)胞”，確定Bmi－1的調(diào)控機(jī)制及其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用對(duì)診治惡性腫瘤有重要意義。

Bmi－1調(diào)控機(jī)制可能為：1）Bmi－1協(xié)同c－myc基因作用于腫瘤細(xì)胞，使其逃逸凋亡［6］；2）Bmi－1的下游靶 點(diǎn) 是INK4a－ARF 位 點(diǎn)［7］，Bmi－1 通過(guò)抑制 p 16INK4a的腫瘤抑制通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［8］；3）Bmi－1激活腫瘤細(xì)胞的端粒酶促使腫瘤細(xì)胞擴(kuò)增［9］。

文獻(xiàn)［10］報(bào)道Bmi－1會(huì)誘導(dǎo)乳腺上皮永生化，本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Bmi－1蛋白高表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)率為88.3%，明顯高于癌旁組織，與馮艷等［11］報(bào)道相符。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)Bmi－1蛋白的高表達(dá)與乳腺癌原發(fā)癌腫大小呈正相關(guān)（P＜0.05，R＝0.431），并與乳腺癌TNM分期之間呈正相關(guān)，即乳腺癌TNM分期越高，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)就越顯著。這說(shuō)明Bmi－1作為癌基因，通過(guò)各種調(diào)控機(jī)制對(duì)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展起重要作用，提示Bmi－1可能成為診斷乳腺癌的新分子標(biāo)志物。

浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是乳腺癌的惡性生物學(xué)行為，也是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間呈正相關(guān)，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)越顯著，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多，與文獻(xiàn)［1］報(bào)道的乳腺癌Bmi－1的高表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)的結(jié)論一致；同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌Bmi－1蛋白在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，表明乳腺癌患者中Bmi－1的高表達(dá)與乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，即轉(zhuǎn)移進(jìn)展越快，Bmi－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)就越顯著。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提示乳腺癌預(yù)后不良，本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)乳腺癌出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移越快時(shí)，其Bmi－1蛋白表達(dá)就越顯著，說(shuō)明Bmi－1在乳腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用，提示Bmi－1可能成為預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的新分子標(biāo)志物。

綜上所述，Bmi－1蛋白的高表達(dá)在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起重要作用，提示Bmi－1可能成為乳腺癌的診斷及預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的新標(biāo)志物。

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