富小珺

（吉林省遼源市食品藥品檢驗所，吉林 遼源 136200）

梯度洗脫法測定雙黃消炎片中鹽酸小檗堿的含量

富小珺

（吉林省遼源市食品藥品檢驗所，吉林 遼源 136200）

目的 建立測定雙黃消炎片中鹽酸小檗堿的含量方法。方法 采用高效液相色譜法，phenomenex 00G-4252-E0 Luna C18 5μm 250× 4.6nm；流動相：乙腈 -0.05mol/L 磷酸二氫鉀（25 ∶ 75）（用磷酸調(diào)節(jié) pH 值至 3.0）作為流動相；檢測波長：345nm；柱溫：30℃。結(jié)果 鹽酸小檗堿線性范圍為 0.08168～0.73512μg，在范圍內(nèi)樣品含量與峰面積呈良好的線性關(guān)系；重復性 RSD ＝ 1.2%（n ＝ 6）；平均回收率為 97.52%RSD=0.6%(n=6)。結(jié)論 本方法穩(wěn)定，可靠，靈敏度高，重現(xiàn)性好，方法操作簡便易行，可用于雙黃消炎片的質(zhì)量控制。

雙黃消炎片；鹽酸小檗堿對照品；HPLC；含量測定

三顆針為方中主藥，主要含小檗堿、小檗胺，具有清熱燥濕、瀉 火 解 毒 的 功 效[1]。 參 照 國 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 局 標 準 （ 試 行 ）YBZ09422004含量測定方法，采用梯度洗脫法測定三顆針中鹽酸小檗堿的含量，方法合理，易于操作，結(jié)果準確，重現(xiàn)性良好。

1 方 法

1.1 儀器與試藥

日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，鹽酸小檗堿對照品（來源：中國藥品生物制品檢定所批號：110713-200208）甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：phenomenex 00G-4252-E0 Luna C185μm 250×4.6nm；流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀（25∶75）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）作為流動相；檢測波長：345nm；柱溫：30℃。

1.3 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，取約0.2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1?100）50mL，稱定重量，60℃水浴加熱15min，取出，超聲30min，放冷，補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[2]。

1.4 進樣方法

由于本方法提取出的化學成分較多，在HPLC中分離時間較長，故采用梯度洗脫法。以乙腈為流動相A，0.05mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流動相B，按表1方法洗脫。

2 方法學考察

2.1 測定波長的選擇

取鹽酸小檗堿對照品加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，經(jīng)紫外分光光度計在250～450nm的波長處進行掃描，選擇其最大波長345nm作為測定波長。

表1 進樣方法

2.2 陰性對照試驗

為進一步考察試驗的合理性，取不含三顆針樣品作為對照樣品，依正文所述方法進行提取測定。結(jié)果，陰性樣品色譜在與鹽酸小檗堿峰相應的保留時間附近未檢出干擾峰，從而證明本方法合理可行(圖1～圖3)。

2.3 線性關(guān)系考查

分別精密吸取對照品溶液（0.04084mg/mL）2、6、10、14、18μL依次注入液相色譜儀，測定，以進樣量（μg）為橫坐標X，鹽酸小檗堿峰面積為縱坐標Y作圖，得一直線，近似通過原點。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.08168～0.73512μg范圍內(nèi)樣品含量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。其線形回歸方程為y=1.7E+5x+10883，相關(guān)系數(shù)γ2=0.9999。

2.4 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液5μL，連續(xù)進樣6次，測定鹽酸小檗堿峰面積積值，RSD=1.0%結(jié)果表明所用儀器具良好的精密性。

2.5 重復性試驗

取同一批號樣品6份，分別獨立按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，分別進樣測定鹽酸小檗堿含量，RSD=1.0%，結(jié)果表明本法具有良好的重復性。

圖1 雙黃消炎片陰性對照品HPLC色譜圖

圖2 雙黃消炎片樣品HPLC色譜圖

圖3 鹽酸小檗堿對照品HPLC色譜圖

表2 回收率試驗

2.6 穩(wěn)定性試驗

取樣品依法制成供試品溶液，依法分別于0、2、5、8、10h進樣測定，RSD=0.8%。結(jié)果表明10h內(nèi)供試品溶液中鹽酸小檗堿的含量基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品約0.25g，精密稱定。精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液（0.1528mg/mL）25.0mL，依法測定，結(jié)果見表2。

如表2所示，測得鹽酸小檗堿的平均回收率為97.52%，RSD＝0.6%。結(jié)果表明本法回收率較好，準確度較高。

3 樣品測定結(jié)果及限度

依正文方法測定9批樣品，結(jié)果見表3。

表3 雙黃消炎片中鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果

測定結(jié)果表明，雙黃消炎片的含量基本穩(wěn)定。

4 原料藥材的含量測定

取三顆針藥材細粉，精密稱定0.1279g，0.1231g，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1?100）50mL，稱定重量，60℃水浴加熱15min，取出，超聲30min，放冷，補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取5μL注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表4。

表4 三棵針中鹽酸小檗堿的測定結(jié)果

5 討 論

5.1 取本品約0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1∶100）25mL，稱定重量，加熱回流提取30min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇（1∶100）補足減失的重量，濾過，精密吸取濾液5mL，加于中性氧化鋁柱（200～300目，4g，內(nèi)徑1～1.5cm）上，用乙醇40mL洗脫，收集洗脫液于50mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。結(jié)果分離效果良好。但由于中性氧化鋁柱對鹽酸小檗堿有一定的吸附性，洗脫不完全，故影響鹽酸小檗堿的收率。

5.2 取重量差異項下的本品，精密稱定，研細，取約0.2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1∶100）50mL，稱定重量，60℃水浴加熱15min，取出，超聲30min，放冷，補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結(jié)果分離效果良好，且收率較高，故采用。

[1]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:66-67.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005:58.

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：1671-8194（2013）03-0058-02