張婕 童雷 曹玨 計(jì)超 陳武榮

[摘要]目的觀察并比較高張鹽和乳酸林格液復(fù)蘇對(duì)失血性休克大鼠急性肺損傷和腸淋巴液的影響。方法將雄性SD大鼠40只分成4組（n=10），分別為假休克組（組Ⅰ）、休克組（組Ⅱ）、乳酸林格氏液組（組Ⅲ）和高張鹽溶液組（組Ⅳ）。復(fù)蘇后比較肺干濕重比和肺組織學(xué)變化，收集并測(cè)定腸淋巴液腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）含量，觀察腸淋巴液對(duì)肺巨噬細(xì)胞的刺激作用。結(jié)果組Ⅱ和組Ⅲ肺干濕重比和組織中白細(xì)胞浸潤(rùn)程度顯著高于組Ⅰ和組Ⅳ，組Ⅱ和組Ⅲ大鼠在休克期及復(fù)蘇后的腸淋巴液TNF-α、IL-1β、IL-6含量及對(duì)肺巨噬細(xì)胞刺激作用均顯著高于組Ⅰ、組Ⅳ。結(jié)論高張鹽溶液復(fù)蘇可降低失血性休克大鼠腸淋巴液促炎作用，減輕失血性休克后的急性肺損傷。

[關(guān)鍵詞]失血性休克；高張鹽；復(fù)蘇；細(xì)胞因子；急性肺損傷

[中圖分類(lèi)號(hào)]R605.971 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721（2012）12（a）-0009-03

失血性休克（HS）患者救治后并發(fā)的多臟器功能障礙（MODS）是失血性休克患者后期的主要死亡原因[1]。急性肺損傷（ALI）是失血性休克后首發(fā)的臟器功能障礙。休克后機(jī)體腸淋巴液內(nèi)腫瘤壞死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白介素-1β（interlukin1β，IL-1β）、白介素-6（interlukin-6，IL-6）等促炎因子升高與ALI發(fā)生有密切關(guān)系[2]。近年來(lái)用7.5%高張鹽溶液（HTS）治療失血性休克具有較好的減輕ALI的作用，體外實(shí)驗(yàn)提示HTS還具有免疫調(diào)節(jié)作用[3]。本文觀察乳酸林格氏液（RL）和HTS復(fù)蘇對(duì)失血性休克后ALI和腸淋巴液的影響。

1材料與方法

1.1材料

健康雄性SD大鼠40只，體重（300±50）g。

1.2方法

1.2.1造模方法 2.5％戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉后，取腹正中切口，分離腸系膜淋巴管并置入腸淋巴引流管，作右頸動(dòng)脈和左頸靜脈插管，監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓（MAP）。上述操作完成并穩(wěn)定60min后，經(jīng)右頸總動(dòng)脈放血，在10min內(nèi)使平均動(dòng)脈壓降低至40mmHg，維持1h建立大鼠失血性休克模型，取出的血液肝素化保存[4]。大鼠分為4組，每組10只，組Ⅰ為假休克組，不做放血處理；組Ⅱ?yàn)閱渭冃菘私M，休克后不予復(fù)蘇；組Ⅲ為乳酸林格氏液復(fù)蘇組，大鼠HS后30min內(nèi)輸入2倍失血量RL和1/2的放血量；組Ⅳ為HTS復(fù)蘇組，大鼠HS后30min內(nèi)輸入7.5%高滲氯化鈉4mL/kg和1/2的放血量。

1.2.2肺組織標(biāo)本和肺巨噬細(xì)胞提取 各組大鼠分別收集休克前、休克時(shí)、復(fù)蘇后2h腸淋巴液。復(fù)蘇后120min靜注戊巴比妥處死大鼠，測(cè)定肺干濕重比并做肺組織病理學(xué)檢查。肺間質(zhì)白細(xì)胞浸潤(rùn)分級(jí)評(píng)分如下：0，無(wú)浸潤(rùn)；1，輕度；2，中度；3，重度[5]。右肺葉做肺灌洗，收集肺巨噬細(xì)胞以RPMI1640營(yíng)養(yǎng)液保存。Wright-Giemsa染色細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定巨噬細(xì)胞比例90%以上，苔盼藍(lán)拒染試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力90%以上[6]。

1.2.3腸淋巴液與肺巨噬細(xì)胞孵育前后TNF-α、IL-1β、IL-6含量測(cè)定 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定上述指標(biāo)。取復(fù)蘇后2h收集的腸淋巴液于4℃低溫離心機(jī)內(nèi)10000g離心20min，上清按說(shuō)明書(shū)置入酶標(biāo)板測(cè)定各數(shù)據(jù)。腸淋巴液用0.9%氯化鈉溶液稀釋至原液5%，取100μL與細(xì)胞濃度為1×106/mL的巨噬細(xì)胞RPMI1640培養(yǎng)液100μL混勻，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育4h。取出培養(yǎng)板于4℃低溫離心機(jī)內(nèi)10000g離心20min，按上法測(cè)定孵育后淋巴液內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6含量[7]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1肺組織損傷比較

組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的肺干濕重比分別為4.2±1.2、6.8±1.8、8.0±1.8、5.1±1.2，組Ⅱ和組Ⅲ大鼠肺干濕重比顯著高于組Ⅰ和組Ⅳ（P<0.05）。肺間質(zhì)白細(xì)胞浸潤(rùn)程度評(píng)分組Ⅱ和組Ⅲ分別為2.40±0.70、2.90±0.32，顯著高于組Ⅰ（0.50±0.53）和組Ⅳ（1.10±0.74）（P<0.01）。

2.2腸淋巴液在復(fù)蘇前后的TNF-α、IL-1β、IL-6變化

組Ⅰ大鼠腸淋巴液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量在實(shí)驗(yàn)期間均無(wú)顯著變化，組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ大鼠休克后TNF-α、IL-1β、IL-6均顯著升高。組Ⅲ大鼠復(fù)蘇2h后IL-1β、IL-6、TNF-α均顯著升高；組Ⅳ大鼠復(fù)蘇后TNF-α、IL-1β、IL-6較休克時(shí)水平均顯著降低，與休克前水平相當(dāng)。各組大鼠休克與復(fù)蘇前后TNF-α、IL-1β、IL-6含量變化見(jiàn)表1。

2.2腸淋巴液與巨噬細(xì)胞孵育前后TNF-α、IL-1β、IL-6變化

休克后2h的腸淋巴液經(jīng)與肺巨噬細(xì)胞孵育后，組Ⅱ和組Ⅲ腸淋巴液內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高，而組Ⅰ和組Ⅳ均無(wú)顯著升高。見(jiàn)表2。

3討論

失血性休克復(fù)蘇效果除與失血速度、失血量和持續(xù)時(shí)間有關(guān)外，還與失血性休克的復(fù)蘇策略相關(guān)[8]。本文失血性休克動(dòng)物模型采用臨床常用的2倍失血量RL聯(lián)合輸血方案和HTS4mL/kg聯(lián)合輸血方案，結(jié)果表明HTS復(fù)蘇明顯減輕休克后ALI的損傷程度，表現(xiàn)為肺干濕重比和肺間質(zhì)白細(xì)胞浸潤(rùn)程度顯著低于RL復(fù)蘇組大鼠。HTS復(fù)蘇組大鼠腸淋巴液中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6在復(fù)蘇后2h其水平與休克前水平相當(dāng)，而RL復(fù)蘇組大鼠腸淋巴液中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6則進(jìn)一步升高，且HTS治療組大鼠腸淋巴液刺激肺巨噬細(xì)胞作用明顯低于RL組和單純休克組大鼠。

失血性休克復(fù)蘇后發(fā)生MODS是休克患者度過(guò)休克期后死亡的主要原因[1]。休克后發(fā)生MODS的機(jī)制目前尚不清楚。根據(jù)休克后MODS發(fā)生的“腸源性學(xué)說(shuō)”[9]，保護(hù)腸黏膜和減輕休克后腸淋巴液的促炎作用可以減輕休克后ALI發(fā)生率及其程度。本文的研究結(jié)果支持這一假說(shuō)。在休克采取HTS復(fù)合部分庫(kù)血復(fù)蘇后，肺的通透性和肺實(shí)質(zhì)白細(xì)胞浸潤(rùn)程度明顯較單純休克組減輕，同時(shí)腸淋巴液內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的水平也明顯降低，提示這兩者之間有一定的相關(guān)性。而采用RL復(fù)合部分庫(kù)血回輸后其肺的通透性及肺實(shí)質(zhì)白細(xì)胞浸潤(rùn)反而較單純休克組更為明顯，且腸淋巴液中各促炎因子水平進(jìn)一步升高，這與CottonBA等[10]的研究結(jié)果一致。RL和HTS同屬晶體液，但對(duì)失血性休克的復(fù)蘇效果存在較大差異。HTS進(jìn)入循環(huán)后通過(guò)滲透壓差異將組織間隙體液回吸收至循環(huán)系統(tǒng)中，有助于減輕組織的水腫，而大劑量的RL等滲液體對(duì)維持循環(huán)作用不明顯，且因微循環(huán)血管通透性升高容易進(jìn)入組織間隙，加重局部組織的缺氧。

小劑量HTS用于失血性休克液體復(fù)蘇不僅具有較好的擴(kuò)容效果，而且HTS具有較好的免疫功能調(diào)節(jié)作用。本文的研究結(jié)果表明，HTS復(fù)蘇后不僅對(duì)腸淋巴液TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的水平有降低作用，且腸淋巴液與肺巨噬細(xì)胞孵育后，對(duì)肺巨噬細(xì)胞的刺激作用也明顯較RL為低，提示HTS減輕肺損傷的作用主要在于其免疫調(diào)節(jié)作用。腸淋巴液被認(rèn)為是休克后腸道誘發(fā)遠(yuǎn)處器官損傷的共同通路，將休克后大鼠的腸淋巴液引流可以消除失血性休克后的ALI[11]，而注射休克后大鼠的腸淋巴液可以誘發(fā)ALI[12]。本文結(jié)果表明，HTS復(fù)蘇組大鼠的ALI程度明顯減輕，而單純休克組和RL復(fù)蘇組大鼠ALI程度則劇烈得多。結(jié)合HTS復(fù)蘇組大鼠腸淋巴液內(nèi)促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平較RL組和單純休克組顯著降低，且腸淋巴液與肺巨噬細(xì)胞孵育后TNF-α、IL-1β、IL-6水平也顯著低于RL組和單純休克組，筆者推測(cè)HTS不僅可以減輕腸淋巴液內(nèi)促炎因子的生成，同時(shí)也可調(diào)控肺巨噬細(xì)胞的免疫活性強(qiáng)度，從而起到減輕休克后ALI發(fā)生發(fā)展的作用。

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（收稿日期：2012-08-06 本文編輯：陳 ?。?/p>