丁麗娜劉亮陳東林高玉瓊劉建華曾富佳

1．遵義醫(yī)藥高等?？茖W校，貴州 遵義 563002;2．貴州省生物基地，貴州 貴陽 550002

短柄南蛇藤不同部位的總黃酮含量測定

丁麗娜1劉亮1陳東林1高玉瓊2劉建華2曾富佳1

1．遵義醫(yī)藥高等?？茖W校，貴州 遵義 563002;2．貴州省生物基地，貴州 貴陽 550002

目的:建立短柄南蛇藤總黃酮含量測定的方法，對短柄南蛇藤各部位總黃酮含量進行對比研究。方法:以蘆丁為對照品，超聲波提取和三氯化鋁法顯色，采用紫外分光光度法在417nm處測定短柄南蛇藤不同部位的總黃酮含量。結(jié)果:蘆丁的線性范圍為2.40～25.16μg/mL，回歸方程A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(n=6);平均加樣回收率為101.2%，RSD=2.22%。不同部位總黃酮含量由高至低依次為:種子＞葉＞根皮＞果殼＞假種皮＞莖。結(jié)論:該文首次測定短柄南蛇藤總黃酮含量，并對不同部位總黃酮含量進行對比研究。

短柄南蛇藤;總黃酮;含量測定;紫外分光光度法

短柄南蛇藤(Celastrus rosthornianus Loes)為衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物，分布于我國大部分地區(qū)，其根、莖葉、果實等均可入藥，根及莖葉可治療治風濕疼痛，跌打損傷，疝氣痛，瘡瘍腫毒，帶狀皰疹，濕疹，毒蛇咬傷;果實可寧心安神，主治失眠多夢［1］。該植物主要有倍半萜、三萜及其衍生物、生物堿、黃酮類化合物等，黃酮化合物主要存在于南蛇藤屬植物的葉、翅中，是抗炎、抗氧化活性成分［2－6］。目前關(guān)于短柄南蛇藤總黃酮含量測定未見報道。根據(jù)文獻資料，短柄南蛇藤分不同的部位入藥，其不同部位的功效、劑量、毒性都有一定的差別。本文采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品對短柄南蛇藤中總黃酮的含量測定進行了方法學的考察，并對不同部位的總黃酮含量進行對比研究，為短柄南蛇藤的進一步開發(fā)利用提供參考數(shù)據(jù)，充分發(fā)揮該植物的藥用潛力。

1 儀器和試藥

SYFM－8Ⅱ型微粉碎機(濟南松岳機器有限責任公司);202－00臺式電熱恒溫干燥箱(中國天津泰斯特儀器有限公司);AL－204型電子天平(上海梅特勒－托得多儀器有限公司);KQ－500DE型醫(yī)用超聲波清洗機(昆山超聲儀器有限公司);TU－1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

短柄南蛇藤(采自貴州鎮(zhèn)遠地區(qū)，經(jīng)貴陽中醫(yī)學院孫慶文老師鑒定為衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物短柄南蛇藤Celastrus rosthornianus Loes)。樣品按不同部位分離，得到根皮、莖、葉、果殼、假種皮、種子六個部位，自然晾干，粉碎過80目篩，得到短柄南蛇藤不同部位的粉末，干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆?。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，100080－200306)，實驗中所使用的試劑均為國產(chǎn)分析純試劑，重蒸水為本實驗室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

分別精密稱取短柄南蛇藤不同部位的干燥粉末2g，置于錐形瓶中，加入30mL60%乙醇溶液，浸潤后，超聲提取60分鐘，過濾，濾液置100mL容量瓶中，用60%的乙醇定容，搖勻，得供試品溶液，備用。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的蘆丁對照品0.0150g于50mL容量瓶中，用30%乙醇溶解定容至刻度，搖勻，作為對照品溶液(每1mL含蘆丁0.3mg)。

2.3 檢測波長的選擇

分別精密量取供試品溶液、對照品溶液各5mL分別置于25mL容量瓶中，加入1ml 0.5mol/L的三氯化鋁溶液，搖勻，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液定容，搖勻，超聲處理5min。在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描吸收曲線(以不加黃酮樣品的試劑空白做參比)，蘆丁標準溶液、供試品溶液顯色后都在417nm處有最大吸收，故以417nm波長為測定波長。

2.4 標準曲線的繪制［7］

分別精密量取0.3mg/mL蘆丁對照品溶液0.2mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL于25mL容量瓶中，分別加入1mL0.5mol/L的AlCl3溶液，搖勻，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液定容，搖勻，超聲振蕩5min后以PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液為參比，于417nm處測定吸光度。結(jié)果如圖1，蘆丁回歸方程為A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(其中C為蘆丁濃度μg/mL;A為吸光度)，在2.40～25.16μg/mL濃度范圍內(nèi)呈線性。

圖1 三氯化鋁顯色后蘆丁的標準曲線

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液5mL，按“2.4”項下操作測定吸光度，每隔5分鐘測一次，共6次，RSD為1.61%，在30min內(nèi)樣品溶液的穩(wěn)定性較好，時間延長，樣品吸收度下降較多，故選擇測定時間在30min以內(nèi)。

2.6 精密度試驗

精密量取樣品液5mL6份于25mL容量瓶中，按“2.4”項下操作測定吸光度，總黃酮含量RSD為1.21%，表明該法的精密度較好。

2.7 重現(xiàn)性試驗

精密稱取同批果殼粉末2.0g，平行6份，按照“2.1”項下制備供試品溶液，按“2.4”項下操作測定吸光度，總黃酮含量RSD為2.35%，證明該方法的重現(xiàn)性較好。

2.8 加標回收率試驗

精密稱取短柄南蛇藤果殼粉末2.0g，平行9份，按“2.1”項下處理，精密量取5mL的樣品溶液，分別加入新配置不同量的蘆丁標準品(0.3mg/mL)(每個加標量級別3個平行樣)，搖勻，按“2.4”項下操作測定吸光度，總黃酮含量平均回收率為101.2%，RSD為2.22%，測得結(jié)果均在95%～105%之間，說明總黃酮的提取和檢測方法可行。

表1 加標回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品的含量測定

按“2.4”項下對“2.1”項下制備的各部位供試品溶液進行測定，計算總黃酮含量，結(jié)果見表2。不同部位總黃酮含量由高至低依次為:種子＞葉＞根皮＞果殼＞種皮＞莖。

表2 不同部位總黃酮含量測定結(jié)果(mg/g，X=∑Xi/n，n=3)

3 小結(jié)

本實驗以蘆丁為對照品，采用超聲波提取和三氯化鋁法顯色，對短柄南蛇藤中總黃酮的含量測定進行了方法學考察，實驗過程中嚴格控制時間，顯色后30min內(nèi)測定。本法操作簡單，精密度高，重復性和回收率效果較好，測得的總黃酮含量也較為合理，為短柄南蛇藤的質(zhì)量控制提供了新的有效手段。實驗結(jié)果顯示，短柄南蛇藤六個不同部位所含的總黃酮不同，種子中的總黃酮含量最高，其次是葉、根皮、果殼、種皮，莖中含量較少，為該藥材的深度開發(fā)和利用提供了參考依據(jù)。

［1］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草編委會》．中華本草［M］．上海:上海科學技術(shù)出版社，1999，5:175～176．

［2］ Kui－wu Wang，Cui－rong Sun，Xiao－dan Wu．Novel bioactive dammarane caffeoyl esters from Celastrus rosthornianus［J］．Planta Med，2006 Mar，72(4):370－2．

［3］ 張艦，劉延慶．南蛇藤屬植物的化學成分與藥理作用［J］．國外醫(yī)藥(植物藥分冊)，2005，20(5):197－199．

［4］ Kui－wu Wang．A new fatty acid ester of triterpenoid from Celastrus rosthornianus with anti－tumor activitives［J］．Nat Prod Res，2007 Jun，21(7):669－74．

［5］ Kui－wu Wang．A new tritepenoidal ester from Celastrus rosthornianus［J］．Fitoterapia，2008，2:9．

［6］ 高玉瓊，丁麗娜，趙德剛等．短柄南蛇藤葉微粉與普通粉揮發(fā)油化學組成的對比研究［J］．中山大學學報(自然科學版)，2009，(48)2:45－47．［7］陳叢瑾，黃克瀛，李德良等．AlCl3顯色分光光度法測定香椿葉中總黃酮［J］．分析實驗室，2006，25(12):91－94．

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0056－02

丁麗娜(1981)，女，漢族，碩士學位，主要從事天然藥物化學成分及質(zhì)量研究。

曾富佳(1986－)，女，漢族，碩士學位，主要從事天然藥物生物活性研究。

2012.05.18)