徐文莉，廖長征，李 康（廣東省深圳市龍崗中心醫(yī)院 518116）

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是存在于神經(jīng)細(xì)胞中的一種糖酵解酶，與細(xì)胞的分解、成熟有關(guān)，參與神經(jīng)細(xì)胞的能量代謝，神經(jīng)細(xì)胞受損后，NSE隨細(xì)胞的崩解而釋放入血液中，成為細(xì)胞受損的重要標(biāo)志［1］。多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如腦腫瘤、腦外傷、細(xì)菌性腦膜炎、病毒性腦炎、結(jié)核性腦膜炎患者中發(fā)現(xiàn)血液中NSE濃度升高，并且與腦損傷關(guān)系密切［2］，同時NSE又可作為小細(xì)胞肺癌的一個診斷［3］。檢測結(jié)果受溶血、時間以及溫度的影響［4－5］，其結(jié)果的真實(shí)性文獻(xiàn)報道和可靠性受到影響。尋找有效的控制方法，對分析質(zhì)量是十分重要的。本實(shí)驗(yàn)旨在探討樣本前處理對NSE檢測的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年3月來門診健康體檢者30例，男15例，女15例。

1.2 儀器與試劑 Roche E170全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑、校準(zhǔn)品由該儀器廠家提供，質(zhì)控品為BIO－RAD質(zhì)控。

1.3 方法 （1）每例采集靜脈血標(biāo)本2份，并立即送入本科室，標(biāo)本分為兩組，A組將標(biāo)本左右搖動后離心，B組不搖動直接離心，3 000r／min離心5min，離心完畢后，從B組吸取200 μL血清后，血清組為B1組，在用加樣器的槍頭將其打勻，然后再對B組離心，此組命名為B2組，所有標(biāo)本離心在1h內(nèi)完成。（2）儀器準(zhǔn)備及檢測：BIO－RAD質(zhì)控進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，確定其儀器狀態(tài)穩(wěn)定后，再分別檢測樣本NSE含量，重復(fù)檢測2次，取均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組NSE測定結(jié)果 3組NSE測定結(jié)果分別是：A組（18.533±3.253）ng／mL、B1組（10.360±2.129）ng／mL、B2組（14.223±2.805）ng／mL。A組與B1組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A組、B1組與B2組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 3種方法NSE測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖 見圖1。

圖1 3種方法NSE測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖

3 討 論

1965年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了一種大量存在于腦組織中但并不存在于非神經(jīng)組織中的可溶性酸性蛋白質(zhì)，后來人們發(fā)現(xiàn)此種蛋白質(zhì)特異性存在于神經(jīng)元中，具有烯醇化酶活性，故將其命名為 NSE［6］。

NSE是烯醇化酶基因超家族成員之一，是糖酵解的重要酶，主要參與糖酵解，可催化2－磷酸甘油裂解生成磷酸烯醇式丙酮酸和水，對體內(nèi)糖代謝和三磷酸腺苷的產(chǎn)生具有重要作用。烯醇化酶由α、β、γ3種亞基以二聚體的形式組成5種同工酶。其同工酶可分為αα、ββ、γγ、αβ、αγ。其中γ亞基主要存在于神經(jīng)組織中，γγ、αγ組成的同工酶特異的存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞漿中［7］。NSE是一種重要的腫瘤標(biāo)志物，在小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、Whims瘤、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤中均可有表達(dá)。其中NSE水平升高以小細(xì)胞肺癌最為顯著［3］，同時血清NSE是腦損傷特異性標(biāo)志物，其含量對腦細(xì)胞及血管損傷程度和預(yù)后具有臨床實(shí)用價值［2］，所以檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性對臨床診斷非常重要。有關(guān)NSE臨床意義方面的文章報道較多，但對NSE檢測結(jié)果影響因素方面的文章較少，文獻(xiàn)報道溫度、時間、溶血對NSE檢測結(jié)果有影響。溫度和時間這2個方面的因素可以較好地控制，但影響溶血方面的因素往往控制不夠。實(shí)驗(yàn)室在取到標(biāo)本離心后，一般通過肉眼觀察標(biāo)本是否有溶血，但較輕的溶血通過肉眼是很難識別的，往往認(rèn)為合格的標(biāo)本才進(jìn)行檢測。本研究處理標(biāo)本時采用了不同的處理方法，采集的血清經(jīng)肉眼觀察，判斷不出是否溶血，然后對其上機(jī)檢測。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A組結(jié)果最高，可能原因在于樣本左右搖動對細(xì)胞損傷較大，細(xì)胞中的NSE進(jìn)入到血清中。由此可見標(biāo)本的處理對NSE的檢測結(jié)果具有較大的影響，可導(dǎo)致假陽性，因此在標(biāo)本處理過程中要注意。本實(shí)驗(yàn)中只采集了健康人標(biāo)本，標(biāo)本處理方法影響大，但未采集患者標(biāo)本，處理方法對其影響有多大目前尚不清楚，以后的工作應(yīng)采集患者標(biāo)本為臨床提供更有效的數(shù)據(jù)。

在臨床工作中，使用普通真空管采集標(biāo)本較多，血清分離時間較長［8］，但NSE標(biāo)本要即時分離血清，檢驗(yàn)人員取到標(biāo)本后，往往將標(biāo)本左右搖動再離心，或者直接離心，但離心后血清中有血凝塊，用加樣器吸走然后吹打，再離心，有可能導(dǎo)致NSE結(jié)果偏高產(chǎn)生假陽。不同人員在處理標(biāo)本時，搖動的力度可能不同，對細(xì)胞的損傷程度也不一，結(jié)果可能不同，本實(shí)驗(yàn)提示在處理標(biāo)本時，不要對標(biāo)本搖動或吹打。在檢驗(yàn)實(shí)踐中，檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性除受檢驗(yàn)方法靈敏度、精確度和影響外，來自標(biāo)本自身的影響也是一個不可忽視的因素，同時為標(biāo)本的處理提供了規(guī)范性的操作。

［1］ 李洪智.乙腦患兒血清和腦脊液中NSE含量變化與臨床的關(guān)系［J］.中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2011，14（8）：12－15.

［2］ Dalal I，Tzhhori S.Cytokine profile in celebrospinal fluid in children wit h epidemic encephalitis B［J］.Pediatr Neurol，2010，38 （3）：312－317.

［3］ 楊上英，曹穎平.肺癌腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，29（11）：1010.

［4］ 張林.驗(yàn)證溶血對NSE檢測結(jié)果的影響［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2011，15（10）：1238－1239.

［5］ 張亞松，肖登巖，麥富巨.溫度、時間及溶血對全血標(biāo)本中NSE測定的影響［J］.醫(yī)學(xué)臨床研究，2008，25（7）：1193－1197.

［6］ 邱全曜，繆明永.神經(jīng)元特異性烯醇化酶［J］.生命的化學(xué)，2008，28（4）：439－442.

［7］ Tracy MR.Neuron－specific enolase is increased after non con vul sive status epilepticus［J］.Mol Biol，2009，341（4）：1015－1021.

［8］ 楊九華，劉萬利，呂禮應(yīng).分離膠真空采血管樣本保存時間對血糖測定結(jié)果的影響［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2010，4（5）：550－551.