張敏娜 杭州市腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科 杭州 310002

張永華 杭州市第七人民醫(yī)院

隨著我國居民生活方式、膳食結(jié)構(gòu)的改變和酒類產(chǎn)量及品種的增加，自然人群中嗜酒者比例呈上升趨勢，酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）的發(fā)病率高達(dá)20%[1]。ALD已成為我國僅次于病毒性肝炎的第二大肝臟疾患[2]。目前西醫(yī)治療該病以戒酒、對癥支持治療為主，而中醫(yī)在防治該病方面有獨(dú)特之處。本實(shí)驗(yàn)旨在通過檢測大鼠急性酒精性肝損傷后肝組織和胃黏膜ADH活性及不同時(shí)間點(diǎn)血漿乙醇濃度的變化，探討枳椇云母湯對急性酒精性肝病的保護(hù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 清潔級SD大鼠60只，體質(zhì)量200～250 g，雄性，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號為 SYXK（浙）2008－0074。

1.2 藥物及制備 枳椇子（產(chǎn)地：陜西，由杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院中藥房提供）適量加2倍量水浸泡8h，再加水煎煮兩次，第一煎加4倍量水，煎煮30～45 min，第二煎加2倍量水，煎煮30 min，煎液合并，濾過，濃縮；枳椇子濃縮液加蒸餾水配制成生藥含量0.3 g/mL濃度備用。硫普羅寧腸溶片（商品名：凱西萊，批號081006，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司）研磨成細(xì)粉，用蒸餾水充分混勻，溶液濃度1.7 mg/mL。云母粉（批號浙Y20000072，杭州桐君堂醫(yī)藥藥材有限公司）用蒸餾水充分混勻，生藥含量0.25 g/mL；56%紅星二鍋頭酒（批號GB/T10781.2－2006，北京紅星股份有限公司）。

1.3 試劑及儀器 ADH檢測試劑盒（南京建成生物技術(shù)研究所，批號20090220）。0412－1型臺(tái)式低速離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)）；5810R冷凍型臺(tái)式大容量高速離心機(jī)（德國eppendorf股份公司生產(chǎn)）；Agilent6890N氣相色譜儀（美國－德賽威有限公司生產(chǎn)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模及給藥 60只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、全方組（枳椇云母組）、拆方組（云母組、枳椇子組）、對照組（凱西萊組），每組10只。正常組每天定時(shí)以1.4 mL/100g生理鹽水灌胃，45 min后再次給予生理鹽水1 mL/100g灌胃；其余各組分別定時(shí)以1.4 mL/100g二鍋頭灌胃，45 min后模型組給予生理鹽水1 mL/100g灌胃；枳椇云母組給予枳椇云母液1 mL/100g灌胃；枳椇子組給予枳椇子液1 mL/100g灌胃；云母組給予云母液1 mL/100g灌胃；對照組給予凱西萊溶液1 mL/100g灌胃。均在正常飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上造模10天[3-4]。

2.2 標(biāo)本采集 造模最后1天禁食12 h，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果血乙醇濃度的峰值在給酒后2 h～2.5 h，因此在最后一次給藥后1 h，除正常組外，其余各組大鼠眼球采血2 mL，0.5 h后（即給藥后1.5 h）再次采血2mL，分別放入肝素鈉抗凝管內(nèi)，待測。大鼠稱重，用10%戊巴比妥（0.3 mL/100g）麻醉后，取肝右葉組織約0.5g左右，預(yù)冷的生理鹽水沖洗后濾紙吸干，稱重，制成10%組織勻漿，離心后取上清液；將胃組織沖洗后刮取胃體部胃黏膜組織，濾紙吸干稱重，制成10%組織勻漿，離心后取上清液，待測。

2.3檢測指標(biāo)及方法

2.3.1 肝組織和胃黏膜ADH活性 采用分光光度連續(xù)比色法測定，按試劑盒說明操作。

2.3.2 血漿乙醇濃度測定 采用頂空氣相色譜儀檢測，然后將乙醇濃度對各自峰面積進(jìn)行線性回歸A=0.0065C+0.0246，求出相關(guān)系數(shù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般情況 正常組大鼠毛色光澤，精神狀態(tài)良好，飲食、二便及體質(zhì)量增長正常；模型組大鼠毛色差、缺少光澤，倦臥少動(dòng)，食量減少，大便溏，體質(zhì)量增長慢；全方組、拆方組、對照組均有不同程度的倦臥少動(dòng)、食量減少、大便稀溏。

3.2 各組肝組織及胃黏膜ADH活性比較 實(shí)驗(yàn)后模型組大鼠肝組織及胃黏膜ADH活性高于正常組（P＜0.05）；枳椇云母組肝組織及胃黏膜ADH活力與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與拆方組（枳椇子組、云母組）、對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；拆方組（枳椇子組、云母組）與模型組比較，肝組織和胃黏膜ADH活性明顯升高（P＜0.05），與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1各組大鼠肝組織和胃黏膜ADH活性比較（±s）U/mgprot

表1各組大鼠肝組織和胃黏膜ADH活性比較（±s）U/mgprot

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比較，▲P＜0.05；與枳椇云母組比較，☆P＜0.05

組 別 n/只正常組 10模型組 10肝組織1.06±0.04 1.50±0.06*胃黏膜0.78±0.07 1.10±0.04*枳椇子組 10 1.65±0.07△☆云母組 10 1.61±0.08△☆1.20±0.07△☆1.22±0.04△☆枳椇云母組 10 1.72±0.05▲△△對照組 10 1.59±0.06△1.38±0.06▲△△1.19±0.09△

3.3 各組大鼠血漿乙醇濃度比較 給藥后1h、1.5h，枳椇云母組、拆方組（枳椇子組、云母組）、對照組血中乙醇濃度明顯低于模型組（P＜0.05，P＜0.01）；與對照組比較，枳椇云母組血中乙醇濃度明顯降低（P＜0.01）；拆方組（枳椇子組、云母組）則無明顯差異（P＞0.05），見表 2。

表2各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血漿乙醇濃度比較（±s）mg/dL

表2各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血漿乙醇濃度比較（±s）mg/dL

注：與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比較，▲▲P＜0.01

組 別 n/只模型組 10給藥后1h 360.45±6.14 1.5h 332.25±5.72枳椇子組 10 339.29±5.96△云母組 10 336.09±5.67△311.59±6.02△309.25±5.86△枳椇云母組 10 325.93±6.04△△▲▲對照組 10 341.85±6.73△300.87±6.23△△▲▲313.39±4.96△

4 討 論

酒精攝入人體后大約 25%通過胃黏膜吸收，75%通過腸道吸收。目前發(fā)現(xiàn)乙醇的代謝系統(tǒng)，主要包括乙醇脫氫酶系統(tǒng)和非乙醇脫氫酶系統(tǒng)，乙醇被氧化成乙醛，乙醛又被乙醛脫氫酶氧化成乙酸，最終分解成二氧化碳和水。在正常小劑量或短時(shí)間飲酒的情況下，以前一途徑即乙醇脫氫酶系統(tǒng)代謝為主，乙醇脫氫酶在體內(nèi)分布廣泛，但主要分布在肝和胃腸[5]。而在大量或長期酗酒者后一途徑系統(tǒng)亦亢進(jìn)，該途徑除可產(chǎn)生活性氧外，還主要生成毒素乙醛，對機(jī)體的損傷更大。因此如果能夠提高ADH活性，使酒精代謝以ADH系統(tǒng)代謝為主，理論上也是對酒精性肝病有效的治療途徑。同時(shí)近來逐漸重視胃在乙醇首過代謝（first pass metabolism,FPM）中的重要作用，F(xiàn)PM即飲酒后約有15%～30%的乙醇首先在消化道內(nèi)被氧化代謝的現(xiàn)象[6]。因此胃黏膜是乙醇代謝的第一道屏障。

枳椇子屬養(yǎng)陰、生津、潤燥、止渴、涼血類藥，可解酒毒、清熱利尿、止渴除煩。該藥作為傳統(tǒng)的解酒藥已被廣泛應(yīng)用臨床，實(shí)驗(yàn)研究證明其具有促進(jìn)乙醇代謝作用[7]。云母為硅酸鹽類礦物白云母，性味甘、平、溫、無毒，入肺、脾、膀胱。研究證明[8-9]云母具有良好胃黏膜保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，枳椇云母湯能明顯提高肝、胃ADH活性，降低酒后血漿乙醇濃度。其作用機(jī)制可能是抑制消化道對乙醇的吸收，加強(qiáng)乙醇在胃腸道的首過效應(yīng)，提高大鼠肝臟和胃組織ADH活性，促進(jìn)乙醇代謝，從而降低血漿乙醇濃度，起到有效的降醇解酒作用，減輕酒精對大鼠機(jī)體及肝臟的損害。

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［8］呂海麗.云母顆粒對無水乙醇誘導(dǎo)的大鼠胃黏膜損傷的影響及作用機(jī)理的探討［D］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2007.

［9］錢云，姒健敏，王良靜.云母對胃黏膜保護(hù)作用機(jī)制研究［J］.中國中藥雜志，2004，29（8）:781.