王建軍 洪來電 余爭垚

[摘要] 目的 XIAP相關(guān)因子1（XIAP-Associated Factor 1，XAF1）可與XIAP直接結(jié)合并拮抗其抗凋亡作用，本文研究了XAF1在人肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，并探討了其在肝癌患者預(yù)測復(fù)發(fā)中的價(jià)值。 方法 采用免疫組化法檢測38例HCC患者肝癌組織中XAF1蛋白的表達(dá)，并分析其與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。 結(jié)果 XAF1在人肝癌組織中表達(dá)免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，XAF1在人肝癌組織中的表達(dá)陽性率為36.84%（14/38），在癌旁正常組織中的表達(dá)陽性率為100%（38/38），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。24例XAF1低表達(dá)患者中，XAF1表達(dá)水平與PVTT（P=0.012）、AFP高水平（P=0.016），腫瘤大?。≒=0.037）有關(guān)；Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示，XAF1低表達(dá)患者的術(shù)后1年無瘤生存率顯著低于XAF1正常表達(dá)患者（P＜0.05），是影響HCC術(shù)后1年生存率的因素之一。 結(jié)論 XAF1在人體肝癌組織中表達(dá)水平低于癌旁正常組織，這可能是影響肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的一個(gè)潛在危險(xiǎn)因素。

[關(guān)鍵詞] XIAP相關(guān)因子1；肝腫瘤；復(fù)發(fā)

[中圖分類號(hào)] R735.7[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）01-001-02

Role of XAF1 in tumor recurrence of patients with hepatocellular carcinoma treated with hepatectomy

WANGJianjun HONGLaidian YUZhengyao

Department of General Surgery, Chun'an County First People's Hospital, Chun'an 311700, China

[Abstract] Objective XIAP-associated factor 1 (XAF1) is a putative tumor suppressor that exerts its proapoptotic effects through both caspase-dependent and–independent means. In this study we investigated the expression XIAP-associated factor 1 (XAF1) in human hepatocellular carcinoma (HCC) and its mechanism of post-surgical recurrence of patients with HCC. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of XAF1 in 38 patients with HCC after hepatectomy, and the relationship between the expression of XAF1 and the post-surgical recurrence of patients with HCC was analyzed by bioinformatics. Results Immunohistochemisitry results showed that the positive ratio was 36.84% (14/38) and 100% (38/38) in human HCC tumor tissues and corresponding normal liver tissues significantly, and there was significant difference between them (P＜0.05). HCC patients with low expression of XAF1 were associated with PVTT (P=0.012), highalpha-fetoprotein (AFP) level (P=0.016) and tumor size (P=0.037) , respectively. It was demonstrated that the 1-year tumor-free survival rate of normal XAF1 expression patients was significantly higher than that of low XAF1 expression patients (P＜0.05), suggesting that low XAF1 expression may be associated with the postoperative recurrence of HCC patients. Conclusion The expression level of XAF1 in HCC tumor tissue is lower than that in corresponding normal liver tissues. It may be a potential risk factor for the recurrence of patients with HCC after hepatectomy.

[Key words] XAF1; Liver neoplasm; Recurrence

在全世界腫瘤發(fā)生率排名中，肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）排名第五位，占死亡率的第四位，已成為常見的肝臟惡性腫瘤[1，2]。然而中國慢性乙肝攜帶人群數(shù)超過人口10％，中國是全球HCC最高發(fā)的地區(qū)之一。目前，接受醫(yī)治后的患者復(fù)發(fā)例數(shù)較多，也已成為影響患者生存的不利因素[3]。因此，學(xué)術(shù)界一直致力于尋求對(duì)肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)具有預(yù)測價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)記物。本文以新近發(fā)現(xiàn)的X染色體相關(guān)凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）的相關(guān)因子1（XIAP-associated factor 1，XAF1）作為研究對(duì)象，該因子具有抑制腫瘤作用，探討其在原發(fā)性HCC中控制和抑制復(fù)發(fā)的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象根據(jù)下列選取標(biāo)準(zhǔn)，獲得2004年1月～2007年1月行手術(shù)治療的肝癌患者石蠟標(biāo)本38份：（1）術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)確診為肝細(xì)胞癌患者；（2）術(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療；（3）所有病例無合并HCV感染者，均為單一HBV感染患者；（4）均在隨訪或者術(shù)前獲取病理學(xué)資料，包括腫瘤體積、腫瘤病灶數(shù)目等；（5）均為中國漢族人種。38例患者其中男34例，女4例，平均年齡（47.0±2.3）歲，以上患者均獲得隨訪。隨訪截止日期2008年12月31日。

1.2 免疫組織化學(xué)

采用北京中杉金橋生物技術(shù)公司生產(chǎn)二氨基聯(lián)苯胺、M二步法免疫組化試劑盒。采用二甲苯脫蠟、梯度酒精水化、38例HCC的石蠟標(biāo)本4 μm厚度切片；濃度為3％的雙氧水孵育10 min后，抗原熱修復(fù)在pH6.0的枸櫞酸緩沖液中完成，加熱在95℃左右微波爐進(jìn)行15 min；自然冷卻后，滴加兔抗人XAF1多克隆抗體（美國USBiological公司）孵育4 ℃過夜；第2天復(fù)溫后在二抗孵育25 min；根據(jù)流程DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。以磷酸緩沖液（Phosphate Buffer Solution，PBS）對(duì)照，胞漿中見棕黃染色。結(jié)果依據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行判定，陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞76%為4分。細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì)分：無顯色：0分，淡黃色：1分，棕黃色：2分，棕褐色：3分。2項(xiàng)評(píng)分總和為總積分，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（＋），≥4分為陽性（++）[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，XAF1表達(dá)與臨床病理資料之間的相關(guān)性采用χ2（卡方）檢驗(yàn)，無復(fù)發(fā)生存率分析采用Kaplan-Meier法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 XAF1在肝組織中的表達(dá)情況

免疫組化結(jié)果顯示，XAF1蛋白在38例（100%，38/38）人肝癌癌旁正常組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)；而在肝癌組織中的表達(dá)陽性率為36.84%（14/38），兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究將24例XAF1蛋白低表達(dá)肝癌患者歸類為XAF1低表達(dá)組（封三圖1），另14例XAF1蛋白在肝癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁正常肝組織中的表達(dá)基本相同，將其歸類于XAF1正常組（封三圖1）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，未檢測到XAF1表達(dá)明顯高于健康肝組織的狀況。

2.2 XAF1蛋白表達(dá)水平與臨床病理因素的相關(guān)性

采用χ2（卡方）檢驗(yàn)分析了XAF1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，比較得到XAF1的低表達(dá)與PVTT（P=0.012）、AFP高水平（P=0.016），腫瘤大?。≒=0.037）均有關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤數(shù)量、組織學(xué)分級(jí)無關(guān)。見表1。

2.3 影響肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素分析

24例XAF1蛋白低表達(dá)肝癌患者中，18例（75.0%，18/24）術(shù)后1年復(fù)發(fā)，6例（25.0%，6/24）未復(fù)發(fā)；14例XAF1蛋白正常表達(dá)肝癌患者中，6例（42.9%，6/14）術(shù)后1年復(fù)發(fā)，8例（57.1%，8/14）未復(fù)發(fā)。采用Kaplan-Meier法分析無復(fù)發(fā)生存率，結(jié)果如表1所示，XAF1蛋白的低表達(dá)與復(fù)發(fā)顯著相關(guān)（P=0.048）。

3 討論

最新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子X是存在染色體17p13區(qū)域的染色體相關(guān)凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）的相關(guān)因子1（XIAP-associated factor 1，XAF1）。研究表明，XAF1蛋白的表達(dá)缺失或降低往往影響腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后。Byun等[5]發(fā)現(xiàn)XAF1蛋白的表達(dá)缺失不僅與胃癌的進(jìn)展有關(guān)，而且和一些癌癥患者的無瘤生存率及總體生存率也有關(guān)[6]。日本學(xué)者對(duì)24例HCC切除患者的肝癌組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測后發(fā)現(xiàn)，XAF1的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的凋亡顯著相關(guān)[7]，但鮮有相關(guān)報(bào)道。

此外，Chung等[8]報(bào)道在結(jié)腸癌中XAF1蛋白的表達(dá)下調(diào)具有腫瘤特異性，且與腫瘤進(jìn)展及病理分級(jí)有關(guān)。Sakemi等[7]發(fā)現(xiàn)肝癌組織中XAF1的表達(dá)水平與腫瘤分化相關(guān)，低分化肝癌組織中XAF1的表達(dá)水平遠(yuǎn)低于中高分化肝癌組織，提示XAF1蛋白的表達(dá)水平可能與肝癌患者的臨床病理參數(shù)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝癌組織中XAF1蛋白表達(dá)水平與患者PVTT、術(shù)前AFP水平、腫瘤大小等臨床病理指標(biāo)之間存在相關(guān)性。單因素分析結(jié)果表明，患者術(shù)前AFP水平、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量均與腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)，該結(jié)果與最新研究認(rèn)為臨床組織學(xué)因素與腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)存在相關(guān)性一致[9]。本研究結(jié)果表明，XAF1在預(yù)測肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，但要應(yīng)用于臨床還需大樣本、前瞻性、多中心的研究進(jìn)一步加以證實(shí)。

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（收稿日期：2011-04-29）