劉 翔，郝 瓊，郭邦成，閆立群，謝明英，梁俊容，景懷琦

沙門氏菌是一種人獸共患的腸道病原菌，至今已有2 523種血清型被發(fā)現(xiàn)［1］，廣泛分布于自然界，寄生于人和動物體內(nèi)，常見于污染的食品和污水等外環(huán)境中，是人和動物常見的病原菌，可引起人類傷寒、副傷寒和食物中毒等許多疾病，直接影響工農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)發(fā)展，使全球遭受巨大的經(jīng)濟損失。在我國，沙門氏菌食物中毒多年來居細菌性食物中毒的首位［2］。在寧夏地區(qū)，侯在文等［3］人曾對1982－1987年腹瀉病人、食品、污水及家禽家畜中分離沙門氏菌進行過菌型分布調(diào)查，結(jié)果顯示鼠傷寒沙門氏菌是當(dāng)時寧夏地區(qū)的流行菌株，之后再無該地區(qū)沙門氏菌流行特征的深入報道。特對2007－2011年寧夏地區(qū)分離的沙門氏菌進行血清型研究，并用PFGE基因分型方法對流行菌株進行基因分型，揭示寧夏不同地區(qū)沙門氏菌的分布特征與流行菌株之間的同源性，為控制沙門氏菌污染、暴發(fā)食物中毒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 菌株來源 56株沙門氏菌來源于2007－2011年寧夏食源性致病菌監(jiān)測及腹瀉病監(jiān)測工作，菌株的分離操作按照各年度相應(yīng)的監(jiān)測方案進行。

1．1．2 培養(yǎng)基及試劑 主要分離培養(yǎng)基購自廣東環(huán)凱生物技術(shù)有限公司；Api 20E生化鑒定條購自法國梅里埃公司；沙門氏菌屬診斷血清購自寧波天潤藥業(yè)技術(shù)公司；SDS、Tris Base、EDTA、硼酸購自上海生工生物公司；蛋白酶K和限制性內(nèi)切酶XbaⅠ購自大連寶生物工程有限公司；SeaKem Glod Agarose購自美國BD公司。

1．2 方法

1．2．1 菌株鑒定及血清學(xué)測定 所有沙門氏菌株均經(jīng)過Api 20E鑒定，再依據(jù)沙門氏菌屬Kauffmann－White－Le Minor抗原表用沙門氏菌屬診斷血清確定血清型。

1．2．2 脈沖場凝膠電泳分型（PFGE） 參照中國細菌性傳染病分子分型實驗室監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)（PulseNet China）的沙門氏菌PFGE分子分型方法，用SeaKem Glod Agarose將沙門氏菌包埋、XbaI酶切，把得到的限制性DNA片段用Chef Mapper進行脈沖場凝膠電泳分型，最后將成像結(jié)果用BioNu－merics（5．1）軟件聚類分析。

2 結(jié) 果

2．1 不同地區(qū)沙門氏菌血清型分布 56株沙門氏菌分為14種血清型，以腸炎沙門氏菌為主，占所有菌株數(shù)的58．93%（33／56）；其次為德爾比沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ和鼠傷寒沙門氏菌，均占總菌株數(shù)的5．36%（3／56）；其余為奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌等10個血清型，在寧夏地區(qū)均不常見，共占總菌株數(shù)的25%（14／56）。

5城市中，銀川市檢出沙門氏菌最多，占所有菌株數(shù)的73．21%（41／56），依次為吳忠市、中衛(wèi)市、石嘴山市和固原市。銀川市沙門氏菌呈多樣性，檢出11種血清型；中衛(wèi)市和吳忠市，各檢出3種血清型；石嘴山市和固原市各檢出1種血清型。除固原市之外的4市均以腸炎沙門氏菌為主，占到各自菌株數(shù)的40%以上，見表1。

表1 寧夏不同地區(qū)不同來源沙門氏菌血清型分布Tab．1 The serotype of Salmonellafrom different regions of Ningxia

2．2 不同分離來源沙門氏菌分布 食品中沙門氏菌共檢出9種血清型，以腸炎沙門氏菌（64．5%）、奧里翁沙門氏菌（6．5%）、斯坦利沙門氏菌（6．5%）、豬霍亂沙門氏菌（6．5%）為主，其余5種血清型各檢出1株；病人中沙門氏菌共檢出6種血清型，以腸炎沙門氏菌（59．1%）、鼠傷寒沙門氏菌（13．6%）、沙門氏菌Ⅱ（13．6%）為主，其余3種血清型各檢出1株；環(huán)境中僅檢出德爾比沙門氏菌和鴨沙門氏菌各1株。

腸炎沙門氏菌在食品和病人中檢出，且構(gòu)成比較高；德爾比沙門氏菌在病人和環(huán)境中檢出；鴨沙門氏菌在食品和環(huán)境中檢出；鼠傷寒沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ、羅森沙門氏菌和傷寒沙門氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、阿貢納沙門氏菌、巴雷利沙門氏菌、山夫登堡沙門氏菌僅在食品中檢出，見表1。

2．3 主要沙門氏菌流行菌株基因特征 在56株沙門氏菌中腸炎沙門氏菌占到了58．93%（33／56），共分為11個PFGE帶型，各菌株基因同源性在60%～100%，依次命名為SALX01001到SALX01011，其中優(yōu)勢帶型SALX01004有21株，占63．64%（21／33）；其次 SALX01008、SALX01009型各有2株，分 別 各 占6．06% （2／33）；其 余 SALX01001、SALX01002、SALX01003、SALX01005、SALX01006、SALX01007、SALX01010、SALX01011型各1株，分別各 占 3．03% （1／33）。 帶 型 SALX01001 到SALX01009聚類相似性在90%以上，涵蓋了該實驗菌株數(shù)的93．94%（31／33），按照 Tenover等［4］提出的菌株同源性判別標準，認為屬于同一克隆系。帶型SALX01010和SALX01011各有1株，與上一克隆系親緣關(guān)系較遠，僅占實驗菌株數(shù)的6．06%（2／33），見圖1。

圖1 33株腸炎沙門氏菌PFGE帶型聚類圖Fig．1 Clustering map for PFGE patterns onf33strains of Salmonella

3 討 論

分析表明，寧夏地區(qū)病人和食品中的流行沙門氏菌血清型已由侯在文等［3］1990年報道的鼠傷寒沙門氏菌轉(zhuǎn)變?yōu)槟c炎沙門氏菌。而張毅等［5］研究2010上海市食源性沙門菌的血清型主要為鼠傷寒沙門氏菌，這表明沙門氏菌的血清型分布有明顯的年代變遷和區(qū)域差異。銀川市沙門氏菌檢出最多，具有多樣性；固原市檢出最少，無多樣性，是寧夏地區(qū)唯一腸炎沙門氏菌沒有流行的地區(qū)。這可能與銀川市是寧夏首府城市，人口密集，對外交流合作較多，而固原市地處偏遠，經(jīng)濟較為落后，且交通欠發(fā)達有一定的關(guān)系。

鼠傷寒沙門氏菌、沙門氏菌Ⅱ、羅森沙門氏菌和傷寒沙門氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、阿貢納沙門氏菌、巴雷利沙門氏菌、山夫登堡沙門氏菌僅在食品中檢出，說明不同時間、不同地區(qū)、不同來源的沙門氏菌血清型的構(gòu)成有較大差異。

PFGE分型分辨力高、重復(fù)性好，為確定菌株之間的親緣關(guān)系提供了可靠的技術(shù)手段，被認為是細菌基因分型的“黃金標準”［1］。對病人和食品中分離的33株腸炎沙門氏菌進行PFGE分型，得到同源性在60%～100%的11個帶型，其PFGE優(yōu)勢帶型SALX01004有21株，同源性為100%，分別來自我區(qū)4個市不同年份的病人和食品，推斷病人和食品中長期存在共同的沙門氏菌污染來源，而我區(qū)不同地區(qū)多次發(fā)生的腸炎沙門氏菌引起的食物中毒也側(cè)面印證了這一點。提醒大家在日常生活中要養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，食物要洗凈、煮熟煮透再食用，同時也提醒有關(guān)政府部門加強對食品從源頭到餐桌的過程監(jiān)管，從源頭上防止病人糞便對食品的污染。

［1］楊保偉，張秀麗，曲東，等．2007—2008年陜西部分零售畜禽肉沙門氏菌血清型和基因型［J］．微生物學(xué)報，2010，50（5）：654－660．

［2］朱超，許學(xué)斌．沙門氏菌屬血清型診斷［M］．上海：同濟大學(xué)出版社，2009：1－2．

［3］侯在文，董塞明．寧夏地區(qū)沙門氏菌菌型分布及藥敏試驗［J］．寧夏醫(yī)學(xué)雜志，1990，12（4）：236－238．

［4］Tenover FC，Arbeit RD，Goering RV，et al．Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed－field gel electrophoresis：criteria for bacterial strain typing［J］．J Clin Microbiol，1995，33（9）：2233－2239．

［5］張毅，陳欣欽．2010年上海市食源性沙門菌菌型分布和藥敏分析以及快速檢測方法的建立［J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2011，（20）：3938－3941．