項裕財

(皖南醫(yī)學(xué)院 微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，安徽 蕪湖 241002)

細菌中許多天然的質(zhì)粒帶有抗藥性基因，如編碼合成能分解破壞四環(huán)素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因，這種質(zhì)粒稱為抗藥性質(zhì)粒，又稱R質(zhì)粒，帶有R質(zhì)粒的細菌就能在相應(yīng)的抗生素存在下生存繁殖。R質(zhì)粒已成為臨床上的一個突出問題，它使許多藥物不再對某些感染性疾病有效，給臨床治療帶來了很大困難。人們試圖尋找有效的R質(zhì)粒消除劑，把耐藥質(zhì)粒(R質(zhì)粒)從宿主菌株中消除掉，使其重新恢復(fù)對抗生素的敏感性。筆者經(jīng)多種食物實驗發(fā)現(xiàn)大蒜蘆薈混合液對R質(zhì)粒有消除作用。以下是大蒜蘆薈混合液作為消除劑對痢疾桿菌 R質(zhì)粒和大腸桿菌R質(zhì)粒的消除實驗報道。

1 材料

D15痢疾桿菌［耐氯霉素(CM)痢疾桿菌］、大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌(本實驗室提供)大蒜、蘆薈(市場購買)、鏈霉素紙片、紅霉素紙片、慶大霉素紙片、青霉素紙片、氯霉素紙片(杭洲微生物試劑有限公司，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):ws/T125-1999)，含20 μg/ml CM 中國藍培養(yǎng)基、含 20 μg/ml CM SS 培養(yǎng)基(本室提供)。

2 方法

2.1 R 質(zhì)粒接合傳遞實驗［1，2］取 D15 痢疾桿菌(供體菌)分別和大腸桿菌(受體菌)或/和痢疾桿菌(受體菌)各2滴于2 ml肉湯培養(yǎng)基中混勻，經(jīng)37℃振蕩培養(yǎng)2 h后分別接種于含CM的中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18 h后，觀察生長現(xiàn)象。

2.2 藥物敏感實驗［3，4］將大腸桿菌、痢疾桿菌、含R質(zhì)粒大腸桿菌、含R質(zhì)粒痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌分別密集接種于普通瓊脂平板表面，用小鑷子分別夾取鏈霉素紙片、紅霉素紙片、慶大霉素紙片、青霉素紙片、氯霉素紙片、大蒜液、蘆薈液等抗菌紙片置于上述培養(yǎng)基的相應(yīng)區(qū)域內(nèi)，37℃培養(yǎng)18 h。

2.3 大蒜蘆薈混合液消除大腸桿菌R質(zhì)粒和痢疾桿菌R質(zhì)粒實驗 將大蒜蘆薈混合液按1∶1濃度分別注入含R質(zhì)粒大腸桿菌菌液和含R質(zhì)粒痢疾桿菌菌液內(nèi)充分混勻37℃水浴4 h，而后用接種環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基以及不含CM中國藍培養(yǎng)基和不含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

2.4 大蒜液消除含R質(zhì)粒大腸桿菌和痢疾桿菌實驗 取大蒜液分別作用于含R質(zhì)粒的大腸桿菌菌液和痢疾桿菌菌液內(nèi)充分混勻37℃水浴4 h，再用接種環(huán)各取1環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

2.5 蘆薈液消除含R質(zhì)粒大腸桿菌和痢疾桿菌實驗 取蘆薈液分別作用于含R質(zhì)粒的大腸桿菌菌液和痢疾桿菌菌液內(nèi)充分混勻37℃水浴4 h，再用接種環(huán)取1環(huán)分別接種于含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18 h。

3 結(jié)果

3.1 R質(zhì)粒接合傳遞實驗 在含CM中國藍培養(yǎng)基有藍色菌落生長和在SS培養(yǎng)基有紅色菌落生長，說明D15痢疾桿菌R質(zhì)粒經(jīng)傳遞給大腸桿菌已成功。在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CM的SS培養(yǎng)基上形成無色的半透明小菌落生長，說明已形成耐CM的痢疾桿菌。沒有經(jīng)過接合傳遞實驗的大腸桿菌和痢疾桿菌在含CM的中國藍培養(yǎng)基和含CM的SS培養(yǎng)基上均不生長。見表1。

3.2 藥物敏感實驗 含R質(zhì)粒的大腸桿菌和含R質(zhì)粒的痢疾桿菌對氯霉素都耐藥，不含R質(zhì)粒的大腸桿菌和痢疾桿菌對CM高度敏感。大腸桿菌和痢疾桿菌均對大蒜液敏感，對蘆薈液都不敏感，金黃色葡萄球菌對大蒜和蘆薈都敏感。見表2。

3.3 大蒜蘆薈混合液消除R質(zhì)粒實驗 經(jīng)大蒜蘆薈混合液作用的含R質(zhì)粒的大腸桿菌和痢疾桿菌接種在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基上都不生長，而在不含CM中國藍培養(yǎng)基和不含CMSS培養(yǎng)基都生長。見表3。

3.4 大蒜液、蘆薈液分別消除R質(zhì)粒細菌實驗經(jīng)大蒜液作用的含R質(zhì)粒大腸桿菌和含R質(zhì)粒痢疾桿菌、以及經(jīng)蘆薈液作用的大腸桿菌和痢疾桿菌在含CM中國藍培養(yǎng)基和含CMSS培養(yǎng)基都有菌生長。

表1 細菌在含CM培養(yǎng)基生長情況

表2 藥物敏感實驗結(jié)果

表3 大蒜蘆薈混合液消除R質(zhì)粒細菌結(jié)果

4 討論

質(zhì)粒編碼所產(chǎn)生的細菌耐藥性和毒力等問題，給人類疾病治療帶來了很大困難，腸道耐藥基因庫的存在是腸道致病性耐藥菌株流行的潛在危險。消除耐藥質(zhì)粒，使耐藥菌株恢復(fù)敏感性，對于臨床上治療由耐藥菌導(dǎo)致的感染和阻斷耐藥性和毒力的傳播都有非常重要的意義。

本實驗表明大蒜蘆薈混合液對R質(zhì)粒有消除作用(至于何因還需進一步研究)，提示它可以有效控制由質(zhì)粒的傳播所引起的耐藥性的擴展、蔓延。而且大蒜蘆薈是集食物藥物的保健植物，具有殺菌消毒以及增強免疫力等功效［5］。

隨著抗生素的應(yīng)用日益廣泛，細菌對一些常用的藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。對于那些應(yīng)用時間越長、使用范圍越廣泛的藥物，細菌的耐藥性往往越嚴(yán)重［6～8］。在不斷變化的外界環(huán)境中，細菌的質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、噬菌體等通過接合、轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式 ，相互間交換所攜帶的一些基因，可使菌群更好地適應(yīng)環(huán)境。這是細菌在長期進化過程中所獲得的生存本領(lǐng)。耐藥基因最初可能起源于少數(shù)抗生素產(chǎn)生菌或細菌自身基因的隨機突變，在抗生素廣泛應(yīng)用所形成的選擇壓力脅迫下，沒有機會獲得耐藥基因的細菌不得不退出競爭，而有機會通過菌間交換獲得耐藥基因的細菌卻能自如地生存［4，9］、繁衍形成耐藥菌株。由于消化道是人體內(nèi)的開放性通道，易受內(nèi)外環(huán)境因素的影響，更是一些長期應(yīng)用抗菌藥物、免疫抑制劑、慢性疾病住院患者，醫(yī)院感染的好發(fā)部位［10］。因此，選擇有效的藥物，控制耐藥菌株的傳播，阻斷醫(yī)院感染的發(fā)生，是我們一直在探索的問題。又由于許多研究提示［11～13］抗菌藥物的使用過程實際上也是對耐藥菌株的選擇過程。故使得篩選天然物質(zhì)阻斷耐藥菌株的傳播，成為我們關(guān)注和研究的焦點。

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