楊羽行，劉小平

武漢理工大學化工學院制藥工程系，湖北武漢 430070

美洛昔康（Meloxicam）作為一種非甾體抗炎藥（NSAIDS），已廣泛應用于治療急性和慢性炎癥及疼痛（風濕、類風濕性關節(jié)炎等）中，常用劑型有膠囊劑和片劑。但這些口服劑型有吸收緩慢、半衰期長、對消化道有較強刺激性等不足。因此，美洛昔康口服制劑在臨床應用上有較大的限制。風濕、類風濕性關節(jié)炎屬于需要長期服藥的疾病，但長期服藥會對腸胃有較大的負擔，而外用制劑則可以避免上述的缺點。通過經(jīng)皮吸收給藥（TDDS），美洛昔康可以直接通過皮膚吸收進入患處的毛細血管，直接作用于病灶部位，避免對消化道刺激，同時也避免了肝臟首過效應，提高了生物利用度。由于皮膚的生理結構也可以達到藥物儲庫的作用，在一定程度上可以達到緩釋長效的作用，進一步提高藥物的生物利用度，減少給藥劑量和次數(shù)，降低藥物不良反應。

因脂質體（liposomes）的生物膜相似性、良好的生物相容性以及毒性小等特點，在TDDS的應用研究上很受重視。目前已有相關美洛昔康脂質體的研究報告。由于受脂質體的制備方法和穩(wěn)定性限制而在研究上受到一定的限制。醇質體（ethosomes）是在原脂質體基礎上研究出來的一種新的特殊脂質體，含有較高濃度（大于30%）的乙醇。研究表明醇質體在滲透性和包封率上優(yōu)于普通脂質體[1-2]。

本實驗是以乙醇注入法制備美洛昔康醇質體，并將其制備成凝膠劑。以包封率為指標對美洛昔康醇質體的制備工藝進行優(yōu)化。同時對凝膠劑的含量和穩(wěn)定性等做出評價。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司），粒度儀（Mastersize 2000，Malvern Instruments），760 型紫外分光光度計（上海分析儀器廠），DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市英峪予華儀器廠），TGL-16C高速離心機（上海安亭科學儀器廠），F(xiàn)A2004電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）。

1.2 試藥

美洛昔康原料藥（武漢遠城科技發(fā)展公司，批號：20100101，純度99%），美洛昔康對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100679-200401），卵磷脂（國藥集團化學試劑有限公司），卡波姆940（武漢龍睿達化工公司，批號：20100207）。

2 方法與結果

2.1 醇質體的制備

2.1.1 含量測定（HPLC法）

2.1.1.1 色譜條件[3]色譜柱：Elite-C18柱（填料：Hypersil ODS-2，粒度：5 μm，規(guī)格：4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-0.2 mol/L醋酸銨（50∶50）；流速：0.8 ml/min；檢測波長：363 nm；柱溫：25℃；進樣量：20 μl。

2.1.1.2 專屬性試驗 稱取適量美洛昔康標準品，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超聲溶解，用緩沖溶液稀釋，得美洛昔康標準品樣品a；稱取適量美洛昔康原料藥，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超聲溶解，用緩沖溶液稀釋，按乙醇注入法制備得美洛昔康醇質體樣品b；稱取適量卵磷脂用無水乙醇溶解作有機相，用Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液作水相，制備空白醇質體得醇質體陰性對照樣品c。在上述色譜條件下進樣。結果表明制備過程中的其他原料不會對美洛昔康的HPLC測定造成干擾。見圖1。

圖1 專屬性試驗HPLC色譜

2.1.1.3 精密度試驗 將美洛昔康標準品溶液（上述樣品a）平行進樣3次，得吸收峰面積的標準偏差值RSD=0.67%（n=3）。表明該HPLC法具有很好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

2.1.1.4 標準曲線繪制 精密稱取美洛昔康對照品10.0 mg，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超聲溶解，定容至10 ml。分別量取 0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 ml，定容至 10 ml。 得到濃度為分別為 25、50、100、200、400 μg/ml的美洛昔康溶液。 計算各濃度在該色譜條件下的吸收峰面積。對吸收峰面積A與美洛昔康標準品濃度C進行線性回歸，得回歸方程為A=25.4465C+664.63，r=0.9989。 表明美洛昔康在 25～400 μg/ml濃度范圍內呈良好的線性關系。

2.1.2 單因素考察[2-4]

根據(jù)藥物性質（如美洛昔康在pH>8.0的溶液中才有較好的溶解性）、文獻報道等，選取實驗水浴溫度（℃）、美洛昔康溶液濃度（mg/ml）、Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液 pH 值、攪拌速度（r/min）、超聲時間（min）、卵磷脂的用量（g）、攪拌時間（min）7個影響因素作為對象，以乙醇注入法為制備方法，以包封率（%）為指標分別考察。結果發(fā)現(xiàn)水浴溫度、美洛昔康溶液濃度、緩沖溶液pH值、卵磷脂的用量這4個因素對醇質體的包封率有較明顯的影響；攪拌速度和攪拌時間沒有明顯影響。而隨著超聲時間的增長，包封率呈現(xiàn)明顯下降趨勢，即超聲會破壞醇質體結構，導致包封率下降。

2.1.3 正交試驗及結果

根據(jù)單因素考察結果，選用試驗水浴溫度（A）、美洛昔康溶液濃度（B）、緩沖溶液 pH 值（C）、卵磷脂的用量（D）四個因素為主要影響因素，設計正交試驗。其他條件設定為攪拌速度400 r/min，攪拌時間15 min。

表1 因素水平表

表2 L9（34）試驗設計表

以包封率作為考察指標，實驗結果顯示，美洛昔康醇質體的最佳制備工藝條件為：A2B2C2D1。即水浴溫度為30℃，美洛昔康溶液濃度為0.50 mg/ml，Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液pH值為9.40，卵磷脂用量為0.075 g。

2.1.4 醇質體制備工藝

精密稱取美洛昔康原藥0.0500 g，用適量pH值為9.40的Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液超聲溶解，定容到100 ml，得濃度為0.5 mg/ml、pH值為9.40的美洛昔康溶液，精密量取10.0 ml于25 ml燒杯中，保鮮膜密封。設定水浴溫度30℃，轉子轉速400 r/min。精密稱取卵磷脂0.075 g，溶解于6 ml的無水乙醇中。用注射器緩慢注入上述的美洛昔康溶液中，針頭插入液面以下。注入完畢后，繼續(xù)攪拌15 min后，0.22 μm微孔濾頭濾過，得美洛昔康醇質體。

2.2 醇質體表征

2.2.1 外觀粒徑

制備得到的美洛昔康醇質體呈淡黃色、半透明、混懸狀液體。利用激光粒度儀測試其粒徑分布。結果顯示，醇質體粒徑呈正態(tài)分布，集中分布在8.0～22.0 μm之間，平均粒徑為16.95 μm。 見圖 2。

圖2 美洛昔康醇質體粒徑分布

2.2.2 包封率

按美洛昔康醇質體最佳制備工藝，同時制備9組醇質體。分別取適量在轉速為1.0×104～1.5×104r/min下高速離心10 min，上清液用0.22 μm有機微孔濾膜過濾備用。利用HPLC法測量，計算醇質體的平均包封率為74.70%，其標準偏差值 RSD=0.87%（n=9）。

2.3 凝膠劑的制備

稱取0.5g卡波姆940，甘油10ml，加入磷酸緩沖溶液5 ml，40℃水浴充分攪拌后溶脹過夜。滴加三乙醇胺調節(jié)pH至6.0～7.0。取美洛昔康醇質體混懸液8 ml，用磷酸緩沖溶液稀釋。攪拌凝膠基質的同時滴加美洛昔康醇質體混懸液，再加入磷酸緩沖溶液至100 g，攪拌充分后即得美洛昔康醇質體凝膠[5-6]。

2.4 凝膠劑性狀

制備得美洛昔康醇質體凝膠呈無色或淡黃色透明、黏稠、膠狀。

2.4.1 含量測定

按上述制備方法，制備一批美洛昔康醇質體凝膠，分3次測定，每次精密稱取10.0 g，加入甲醇適量，振搖后超聲，用流動相定容。取一定量于0.22 μm有機微孔濾膜過濾，依照美洛昔康的HPLC法測定其中的含量。結果得美洛昔康含量的平均值為2.17 mg/10 g，RSD=0.73%。

2.4.2 加樣回收率試驗

依照含量測定的值，精密稱取10.0 g美洛昔康醇質體凝膠理論含量的美洛昔康原藥的80%、100%、120%量，用適量0.1 mol/L的NaOH溶液超聲溶解，加入到按前述方法制備的空白醇質體凝膠中。按“2.4.1”項下測定方法測定凝膠中美洛昔康的含量。每種濃度平行測試3次。結果得美洛昔康的平均回收率為 97.65%，RSD=1.04%（n=9）。

2.5 穩(wěn)定性試驗

因凝膠劑中含有較多的水分，故而濕度對其影響不大。以下只考察溫度和光照對美洛昔康醇質體凝膠的影響。

2.5.1 溫度

制備三組美洛昔康醇質體凝膠，分別在低溫（4℃冷藏）、室溫以及60℃烘箱條件下存放，分別于0、5、10 d精確取樣，按“2.4.1”項下測定方法測定凝膠中美洛昔康的含量。各樣品中美洛昔康的測得量表明低溫和室溫存放的樣品美洛昔康測得量變化不大，樣品性狀也未發(fā)生明顯變化。60℃存放的樣品美洛昔康測定量有減少的趨勢，且樣品顏色逐漸變深。提示凝膠應避高溫存放。

2.5.2 光照

制備兩組美洛昔康醇質體凝膠，分別在避光（不透光紙包裹）、高光照（4500 lx）條件下存放。 分別于 0、5、10 d 精確取樣，按“2.4.1”項下測定方法測定凝膠中美洛昔康的含量。避光存放的樣品性狀未發(fā)生變化，美洛昔康測得量基本無變化。高光照下樣品顏色明顯變深，美洛昔康測得量明顯降低。即凝膠應避光保存。

3 討論

美洛昔康性質比較穩(wěn)定，在酸性或中性溶劑中溶解性很差。本實驗選用Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液作為溶劑，可以很好地溶解美洛昔康，也可以使實驗環(huán)境pH穩(wěn)定在一定范圍內。本實驗應用乙醇注入法制備美洛昔康醇質體，所用設備簡單，易于操作，重現(xiàn)性良好，粒徑小而分布較均勻，包封率較高。由此制得的美洛昔康醇質體凝膠具有穩(wěn)定性良好。

醇質體是一種含有較高濃度乙醇的新型脂質體。在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的應用上有很好的前景。其具有的磷脂膜結構和生物細胞具有很大的相似性和流動性，可以很好地融合或者穿透皮膚細胞。其中含有的高濃度乙醇在一定程度也上也起到促滲的作用，可以達到更好的治療效果。其在透皮性能上的優(yōu)勢，有待進行后續(xù)的研究。

醇質體凝膠穩(wěn)定性良好，通過皮膚的滲透和蓄積作用，可以達到一定的緩釋作用，從而減少給藥次數(shù)，對于長期用藥帶來的給藥麻煩和副作用有很好地改善。

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