靳 祎 王恩軍 宋 潔 柴廣軍 王 哲 王 靜

1．河北大學(xué)，河北 保定 71000;2．河北省保定市高陽縣醫(yī)院，河北 高陽 071500;3．河北省保定市第二醫(yī)院，河北 保定 071000;4．河北省保定市一中分校，河北 保定 071000

箬葉中含有維生素、茶多酚、多糖、氨基酸等多種成分［1－4］，其中箬葉及箬竹根所含的多糖，對實驗動物體內(nèi)腫瘤具有抑制作用［5－6］。本試驗采用小鼠移植性宮頸癌作為試驗?zāi)Ｐ停芯矿枞~多糖體內(nèi)抗宮頸癌活性及免疫調(diào)節(jié)機制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與藥品 箬葉購自江西省九江市;環(huán)磷酰胺(CTX)為山西普德藥業(yè)有限公司產(chǎn)品 (批號:20081023);刀豆素蛋白 (ConA)為sigma公司產(chǎn)品。

1.2 實驗動物與細(xì)胞株 昆明種小鼠4－5周齡，體重18－24g，雌雄各半，河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院提供;U14小鼠宮頸癌細(xì)胞株:購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所。

1.3 實驗方法

1.3.1 箬葉多糖的提取 采用熱水浸提法，經(jīng)苯酚－硫酸法測定多糖含量為49.08%。

1.3.2 建立小鼠宮頸癌U14實體瘤模型 取在昆明小鼠體內(nèi)傳代7d－10d的U14腫瘤細(xì)胞，每只小鼠右前肢腋下注射2×106個/0.2mL，建立小鼠宮頸癌實體瘤模型。

1.3.3 實驗分組 取荷瘤小鼠50只及正常小鼠10只，荷瘤小鼠隨機分為5組，每組10只:①陰性對照組:生理鹽水;②陽性對照組:CTX(20 mg/kg);③箬葉多糖低劑量組 (100 mg/kg);④中劑量組 (200 mg/kg);⑤高劑量組(400 mg/kg)。所有小鼠均為灌胃給藥，劑量均為0.l mL/10g，每天1次，連續(xù)14 d。

1.3.4 箬葉多糖體內(nèi)抑瘤活性 停藥的次日采用眼球摘除放血法處死小鼠，剖取腫瘤組織稱重，計算腫瘤抑制率。抑制率 (%)=(1－給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100%。

1.3.5 相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)測定

1.3.5.1 脾指數(shù) 所有實驗動物給藥結(jié)束后稱重，處死后取脾臟并稱量脾臟重量，計算各組小鼠脾指數(shù)。脾臟指數(shù)(%)=脾臟重量 (mg)/小鼠體重 (g)。

1.3.5.2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗 (MTT法)［7］取脾臟用鋼網(wǎng)研磨法制備脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105個/mL。將脾細(xì)胞懸液加入到96孔板中，100 μL/孔，每組4個平行孔，加入10 μg/mL的 ConA 溶液100 μL(終濃度5 μg/mL)，用不含ConA的培養(yǎng)液作為對照。置5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)68 h后各孔加入5 mg/mL MTT液20 μL，培養(yǎng)4h，離心棄上清，各加入150 μL的DMSO，溶解后用酶標(biāo)儀測定各孔A570值，計算T淋巴細(xì)胞的增殖刺激指數(shù) (刺激指數(shù) =刺激孔A均值/對照孔A均值)。

2 結(jié)果

2.1 箬葉多糖對荷瘤小鼠體內(nèi)腫瘤的影響 箬葉多糖低、中、高劑量組對荷瘤小鼠的瘤重都有一定的抑制作用，瘤重均有減輕，高劑量組抑瘤作用更明顯 (表1)。

2.2 箬葉多糖對荷瘤小鼠脾臟指數(shù)的影響 中、高劑量組的箬葉多糖能促進(jìn)脾臟的增長，增加小鼠脾指數(shù)，增加趨勢與劑量呈正相關(guān) (表1)。

2.3 箬葉多糖對荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞功能的影響 陰性對照組和CTX組荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)明顯降低，而實驗組淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)則表現(xiàn)為上升，高、中劑量組與陰性對照組比較有顯著性差異 (表1)。

表1 箬葉多糖對荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率、脾指數(shù)及刺激指數(shù)的影響

3 討論

本試驗表明箬葉多糖的抗癌活性與劑量相關(guān)，高劑量的箬葉多糖對小鼠宮頸癌的抑制作用較為明顯。此外箬葉多糖對荷瘤小鼠的免疫器官有一定的保護(hù)作用，環(huán)磷酰胺組小鼠的脾指數(shù)降低，而箬葉多糖組小鼠的脾臟指數(shù)比環(huán)磷酰胺組明顯提高;淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗結(jié)果表明箬葉多糖還可以提高荷瘤小鼠的淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)，從而拮抗荷瘤小鼠的免疫抑制，增強其免疫功能。

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