王今越 丁樹(shù)哲 王小虹 胡志剛 范堯

1 佛山大學(xué)體育學(xué)院（佛山 528000） 2 華東師范大學(xué)體育與健康學(xué)院 3 東北師范大學(xué)體育學(xué)院 4 江西師范大學(xué)體育學(xué)院

運(yùn)動(dòng)是骨骼肌重塑主要誘因，肌肉發(fā)生是骨骼肌重塑的重要生物學(xué)基礎(chǔ)。狹義的肌肉發(fā)生僅指胚胎發(fā)育過(guò)程中，體節(jié)細(xì)胞經(jīng)歷增殖、遷移、分化，最終形成肌肉組織的過(guò)程；廣義上，肌肉發(fā)生還包括成體肌肉干細(xì)胞增殖、分化、融合、成熟及肌纖維本身蛋白表達(dá)的增強(qiáng)。一直以來(lái)，成體肌肉發(fā)生機(jī)制都是運(yùn)動(dòng)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)內(nèi)容。目前對(duì)成體肌肉發(fā)生的細(xì)胞外事件的研究較深入，而對(duì)細(xì)胞內(nèi)事件仍知之不多［1］，p38、NF、IL-6在肌肉發(fā)生中的作用值得關(guān)注。

p38控制多種細(xì)胞發(fā)生進(jìn)程［2-4］，肌肉發(fā)生亦有其參與。通常認(rèn)為，p38激活有助肌肉發(fā)生，通過(guò)特異性抑制劑SB203580抑制p38活性可阻止成肌細(xì)胞融入肌管，降低肌肉特異性基因的水平，而通過(guò)MKK6的突變激活p38會(huì)誘導(dǎo)肌肉分化標(biāo)志物的表達(dá)和多核肌管的形成［5-8］；NFB在不同條件下可能發(fā)揮截然相反的作用——對(duì)肌肉發(fā)生和肌肉降解均有作用［2，8-10］；IL-6是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的新內(nèi)容，它與糖代謝密切相關(guān)，對(duì)肌肉發(fā)生也有作用，IL-6-/-小鼠衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和肌核的增加均被抑制，肌肉發(fā)育遲緩［3，4，11］。近年來(lái)，C2C12細(xì)胞研究顯示，p38激活會(huì)上調(diào)NF-B活性、IL-6、-actin mRNA含量、MCK依賴性熒光酶活性，而應(yīng)用NF-B抑制劑BAY11-7085降低了IL-6、-actin mRNA水平及MCK依賴性熒光酶活性，提示p38、NF-B、IL-6三者構(gòu)成通路調(diào)控肌肉發(fā)生［4］。成肌因子MRFs（MyoD、MyoG、MRF4、Myf-5）是肌肉發(fā)生的主要效應(yīng)因子，但急性運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)下各因子的動(dòng)力學(xué)特征及其功能的異同缺乏深入研究，成肌增強(qiáng)因子MEF2（主要是MEF2c）是MRFs增強(qiáng)因子，其變化應(yīng)與MRFs有關(guān)，而運(yùn)動(dòng)對(duì)其影響的報(bào)道鮮見(jiàn)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物分組及運(yùn)動(dòng)方案

66只10周齡體重270～300 g的清潔級(jí)雄性SD大鼠。飼養(yǎng)環(huán)境溫度23℃，濕度40～60%，采用人工燈光模擬自然晝夜變化，光照時(shí)間早上8:00至下午5:30。自由進(jìn)食，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物常規(guī)飼料喂養(yǎng)。所有大鼠正式實(shí)驗(yàn)前5 d均進(jìn)行3 d適應(yīng)性跑臺(tái)訓(xùn)練（1次/d、40 min／次、傾角10%、27 m/min），休息2 d，再開(kāi)始正式實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)均分為11組，具體分為安靜組（C組）、急性大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后0、1、6、16、24 h組（H-0、1、6、16、24 h組，運(yùn)動(dòng)方案：1 h、27 m/min、傾角10%，運(yùn)動(dòng)30 min后休息5 min，同樣強(qiáng)度再跑25 min）、急性中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后0、1、6、16、24 h組（M-0、1、6、16、24 h組，運(yùn)動(dòng)方案：1h、20 m/min、5%，運(yùn)動(dòng)30 min后休息5 min，同樣強(qiáng)度再跑 25 min）。依文獻(xiàn)［12］，27 m/min、傾角 10% 約相當(dāng)于81 ±3.5%VO2max，跑速20 m/min、傾角5%約相當(dāng)于 64 ±2% VO2max。

1.2 取材

根據(jù)分組，分別在運(yùn)動(dòng)后相應(yīng)時(shí)段（0、1、6、16、24 h）以斷頸椎方式分別處死大鼠取腓腸肌，用4℃預(yù)冷生理鹽水清洗去除血污，濾紙吸干水分，稱重后切分成數(shù)段，錫箔紙包裹，做好標(biāo)簽，浸入液氮30 min后放入-80℃超低溫冰箱冷凍待測(cè)。C組大鼠在處死運(yùn)動(dòng)組大鼠當(dāng)天以同樣方法處死取材并保存。

1.3 主要試劑及試劑盒

p38 MAPK多克隆抗體（小鼠來(lái)源，43kD）：Santa Cruz公司；Phospho-p38 MAPK多克隆抗體（Thr 180/Tyr 182、小鼠來(lái)源，43kD）：Santa Cruz公司；tubulin多克隆抗體（小鼠來(lái)源，50kD）：Cell Signal；Trizol總RNA提取試劑：Tiangen公司；Biort rt-pcr assasy kit：博日公司；NF-B assay kit：KC?生物公司。

1.4 測(cè)試方法

1.4.1 Phospho-p38（Thr180/Tyr182）、p38

細(xì)胞蛋白提?。喝?0～100 mg腓腸肌放入小燒杯中，加入1 ml提前預(yù)冷的勻漿介質(zhì)（210 mM甘露醇，70 mM蔗糖，5 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，0.1 mM PMSF，0.5 mM DTT，10 mM NaF）；剪碎肌組織，去除結(jié)締組織、脂肪等；電動(dòng)勻漿，轉(zhuǎn)速1500 ～ 1800 r/min，使組織勻漿化；勻漿液倒入離心管，1400g 4℃離心10 min；吸取上清即蛋白樣品，BCA法定量。

western blotting 測(cè)定 Phospho-p38（Thr180/Tyr182）和p38。一般步驟略。關(guān)鍵步驟條件：聚丙烯酰胺凝膠濃度10%；20V穩(wěn)壓轉(zhuǎn)移1.5 h；一抗p38、P-p38為1:800、tubulin為1:1000；稀釋，二抗為1:1000。蛋白表達(dá)值為條帶的灰度值，以tubulin內(nèi)參校正。

1.4.2 Phospho-p65（Ser237）、p65

1.4.3 IL-6、MRFs、MEF2c mRNA

按照Trizol Reagent液說(shuō)明書(shū)提取總RNA，檢測(cè)總RNA質(zhì)量和純度采用變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光檢測(cè)OD260/OD280比值，依據(jù)質(zhì)量和純度選取符合RT-PCR要求的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。按照Biort RT-PCR kit說(shuō)明書(shū)進(jìn)行cDNA的逆轉(zhuǎn)錄，總RNA經(jīng)RT反應(yīng)后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用25 μl體系。PCR循環(huán)條件 ：（1）95℃ 5 min，（2）95℃30 s，（3）（IL-6：58℃；MYOD：60℃；MyoG：62 ℃；MYF-5：60 ℃；MRF4：60℃；MEF2c：62℃）40 s，（4）72℃ 1 min，（5）回至第 2 步，25個(gè)循環(huán) ，（6）72℃ 10 min，（7）保持在 4℃。PCR產(chǎn)物加樣于2%瓊脂糖凝膠、電泳（上樣量12 μl，6×DNA loading buffer 2 μl，電壓 150V，電泳 35 分鐘）。mRNA含量為條帶的OD值，以-actin內(nèi)參校正。引物見(jiàn)表1，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

表1 PCR引物

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以WB、PCR、ELISA各指標(biāo)的測(cè)試結(jié)果除以該指標(biāo)對(duì)照組均數(shù)，進(jìn)行同倍比的標(biāo)準(zhǔn)化處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（± s），采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析組間差異顯著性，顯著性水平定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 Phospho-p38和p38

圖1顯示，H-0、1、6 h 及M-0、1、6 h組Phospho-p38 均顯著高于C組（均 P < 0.01），M-0、1、6 h組指標(biāo)均顯著低于H對(duì)應(yīng)組（均P < 0.01），H-1h組顯著高于H-0、6 h組（均P < 0.01），M-1 h組顯著高于M-0、6 h組（均P < 0.01）。各組p38與C組均無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

2.2 Phospho-p65和p65

圖2顯示，H-0、1、6 h組Phospho-p65均顯著高于C組（均P < 0.01），M-0、1 h組指標(biāo)均顯著高于C組（均P < 0.01），但均顯著低于H對(duì)應(yīng)組（均P < 0.01）。H-1 h組指標(biāo)顯著高于H-0、6 h組（均P < 0.01），M-1 h組指標(biāo)顯著高于M-0、6 h組（均P < 0.01）。各組p65與C組均無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

2.3 IL-6 mRNA

圖3顯示，H-0、1、6 h組指標(biāo)均顯著高于C組（均P < 0.01），M-0、1 h組指標(biāo)均顯著高于C組（均P < 0.01），但顯著低于H對(duì)應(yīng)組（均P < 0.05）。H-1h組指標(biāo)與H-0 h組無(wú)顯著差異（P > 0.05），但顯著高于H-6 h組（P < 0.01）。M-1 h組指標(biāo)顯著低于M-0 h 組（P < 0.01）。

2.4 MRFs mRNA及MyoD mRNA/MyoG mRNA比值

圖4顯示，H-6 h、M-6 h 組MyoD mRNA均顯著高于C組（均P < 0.01），H-6 h 組指標(biāo)顯著高于M對(duì)應(yīng)組（P < 0.05）。

圖5顯示，H-6 h、16 h組MyoG mRNA均顯著高于C組（均P < 0.01），M各組與C組均無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

圖6顯示，H-6h、M-6h組MyoD mRNA/MyoG mRNA比值顯著高于C組（均P < 0.01）。H-16組顯著低于C組（均P < 0.01）。

圖7顯示，各組Myf-5 mRNA均與C組無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

圖8顯示，H-1、6 h組MRF4 mRNA均顯著高于C組（均P < 0.01），H-6 h組指標(biāo)顯著高于H-1組（P < 0.05）。M各組指標(biāo)均與C組無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

2.5 MEF2c mRNA

圖9顯示，H-0、1、6 h組和M-0、1h組MEF2c mRNA顯著高于C組（均P < 0.01），且M-0、1 h組指標(biāo)顯著低于H對(duì)應(yīng)組（均P < 0.05）。H-1h組指標(biāo)顯著高于H-0h組（P < 0.05）和H-6h組（P< 0.01），M-0、1 h組之間無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。

3 討論

3.1 運(yùn)動(dòng)對(duì)p38、NF-B活性、IL-6 mRNA的影響

多數(shù)研究認(rèn)為p38有助肌肉發(fā)生，但也有研究提出，p38對(duì)肌肉的發(fā)生作用取決于其所處的肌肉發(fā)生階段。Weston報(bào)道，肢芽培養(yǎng)過(guò)程抑制p38卻促進(jìn)了肌管的形成，該研究認(rèn)為，p38在肌肉發(fā)生的分化和分化后階段起到相反作用，p38會(huì)促進(jìn)肌肉干細(xì)胞的分化，但隨后為了避免形成早熟的肌管，又抑制了已分化細(xì)胞的延長(zhǎng)、極化、聚集和融合［5］。目前，對(duì)肌肉發(fā)生分化后階段的分子事件了解還很匱乏，Weston的結(jié)果也有待更多證據(jù)來(lái)支持。本研究發(fā)現(xiàn)，M-0、1、6 h組及H-0、1、6h組P-p38上調(diào)（與C組相比），且H-0、1、6h組上調(diào)幅度較大（與M對(duì)應(yīng)組相比），而p38始終未變。結(jié)果提示，p38在急性運(yùn)動(dòng)后早期即可激活，激活幅度有強(qiáng)度依賴性，急性運(yùn)動(dòng)不影響p38總水平?？紤]到運(yùn)動(dòng)對(duì)于肌肉發(fā)生和存活是有益的，因此激活的p38作用應(yīng)與此一致而非相悖，p38激活的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性也與已知的“運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度越大，肌肉發(fā)生效果越好”相符。已知p38調(diào)節(jié)肌肉發(fā)生有多個(gè)途徑［6-8］，調(diào)節(jié)MRFs及MEF2活性或含量是其中之一，有報(bào)道，p38可以直接磷酸化并增強(qiáng)MEF2a、2c的轉(zhuǎn)錄活性，也能誘導(dǎo)Myf-5、MyoG等成肌因子及MEF2表達(dá)，具體機(jī)制未知［8-11］，但可能該調(diào)節(jié)存在 NF-κB 依賴性［4］。

體外研究顯示，p38調(diào)控NF-κB的途徑主要有兩條：誘導(dǎo)IκBa從NF-κB分離，允許NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合；通過(guò)CBP/P300間接誘導(dǎo)p65的轉(zhuǎn)激活［4］。本研究檢測(cè)P-p65發(fā)現(xiàn)，H-0、1、6 h及M-0、1組指標(biāo)上調(diào)（與C組相比），且H-0、1h組指標(biāo)較高（與M對(duì)應(yīng)組相比）。這提示，NF-B激活的幅度及持續(xù)時(shí)間都具有運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性。除運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性外，P-p65與P-p38動(dòng)力學(xué)特征還有諸多相似點(diǎn)——大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，二者上調(diào)時(shí)段完全一致（0、1、6 h）；中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，二者均在0、1h上調(diào)，但是P-p65恢復(fù)正常水平時(shí)間（6 h）早于P-p38（16 h）；大、中強(qiáng)度條件，二者峰值出現(xiàn)時(shí)刻相同（1h）。上述表明，運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)下，二者動(dòng)力學(xué)特征相似，特別是在大強(qiáng)度條件下。筆者推測(cè)，運(yùn)動(dòng)條件下，p38是NF-κB的調(diào)節(jié)劑，而NF-κB則承繼了p38的生物信號(hào)。當(dāng)然，生物信號(hào)干擾因素眾多，運(yùn)動(dòng)條件下NF-κB 的變化是否為p38依賴性仍需p38激動(dòng)劑或阻斷劑來(lái)確認(rèn)。本研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)不影響p65水平，這與以往研究報(bào)道一致。近年來(lái)，研究已確認(rèn)，NF-κB作用絕不是單純的擴(kuò)大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)、引起肌肉質(zhì)量流失或肌肉萎縮［13-15］，某些條件下，NF-κB對(duì)于肌肉的發(fā)生或生存有促進(jìn)作用——IGF-II誘導(dǎo)的L6E9大鼠成肌細(xì)胞發(fā)生過(guò)程中NF-κB被激活［16］，阻斷NF-κB下調(diào)C2C12細(xì)胞某些結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白的表達(dá)［4］，經(jīng)過(guò)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，老年大鼠肌肉NF-B活性提高、衰老引起的肌肉流失減緩、肌肉功能得到改善［2］。本研究采用的是對(duì)肌肉發(fā)育和存活有益的向心收縮運(yùn)動(dòng)，因此NF-B激活作用也應(yīng)該與此一致而不太可能是促進(jìn)炎癥或肌肉流失。對(duì)于NF-B矛盾的功能，Ho提出，持續(xù)的NF-B激活可能導(dǎo)致肌肉損傷和流失（如傷?。?，間歇式的NF-B激活可能促進(jìn)正常肌肉發(fā)育（如運(yùn)動(dòng)）［16］，但Ho只明確了現(xiàn)象而未解釋其機(jī)理。轉(zhuǎn)錄因子最終效用依賴于激活的基因，因此筆者認(rèn)為，病理性反應(yīng)中NF-B激活與運(yùn)動(dòng)性NF-B激活作用差異實(shí)際提示了不同條件下，轉(zhuǎn)錄因子NF-B將選擇性激活編碼不同功能蛋白的基因?；蜻x擇性激活的機(jī)制將是未來(lái)研究的具體方向。NF-B靶基因中不包括肌肉特異性基因，也不包括肌肉發(fā)生核心調(diào)控因子MRFs或肌肉發(fā)生增強(qiáng)因子MEF2的基因，它對(duì)肌肉發(fā)生調(diào)節(jié)可能部分與其靶基因IL-6有關(guān)［3］。

IL-6與IL-1等炎癥因子不同，與損傷及炎癥關(guān)聯(lián)并不大，并且有助于多種細(xì)胞的發(fā)生，如造血干細(xì)胞的增殖、B細(xì)胞的分化與成熟、T細(xì)胞的增殖與分化、肝細(xì)胞分化、神經(jīng)細(xì)胞的分化、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的增生等［9］。IL-6也是肌肉發(fā)生所必需的，IL-6-/-小鼠的肌肉發(fā)育明顯遲緩［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，M-0、1 h組及H-0、1、6 h組IL-6 mRNA上調(diào)（與C組相比），且H-0、1 h組IL-6 mRNA較高（與M對(duì)應(yīng)組相比）。對(duì)比P-p65與IL-6的動(dòng)力學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)二者很相似——在大強(qiáng)度和中等運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度下，P-p65上調(diào)時(shí)段均與IL-6 mRNA上調(diào)時(shí)段完全一致；二者上調(diào)幅度和時(shí)間均具有運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性。研究提示，運(yùn)動(dòng)條件下，NF-B激活是IL-6基因表達(dá)重要誘因。

3.2 運(yùn)動(dòng)對(duì)MRFs、MEF2c mRNA的影響

MRFs是肌肉發(fā)生通路主要效應(yīng)因子，能夠促進(jìn)肌肉特異性基因（如-actin、煙堿乙酰膽堿受體、-原肌球蛋白、MHC、結(jié)蛋白、肌鈣蛋白C、CK、MCK等）表達(dá)、激活，引導(dǎo)肌肉成體干細(xì)胞增殖或分化。MEF2則是MRFs的增強(qiáng)子。本研究發(fā)現(xiàn)：H-6 h、M-6 h組MyoD mRNA上調(diào)（與C組相比），H-6 h組上調(diào)較大（與M對(duì)應(yīng)組比）；H-6、16 h組MyoG mRNA上調(diào)、M組未變；H、M組Myf-5 mRNA均未變；H-1、6 h組MRF4 mRNA上調(diào)、M組未變；H-0、1、6 h組MEF2c mRNA上調(diào)、M-0、1 h組上調(diào)，且H-0、1h組較高（與M對(duì)應(yīng)組比較）。結(jié)果提示，MyoD、MEF2c mRNA對(duì)大、中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)刺激均敏感，MyoG、MRF4基因表達(dá)只對(duì)較高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)刺激有反應(yīng)，Myf-5對(duì)運(yùn)動(dòng)刺激不敏感，推測(cè)它對(duì)運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)肌肉重塑的意義不大。與MRFs mRNA相比，H、M組MEF2c mRNA上調(diào)均較早（0 h），作為MRFs的輔助因子，它在運(yùn)動(dòng)早期的上調(diào)目的可能在于為MRFs激活肌肉特異基因的表達(dá)做好準(zhǔn)備。已知MRFs表達(dá)具有一定時(shí)空特征，時(shí)間上，Myf-5、MyoD在衛(wèi)星細(xì)胞激活、增殖生成成肌細(xì)胞過(guò)程中開(kāi)始上調(diào)，而MRF4與MyoG在成肌細(xì)胞分化為肌管期開(kāi)始上調(diào)；空間分布上，MyoD高表達(dá)于快肌，MyoG高表達(dá)于慢?。?7］；功能上，MRFs成員有重疊，也有差異，目前尚未完全研究清楚。一些研究認(rèn)為，MyoD、Myf-5引導(dǎo)衛(wèi)星細(xì)胞的激活（增殖形成成肌細(xì)胞），而MRF4、MyoG則引導(dǎo)分化（成肌細(xì)胞分化為肌管）［18］，也有研究認(rèn)為MyoD與MRF4均參與了肌肉干細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控［19，20］。本研究中，MRFs mRNA 結(jié)果表明，急性運(yùn)動(dòng)釋放了促肌肉增殖或分化的信號(hào)。MyoD與MyoG也是決定肌肉表型的關(guān)鍵因子，MyoD可激活MHC IIb、X及某些酵解酶基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)快肌生成和發(fā)育，相反，MyoG有助MHC I、IIa和某些氧化酶基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)慢肌的生成發(fā)育［16］，因而，二者比值變化反映了肌肉表型轉(zhuǎn)化的波動(dòng)。本研究發(fā)現(xiàn)，H-6 h組MyoD mRNA/ MyoG mRNA比值上升、H-16 h組比值下降、H-24 h恢復(fù)正常（與C組相比），提示，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后早期，肌肉類型變化為慢—快，后期則相反，為快—慢型轉(zhuǎn)化，不難看出，這個(gè)波動(dòng)特征與超量恢復(fù)類似，在恢復(fù)過(guò)程中會(huì)有個(gè)變化的“反轉(zhuǎn)”，然后再回到正常水平。M-6 h組該比值上升、M-16h組恢復(fù)正常（與C組相比），顯然，中等強(qiáng)度后，該比值恢復(fù)正常（16 h）比大強(qiáng)度（24 h）要早，提示，急性中等運(yùn)動(dòng)后早期，肌肉類型轉(zhuǎn)換也為慢—快，類型轉(zhuǎn)化過(guò)程在較短時(shí)間即恢復(fù)運(yùn)動(dòng)前水平。研究中，我們沒(méi)有觀察到中等強(qiáng)度后，類似大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后出現(xiàn)的比值變化的“反轉(zhuǎn)”，考慮到中等強(qiáng)度對(duì)肌肉的快—慢轉(zhuǎn)化效果更強(qiáng)于大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，“反轉(zhuǎn)”應(yīng)該存在，推測(cè)“反轉(zhuǎn)”應(yīng)該發(fā)生在6-16 h之間。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，MRFs mRNA上調(diào)順序是MRF4、MyoD及MyoG，中等強(qiáng)度后，只有MyoD上調(diào)，MRFs基因表達(dá)次序與不同特征的肌肉的塑造有何聯(lián)系值得進(jìn)一步調(diào)查。需要指出，MRFs、MEF2c均為轉(zhuǎn)錄因子，判斷其功能最佳指標(biāo)是DNA結(jié)合活性而非mRNA或蛋白水平，未來(lái)研究還需要補(bǔ)充這方面的數(shù)據(jù)。

3.3 IL-6與MEF2c及MRFs的聯(lián)系

本研究中，MRFs及MEF2 mRNA的變化體現(xiàn)了急性運(yùn)動(dòng)對(duì)肌肉發(fā)生進(jìn)程的干預(yù)，它的上游機(jī)制為何？細(xì)胞生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，IL-6-/-能夠抑制肌肉發(fā)生［3］，以往研究也有報(bào)道提出，IL-6可能是介導(dǎo)p38、NF-B肌肉發(fā)生信號(hào)的重要環(huán)節(jié)［4］，是否急性運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)下， IL-6通過(guò)上調(diào)肌肉發(fā)生主要效應(yīng)因子MRFs或MEF2c的基因表達(dá)來(lái)加強(qiáng)肌肉生物發(fā)生進(jìn)程？它們之間關(guān)系是否密切？本研究對(duì)IL-6 mRNA及MRFs、MEF2 mRNA的動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行了比較。

本研究發(fā)現(xiàn)，大、中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，IL-6與MEF2c mRNA 上調(diào)期完全相同（分別是 0、1、6 h；0、1 h），并如前文所述，二者上調(diào)幅度和時(shí)間均為運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度依賴性的；中等強(qiáng)度后，IL-6 mRNA上調(diào)（0、1 h）早于 MyoD mRNA上調(diào)（6 h），并且二者上調(diào)時(shí)段無(wú)交集，其余MRFs mRNA未改變，因此無(wú)需比較；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，IL-6 mRNA上調(diào)（0、1、6 h）早于 MyoD mRNA（6 h）、MyoG mRNA（6、16 h）、MRF4 mRNA（1、6 h），即上調(diào)時(shí)段有部分一致。將指標(biāo)變化時(shí)段的相似程度視為衡量因子之間關(guān)聯(lián)程度密切與否的標(biāo)尺，本研究推斷，運(yùn)動(dòng)條件下，IL-6可能對(duì)MEF2c基因表達(dá)有比較直接的作用，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)下，它與MyoD、MyoG、MRF4的基因表達(dá)可能無(wú)直接關(guān)聯(lián)，然而，這個(gè)關(guān)聯(lián)在運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度增大時(shí)可能變得緊密。IL-6與MRFs及MEF2c的關(guān)系仍需通過(guò)IL-6基因敲除等手段來(lái)驗(yàn)證，特別需要指出，MRFs成員之間、MRFs與MEF2c會(huì)相互影響，如MyoD與Myf-5能夠上調(diào)MyoG［21］，MRF4 可 以 上 調(diào) MyoG 和 MEF2［22］，但又會(huì)引起MyoD的降解［21］，未來(lái)研究方案設(shè)計(jì)如何排除指標(biāo)相互干擾，確認(rèn)IL-6等因子與MRFs各成員具體關(guān)系還是個(gè)難點(diǎn)。

4 總結(jié)

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