楊蒙蒙，張婷婷，劉新友，覃 華，張 琰(第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院藥學部，西安 710038)

甲基丁香酚存在于所有細辛屬植物中，是中國細辛屬植物揮發(fā)油的特征性成分［1］，可作為細辛揮發(fā)油的品質(zhì)評價標準。中藥揮發(fā)油微乳由肉桂、細辛等幾種中藥揮發(fā)油提取部位組成，用于治療皮膚炎癥、潰爛等，其中細辛揮發(fā)油為主要藥物成分之一，本研究建立RP-HPLC法檢測中藥揮發(fā)油微乳中甲基丁香酚的含量，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

可見紫外分光光度計(廠家:島津，型號:UV-265);電子天平(廠家:島津，型號:BL-620S);超聲儀(廠家:北京醫(yī)療設(shè)備二廠，型號:CX-I);高效液相色譜儀(廠家:島津，型號:SPD-10AVPSCL-10AVP/LC-10ATVP);保護柱 (廠家:大連依利特分析儀器有限公司，型號:C184.6 mm×10 mm);色譜柱(廠家:大連依利特分析儀器有限公司，型號:Hypersil ODS2 4.6 mm×250 m);

1.2 試藥

中藥揮發(fā)油微乳(第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院藥劑科，批號:20090721、20090722、20090723);甲基丁香酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:111642-200301);水為雙蒸水;甲醇為色譜純;容量瓶。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2］

色譜柱:Hypersil ODS2柱(4.6 mm×250 mm);流動相∶甲醇-水(80∶20);流速:1.0 mL·min-1，檢測波長:275 nm，進樣量:20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取甲基丁香酚對照品24.84 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL相當于2.484 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

量取中藥揮發(fā)油微乳適量，加甲醇溶解，超聲20 min破乳，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，收集續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對照品溶液 125、250、500、1 000、1 500 μL置10 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度。得到對照品標準溶液，分別精密吸取對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜中進行測定，以峰面積為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程如下:Y=19 805X+7 004.7，r=0.999 1。測定結(jié)果表明甲基丁香酚在12.42～49.68 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 陰性對照溶液的制備

按照處方比例，除去細辛，按制備工藝方法制得陰性對照樣品。精密量取本品適量，加甲醇溶解，超聲20 min破乳，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，收集續(xù)濾液作為陰性對照溶液。結(jié)果在陰性對照樣品的色譜圖上，與甲基丁香酚相應(yīng)位置無吸收峰，在供試品溶液色譜圖上，甲基丁香酚與其他雜質(zhì)峰達到基線分離，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

2.6 精密度試驗

精密吸取甲基丁香酚對照品溶液20 μL，重復(fù)連續(xù)進樣6次，依次測得峰面積為 492 785、491 515、488 368、487 628、486 640、499 524計算RSD=0.98%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取中藥揮發(fā)油微乳供試品溶液 1 份，分別于 0、1、2、4、6、21 h進樣，共 6次，每次進樣 20 μL，峰面積的 RSD=3.7%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的中藥揮發(fā)油微乳適量共6份，分別精密加入甲基丁香酚對照品適量，按“2.3”項下操作制備供試品溶液，過濾后按“2.1”項下色譜條件檢測，進樣量為 20 μL，計算回收率，平均回收率為98.51%，RSD為1.22%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)Tab 1 Results of recovery test(n=6)

2.9 樣品含量測定

按“2.3”項下方法制備3份供試品溶液，分別精密吸取各20 μL進樣，按色譜條件測定峰面積，以外標一點法計算甲基丁香酚含量，每份樣品測定3次，結(jié)果見表2。

表2 樣品中甲基丁香酚含量測定結(jié)果(n=3)Tab 2 Determination results of methyleugenol in sample(n=3)

3 討論

中藥揮發(fā)油微乳是一種水包油型微乳制劑，該微乳系統(tǒng)包括中藥揮發(fā)油、油相、表面活性劑、助表面活性劑和水，如不對制劑進行前處理，則會導致油脂成分在色譜柱中殘留，對柱子造成損害。對微乳的前處理主要是進行破乳，常用的破乳方法分為物理和化學法2種［3］，由于色譜流動相中含有甲醇且甲基丁香酚易溶于甲醇，因此選擇甲醇為溶劑通過超聲法進行破乳。甲基丁香酚文獻報道的檢測方法多采用氣相色譜［4，5］，筆者采用RP-HPLC方法對中藥揮發(fā)油微乳中的甲基丁香酚進行檢測，在本研究的色譜條件下，中藥揮發(fā)油微乳得到很好的分離且峰形佳、保留時間適中，同時系統(tǒng)具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。本法簡便、準確、可靠，靈敏度高，可用于中藥揮發(fā)油微乳的質(zhì)量控制。

［1］黃保希.細辛的化學成分研究述評［C］.中華中醫(yī)藥學會中藥基礎(chǔ)理論分會第二屆臨床中藥學學術(shù)研討會論文集，2009:407.

［2］吳振剛，王慶偉，劉雪英，等.反相高效液相色潽法測定細辛揮發(fā)油中甲基丁香酚及黃樟醚含量［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2008，29(13):1175.

［3］李 萌，王杏林，葛志強，等.HPLC法測定依托泊苷亞微乳中的藥物含量［J］.中國新藥雜志，2007，16(17):1390.

［4］袁尚儀，魏俊德，林 洪.宜昌細辛揮發(fā)油化學成分的GC-MS測定分析［J］.中國中藥雜志，2004，29(3):280.

［5］楊厚玲，邱 琴，陳婷婷，等.不同方法提取的北細辛揮發(fā)油的氣質(zhì)聯(lián)用成分分析［J］.中國藥學雜志，2007，42(13):1031.