王菊榮，李明春，王冬冬，張 偉（解放軍第401醫(yī)院，青島市 266071）

痤瘡發(fā)病原因比較復(fù)雜，主要與雄性激素分泌亢進(jìn)，痤瘡丙酸桿菌侵入，毛囊、皮脂腺導(dǎo)管角化栓塞密切相關(guān)。目前，治療痤瘡的外用制劑種類繁多，有霜?jiǎng)?、凝膠劑、洗劑、酊劑、搽劑等。制劑多為單方[1]或只具備一、兩方面藥理活性藥物組成的復(fù)方[2，3]，尚未有既含有抗菌藥物和抑制油脂分泌的藥物，又含有維甲酸類溶解角質(zhì)的復(fù)方藥劑。中成藥方劑多以清熱解毒為治療基礎(chǔ)[4]，也未能全面對(duì)抗痤瘡的諸多病因，所以大多藥物制劑只對(duì)輕、中度痤瘡療效較好，對(duì)重度痤瘡的治療，常需要多種制劑聯(lián)合應(yīng)用[5～7]。故此，筆者選擇臨床治療痤瘡療效較好、價(jià)格合適、容易得到的阿奇霉素[8]、螺內(nèi)酯[2]、維A酸組方，依據(jù)微乳理論和乳膏制備工藝，制備具有微乳特性的“復(fù)方痤瘡微乳膏”，將3種藥物分別以納米粒形式分散于微乳劑中，達(dá)到良好的相容性和穩(wěn)定性。2008年12月31日中華人民共和國(guó)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予其“發(fā)明專利”，專利號(hào)：ZL 2006 1 0044001.1，證書(shū)號(hào)：第456920號(hào)。為探討該制劑療效，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究如下。

1 材料

1.1 試藥

高、低濃度復(fù)方痤瘡微乳膏（批號(hào)：20090325、20090329，含量：阿奇霉素0.5%、0.4%，螺內(nèi)酯0.25%、0.2%，維A酸0.035%、0.025%）、阿A微乳膏（批號(hào)：20090326，含量：阿奇霉素0.4%、維A酸0.025%）均由解放軍第401醫(yī)院提供；維A酸乳膏（迪維霜，重慶華邦制藥股份有限公司，批號(hào)：2008098，含量：0.025%）；煤焦油（黑色黏稠狀，青島市煤氣公司），其稀釋液為煤焦油-液體石蠟油（1∶1）混合后取上清液；美加凈護(hù)手霜（市售，有效期至2012-11-25）。

1.2 動(dòng)物

成年新西蘭大白兔20只，♀、♂各半，體質(zhì)量2.5～3.0 kg，成對(duì)隔欄飼養(yǎng)，由青島市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK魯（20090007）。

1.3 儀器

BX-51型顯微攝影器材（日本Olympus公司）。

1.4 菌落

表皮葡萄球菌稀釋液（解放軍第401醫(yī)院提供，批號(hào)：ATCC12228，濃度：108個(gè)·mL－1）。

2 方法

2.1 分組

20只兔，2只為空白對(duì)照組，18只為實(shí)驗(yàn)組，再將實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為3組，每組6只，♀、♂各半，第1組左耳設(shè)為A組，右耳設(shè)為B組，第2組左耳設(shè)為C組，右耳設(shè)為D組，第3組左耳設(shè)為E組，右耳設(shè)為F組。

2.2 模型建立

每天涂煤焦油稀釋液0.25 mL于實(shí)驗(yàn)組兔耳內(nèi)側(cè)耳管開(kāi)口處2 cm×2 cm范圍，連涂15 d，次日將表皮葡萄球菌稀釋液30μL涂于兔耳，再繼續(xù)涂煤焦油稀釋液7 d，然后飼養(yǎng)5 d，共計(jì)造模時(shí)間28 d。

2.3 給藥

A組，外涂高濃度復(fù)方痤瘡微乳膏作為實(shí)驗(yàn)1組；B組，外涂阿A微乳膏作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組；C組，外涂低濃度復(fù)方痤瘡微乳膏作為試驗(yàn)2組；D組，外涂迪維霜作為陽(yáng)性對(duì)照組；E組，外涂美加凈護(hù)手霜作為陰性對(duì)照組；F組不涂任何藥物作為模型對(duì)照組。各組模型兔耳涂藥量均為（0.5±0.05）g·d－1，連續(xù)用藥14 d。

2.4 評(píng)價(jià)

2.4.1 肉眼判斷。給藥前、后用照相機(jī)和手指觸摸記錄凸起痤瘡數(shù)量。

2.4.2 組織學(xué)判斷。給藥前，取有代表性的1只兔耳痤瘡模型組織；在末次給藥后48h，每組取1只兔耳（距邊緣10 mm處）痤瘡模型組織；均用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm厚度切片，75%乙醇→無(wú)水酒精梯度脫水，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察模型組織狀況。

以上評(píng)價(jià)指標(biāo)為：“-”表示正常組織，無(wú)痤瘡；“+”表示表皮增厚，棘上皮細(xì)胞增生，痤瘡數(shù)≤4個(gè)；“++”表示表皮增厚，棘上皮增生，真皮內(nèi)有淋巴細(xì)胞，毛囊漏斗部有松散的角化細(xì)胞，痤瘡數(shù)5～7個(gè)；“+++”表示毛囊漏斗部顯著擴(kuò)張，角質(zhì)栓塞，皮脂腺增生，炎性細(xì)胞明顯，正常組織排列結(jié)構(gòu)被破壞，痤瘡數(shù)＞7個(gè)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法的秩和檢驗(yàn)及t檢驗(yàn)[9]。

3 結(jié)果

3.1 痤瘡模型

3.1.1 肉眼觀察。正常兔耳柔軟，毛細(xì)血管清晰，有良好的透光度，兔耳管開(kāi)口處為整齊排列的毛囊和纖細(xì)的毛發(fā)。外涂煤焦油稀釋液15 d，兔耳腫脹，毛孔粗大，毛囊角質(zhì)化增生；涂表皮葡萄球菌液和煤焦油后，兔耳腫脹厚度達(dá)4～5 mm，出現(xiàn)較多隆起的丘疹、膿皰，顯示有黑色、紅色、灰白、灰褐色，直徑1～3 mm，高度1～2.5 mm不等。各組模型外觀狀況相同。

3.1.2 顯微鏡觀察。正常兔耳表皮較薄，1層顆粒細(xì)胞層，2～3層棘細(xì)胞層，毛囊皮脂腺結(jié)構(gòu)清晰。模型兔耳表皮明顯增厚，其棘細(xì)胞層增厚顯著，毛囊皮脂腺體積增大，表皮角化，毛囊角栓出現(xiàn)，真皮毛細(xì)血管擴(kuò)張，內(nèi)充滿紅血球，毛囊周圍及間質(zhì)纖維結(jié)締組織內(nèi)較多小塊狀或散在炎性細(xì)胞，并有中性粒細(xì)胞及嗜酸粒細(xì)胞，毛囊上皮增生呈不規(guī)則團(tuán)塊狀或互相融合，失去正常組織排列結(jié)構(gòu)，凸起痤瘡的毛囊擴(kuò)大，毛囊漏斗部擴(kuò)大明顯，形成角質(zhì)栓；符合人類痤瘡特征。

3.2 涂藥后痤瘡模型改變情況

3.2.1 肉眼觀察。A組，兔耳的腫脹、表皮角化物、痤瘡全部消失，基本等同正常皮膚。B組，表皮角化增生層大多數(shù)消退，丘疹、膿胞消失，留有印痕，但尚有個(gè)別未消退的痤瘡及角化增生物。C組，兔耳表皮角化增生物基本消退，表面平滑，痤瘡消失，留有輕微印記，觸摸無(wú)凸起感。D組，兔耳腫脹均減輕，表面角化增生物基本消退，表面光滑，但痤瘡?fù)蛊鹈黠@，手指觸摸較硬，直徑1～2 mm，高度1～2 mm。E組，兔耳表皮腫脹程度及角化增生略有減輕，痤瘡略有縮小，直徑1～2.5 mm，高度1～2.0 mm。F組，兔耳表皮角化物變硬，部分皮損干縮，受細(xì)菌感染的皮損體積增大。各組模型改變具體情況詳見(jiàn)圖1。

3.2.2 顯微鏡觀察。A組，表皮組織、毛囊皮脂腺等基本恢復(fù)正常。B組，表皮仍有增厚，棘上皮細(xì)胞有輕度增生。C組，表皮組織略有增厚，基本等同于正常皮膚。D組，表皮組織有增厚，棘上皮增生，真皮內(nèi)有淋巴細(xì)胞、炎性細(xì)胞。E組，兔耳表皮增生及角化明顯，炎性細(xì)胞清晰可見(jiàn)。F組，毛囊角化擴(kuò)大，血管擴(kuò)張，皮脂腺增生明顯，炎性細(xì)胞增多。具體各組模型組織學(xué)改變情況詳見(jiàn)圖2。

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果

給藥前，A、B、C、D、E、F組痤瘡模型狀況無(wú)差異（P＞0.05）。給藥后，A、B、C、D、E組均有不同程度的改善，而F組加重，表明此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。模型評(píng)價(jià)情況及統(tǒng)計(jì)分析見(jiàn)表1。

由表1可知，與E組比較，A、C組有極顯著性差異（P＜0.001），B、D組有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明2個(gè)實(shí)驗(yàn)組的治療效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。與B組或D組比較，A組有極顯著性差異（P＜0.01），C組有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明高濃度復(fù)方痤瘡微乳膏的對(duì)痤瘡模型的治療作用優(yōu)于低濃度復(fù)方痤瘡微乳膏。

圖1 各組兔耳涂藥前、后外觀圖a.空白對(duì)照；b.A組；c.B組；d.C組；e.D組；f.E組；g.F組Fig 1 Appearance of ears in model rabbit before and after administrationa.blank control；b.group A；c.group B；d.group C；e.group D；f.group E；g.group F

圖2 各組兔耳涂藥前、后組織切片圖（HE，10×10）a.空白對(duì)照；b.A組；c.B組；d.C組；e.D組；f.E組；g.F組Fig 2 Histological slice of ear acne model rabbit before and after administratio（nHE，10×10）a.blank control；b.group A；c.group B；d.group C；e.group D；f.group E；g.group F

表1 各組兔耳涂藥前、后皮損組織學(xué)評(píng)價(jià)及其統(tǒng)計(jì)分析（n＝6）Tab 1 Histological evaluation and statistical analysis of skin lesion in ear of acne model rabbit before and after administration（n＝6）

4 討論

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，用煤焦油0.5 mL每天外涂兔耳[10，11]，14 d后形成厚厚的煤焦油結(jié)痂，結(jié)痂粘連著表皮，難以揭去，飼養(yǎng)數(shù)日后，去掉結(jié)痂僅有微小的黑色角栓，無(wú)肉眼可見(jiàn)的隆起樣痤瘡。分別給予復(fù)方痤瘡微乳膏和迪維霜2周，結(jié)果各兔耳增厚的角質(zhì)以及輕度角栓均能完全消失，恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)明顯差別?？梢?jiàn)煤焦油刺激引起的兔耳角化增生及輕度角質(zhì)栓，迪維霜完全能對(duì)抗。但人類痤瘡?fù)殡S著油脂分泌和細(xì)菌感染。而煤焦油過(guò)于黏稠，連續(xù)涂抹數(shù)次后，形成煤焦油結(jié)痂層，后續(xù)涂煤焦油就難以滲透進(jìn)入皮內(nèi)，導(dǎo)致模型角質(zhì)栓塞化程度不夠，達(dá)不到人類痤瘡的病理狀況。因此實(shí)驗(yàn)采用液體石蠟油稀釋煤焦油，令其滲透性增加，促使兔耳腫脹加速，細(xì)菌容易浸入，使建立的痤瘡模型更接近人類痤瘡。

實(shí)驗(yàn)中雖未實(shí)施雄性激素指標(biāo)，但將兔子成對(duì)隔欄飼養(yǎng)，兔子處于發(fā)情期狀態(tài)，兔耳腫脹程度較單獨(dú)飼養(yǎng)明顯加快，尤其雄性兔耳角質(zhì)增厚更明顯，丘疹、膿胞體積大，數(shù)量多；并且在實(shí)驗(yàn)中增設(shè)對(duì)照組，給予不含螺內(nèi)酯的制劑——阿A微乳膏，考察維A酸與抗菌藥物組合對(duì)模型痤瘡的治療作用。結(jié)果，復(fù)方痤瘡微乳膏優(yōu)于阿A微乳膏，確證治療痤瘡的制劑中不可缺少對(duì)抗雄性激素的藥物，因此螺內(nèi)酯在該處方中不可缺少。

涂藥結(jié)束1周后，實(shí)驗(yàn)組兔耳的結(jié)痂、印記全部消失，與正常兔耳無(wú)異。陽(yáng)性對(duì)照組則仍留有凸起的硬結(jié)節(jié)，繼續(xù)飼養(yǎng)2個(gè)月未見(jiàn)消退。其原因可能是迪維霜為普通乳劑，且只含有維A酸單一藥物，因此僅對(duì)表皮角化增生物的作用顯著，而對(duì)皮下細(xì)菌感染和油脂栓塞的作用較弱。實(shí)驗(yàn)藥物采用微乳劑型，微乳劑較普通乳劑更容易攜帶藥物進(jìn)入皮下組織，藥效作用是由里向外進(jìn)行的；所以停藥后會(huì)有后效應(yīng)，愈后效果顯著。

綜上所述，復(fù)方痤瘡微乳膏是含有抑制細(xì)菌、對(duì)抗雄性激素和溶解角質(zhì)3種藥物的制劑，可同時(shí)產(chǎn)生3方面的藥理作用，構(gòu)成一個(gè)立體治療體系，協(xié)同對(duì)抗痤瘡的病因，故而治療效果較好。

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