段　啟　莊義修　陳華師

摘 要:目的:測定不同產(chǎn)地梔子中梔子苷的含量。方法:采用外標法,大連依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱,流動相:乙腈-水(15∶85),流速為1.0mL/min,柱溫25℃,檢測波長為238nm。結果:測得7產(chǎn)地的10批梔子中梔子苷含量最高為7.06%,最低為2.89%。結論:不同產(chǎn)地梔子中梔子苷含量由于土壤等各種因素的影響,差異較為明顯。

關鍵詞:梔子;梔子苷;高效液相色譜法

中圖分類號:R284文獻標識碼:A文章編號:1673-2197(2009)06-0020-02

梔子為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實,為臨床常用中藥,其性寒味苦,無毒,入心、肝、肺、三焦經(jīng),具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功效。梔子藥理研究表明其具有抗炎、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、保肝利膽、抗凝血等作用[1],環(huán)烯醚萜類化合物和二萜色素類化合物是梔子的主要成分,也是其主要生物活性物質。梔子苷是梔子的主要活性成分,具有抗炎、解熱、利膽等作用;水提取物有利膽、降壓、抗菌消炎作用;醇提取物有解熱、鎮(zhèn)靜作用。本文建立了HPLC測定梔子中梔子苷含量的方法[2],對7產(chǎn)地的10批梔子中梔子苷含量進行了測定,為中藥梔子的質量評價提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國Agillent 1100高效液相色譜儀,二級陣列檢測器,1100色譜工作站。梔子苷(Geniposide)對照品(批號110749-200309)購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈和甲醇均為色譜純,水為純化水。藥材及中試飲片樣品購自不同產(chǎn)地,其中江西泰和、江西秀谷、浙江淳安各2批,江西永豐、湖南瀏陽、浙江蒼南、福建貫嶺各1批。經(jīng)廣東食品藥品職業(yè)學院中藥標本館鑒定為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

大連依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱。流動相:乙腈-水(15∶85),流速為1.0mL/min,柱溫25℃,檢測波長為238nm,進樣量10μL。色譜圖見圖1。

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2.2 對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷對照品0.74mg,置于20mL容量瓶中,用50%甲醇溶解定容至刻度,制成含有梔子苷0.037mg/mL的儲備液,即得。

2.3 供試品溶液的制備

稱取梔子粉末(過2號篩)約0.50g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,稱定質量,超聲20min,放涼,補重,用0.45μm微孔濾膜過濾即可進樣。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取梔子苷對照品儲備液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,在上述色譜條件下進行分析,以梔子苷色譜峰面積(Y)對質量濃度(X)繪制標準曲線。結果表明:梔子苷在0.74~37μg/mL范圍內(nèi),峰面積與質量濃度呈良好的線性關系,回歸方程為:Y=1153X+17.045,r=0.9996。

2.5 精密度試驗

精密吸取梔子供試品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進樣6次,分別測定梔子苷的峰面積,結果RSD為:0.09%。

2.6 重現(xiàn)性試驗

取梔子6份各約0.50g,精密稱定,按“2.3”項下操作,按上述色譜條件測定各樣品的峰面積,計算各對照品的質量分數(shù),梔子苷的RSD為:0.87%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取梔子供試品溶液,分別于0、1、2、4、6、8h在上述色譜條件下進樣分析。計算梔子苷的含量,RSD為:0.18%,結果表明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已知量的梔子藥材粉末約0.20g,精密稱定,分別按相當于藥材中梔子苷100%的量加入對照品溶液,按“2.3”項下操作,配制成高、中、低3個水平的加樣供試品溶液(各水平平行操作3份),在上述色譜條件下進樣分析,計算回收率。梔子苷的平均回收率為100.88%,RSD為1.75%。

2.9 樣品測定

按上述方法對各產(chǎn)地梔子進行測定,進樣量為10μL,以外標法計算梔子苷的含量。結果見表1。

3 討論

(1)本文利用DAD檢測器獲得梔子苷的HPLC圖譜;出峰時間適中,峰形對稱,分離度符合要求;所用樣品含量測定提取方法的方法學考察符合要求;簡化了梔子含量測定的繁瑣步驟,為探索制訂完善梔子原藥材、炮制飲片的質量標準提供了依據(jù)。檢測結果表明:不同產(chǎn)地梔子含量差別明顯,福建產(chǎn)梔子苷含量較高,為7.06%;江西永豐產(chǎn)梔子苷較低,為2.89%。2005年版藥典規(guī)定梔子中梔子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)含量不得低于1.8%[3],說明10批藥材含量均符合標準要求,但同時表明藥材產(chǎn)地的不同環(huán)境和土壤條件對藥材內(nèi)在活性成分影響明顯。

(2)檢測波長的選擇:經(jīng)過Agilent 1100 DAD三維圖譜分析,梔子苷在238nm處有最大吸收,因此確定238nm為其檢測波長。

(3)流動相的選擇:本實驗曾經(jīng)試過乙腈-水、甲醇-水等不同的流動相系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)乙腈-水系統(tǒng)可獲得較好峰形和適合的極性范圍;進而嘗試了不同的乙腈-水流動相比例,結果乙腈-水(15∶85)流動相洗脫,獲得較好的分離,3個成分的分離度均大于1.5,拖尾因子在0.95～1.05。

(4)提取方法的選擇:分別考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等不同提取溶劑,超聲、回流等不同提取方式,并進行了提取時間為10min、15min、20min、30min、1h,提取次數(shù)為1次、2次的考察,結果表明,以甲醇超聲20min 1次即可提取完全,與長時間的提取結果相差很小,因此確定該提取方法。

(5)如今市場上藥材良莠不齊,本實驗對10批主產(chǎn)地梔子藥材中梔子苷含量做了測定,可為中藥梔子的質量評價提供一定的科學依據(jù)。

參考文獻:

[1] 朱振家,錢之玉,陸麗華,等.梔子提取物京尼平苷和西紅花苷利膽作用的研究[J].中醫(yī)藥導報,2007,13(11):841.

[2] 趙靜,游國鈞,李輝,等.不同采收時期梔子中梔子苷的含量測定[J].中醫(yī)藥導報,2007,13(7):102.

[3] 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005.

(責任編輯:姜付平)

Determination of Jasminoidin in Gardenia from Different Areas by HPLC

Duan Qi1,Zhuag Yixiu1,Chen Huashi2

Abstract:Object:To develop a method using HPLC for determination content of Jasminoidin in Gardenia from different areas. Methods:Column: ODS C18(4.6mm×200mm,5μm),mobile phase: acetonitrile–water(15∶85),detected wavelength:238nm. The column temperature was maintained at 25℃. Results:To determination of Jasminoidin in Gardenia from ten areas, the highest was 7.06% and the lowest was 2.89%. Conclusion: The HPLC method is simply and suitable to control quantitative of Gardenia, many facts show a influence on the contents of Jasminoidin in Gardenia from different areas.

Key words:Gardenia;Jasminoidin;HPLC