繆曉平 鄧開野

摘要:簡述了開發(fā)酶制劑新品種的重要性和有利條件,以及微生物酶資源的開發(fā)和應(yīng)用進(jìn)展,展望了微生物酶資源開發(fā)的發(fā)展前景。

關(guān)鍵詞:微生物;酶工程;工業(yè)酶制劑

中圖分類號:Q814.9文獻(xiàn)標(biāo)識碼:ADOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.06.003

Development and Application of Microbial Enzyme Resource

MIAO Xiao-ping, DENG Kai-ye

(College of Light Industry and Food Technology, Zhongkai University of Agricultural and Engineering, Guangzhou 510225, China)

Abstract:In this article, the importance and practical conditions of novel enzyme production, and development and application of microbial enzyme resource were reviewed. The future of microbial enzyme resource was finally prospected.

Key words:microorganisms;enzyme engineering;industrial enzyme production

近年來,酶工程的研究開發(fā)和推廣利用已成為生物技術(shù)中的重要領(lǐng)域。作為生物技術(shù)的一個重要組成部分,它可以廣泛應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護(hù)、化學(xué)分析、新能源開發(fā)以及生命科學(xué)理論研究等許多方面。隨著酶工程研究的快速發(fā)展,與之相對應(yīng)的酶工程產(chǎn)業(yè)的發(fā)展也非常迅速,成為21世紀(jì)最具有發(fā)展前途的產(chǎn)業(yè)之一[1]。自然界中酶的來源廣泛,它可以來自動物、植物和微生物。迄今已發(fā)現(xiàn)的酶有5 000余種,其中已經(jīng)利用的有150種左右,工業(yè)化生產(chǎn)的酶約60余種,僅占已知酶的1.2%,而大規(guī)模生產(chǎn)的只有20多種,主要是利用微生物通過發(fā)酵法生產(chǎn)的。微生物繁育速度快、品種繁多、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,并且一般由動植物生產(chǎn)的酶大部分可以由微生物制備,或?qū)又参锏拿富蚩寺『?在微生物細(xì)胞中表達(dá),故可以在短時間內(nèi)生產(chǎn)大量酶制劑。所以,微生物是生產(chǎn)酶的重要來源,對微生物酶資源的開發(fā)和應(yīng)用也就顯得越來越重要[2-5]。

1開發(fā)酶制劑新品種的重要性和有利條件

目前,作為生物技術(shù)重要組成部分的酶工程已在國民社會經(jīng)濟(jì)中發(fā)揮了巨大作用,酶制劑工業(yè)得到了迅速發(fā)展,廣泛地應(yīng)用在食品、釀造、紡織、制革、造紙、醫(yī)學(xué)、畜牧、日化和環(huán)境保護(hù)等諸多行業(yè)中?？v覽當(dāng)今世界的酶制劑工業(yè)研究和發(fā)展動向,主要表現(xiàn)在國外酶制劑公司的兼并重組,酶制劑工業(yè)的發(fā)展具有壟斷化趨勢,加以大量資源投入,大力開發(fā)、研制新酶種和新用途,并應(yīng)用高新技術(shù)生產(chǎn)酶制劑。而中國的酶制劑行業(yè)與發(fā)達(dá)國家相比,還存在著很大差距,在技術(shù)方面表現(xiàn)為:酶的品種少,菌種選育和發(fā)酵水平低以及新技術(shù)、新產(chǎn)品、新應(yīng)用領(lǐng)域研究開發(fā)滯后等。為使中國酶制劑工業(yè)得以健康、持續(xù)、快速的發(fā)展,盡快適應(yīng)國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要,必須加大科技和生產(chǎn)投入,積極推廣新技術(shù)、新工藝,提高酶的質(zhì)量,擴(kuò)大酶的品種范圍,加大微生物產(chǎn)酶新菌種的開發(fā),以期對酶產(chǎn)品結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整。同時,新的酶品種開發(fā)和應(yīng)用大多屬于自我創(chuàng)新,擁有自主知識產(chǎn)權(quán),有利于推動中國酶制劑行業(yè)的高速發(fā)展。

中國具有微生物酶新品種開發(fā)得天獨厚的有利條件。中國微生物資源豐富,從陸生、海洋到極端環(huán)境中都可以獲得大量產(chǎn)酶微生物菌種,從而發(fā)現(xiàn)、研制和開發(fā)新酶種。此外,還擁有歷史悠久的固態(tài)發(fā)酵技術(shù),這為酶的生產(chǎn)打下了良好基礎(chǔ),再加上新科學(xué)、新技術(shù)的推廣應(yīng)用,如基因工程、蛋白質(zhì)工程和定向進(jìn)化(directed evolution)技術(shù)以及其他各種高新技術(shù)等均可在新酶種開發(fā)中應(yīng)用。

自然界中蘊(yùn)藏著巨大的微生物資源,它們散布于整個地球的各個角落,而且在不同的環(huán)境下生存的微生物都有其完全不同的代謝方式,能分解利用不同的底物。這一特征就為微生物酶品種的多樣性提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。特別是當(dāng)基因工程介入時,動植物細(xì)胞中存在的酶,幾乎都能夠利用微生物細(xì)胞獲得。因此,有計劃和仔細(xì)地篩選微生物菌種,通常可以獲得能夠生產(chǎn)幾乎任何一種酶的適當(dāng)菌株[8]。

土壤和海水這兩大類資源寶庫的開發(fā)具有重要意義。我們可以從土壤、腐木篩選相應(yīng)的產(chǎn)酶微生物,從污水中篩選各種能夠產(chǎn)生分解糖類、脂類、蛋白質(zhì)、纖維素、木質(zhì)素、環(huán)烴、芳香物質(zhì)、有機(jī)磷農(nóng)藥、氰化物及某些人工合成的聚合物酶的微生物。在極端環(huán)境可篩選嗜熱微生物、嗜堿微生物、嗜鹽微生物、嗜酸微生物、耐高壓微生物等,并開發(fā)極端微生物酶品種。此外,還應(yīng)加大海洋微生物分離鑒定工作,建立微生物培養(yǎng)體系和相關(guān)酶活力測定手段和方法,探索新的酶種[6,7]。

2微生物酶的開發(fā)

2.1微生物酶開發(fā)的一般程序

微生物酶開發(fā)的流程程序如下所示。

2.2最佳產(chǎn)酶條件的初步確定

2.2.1培養(yǎng)方法的選擇培養(yǎng)方法的選擇從未來生產(chǎn)的成本、原料來源、生產(chǎn)工藝等一些因素出發(fā),初定一個適合的培養(yǎng)方式。

2.2.2最佳培養(yǎng)條件的選擇在確定了培養(yǎng)方式之后,還必須確定最佳的培養(yǎng)條件。培養(yǎng)條件包括培養(yǎng)基中關(guān)鍵成分的用量、碳氮比、培養(yǎng)溫度、pH等,最佳培養(yǎng)條件的確定可以通過單因素考查,正交試驗或響應(yīng)曲面分析等手段進(jìn)行。

2.2.3微生物酶收集的時間選擇酶的產(chǎn)生和積累發(fā)生在菌體生活周期中的某一個階段,隨著各菌種和酶的不同有很大變化。除了延遲期外,在生長周期的任何一個階段,都可以大量出現(xiàn)所需要的酶。在某些情況下,胞外酶在對數(shù)生長期的早期就開始出現(xiàn)了,并且在以后的幾個階段中繼續(xù)增加數(shù)量。胞內(nèi)酶可能主要產(chǎn)生于對數(shù)生長期。但是,只有在衰亡期,當(dāng)細(xì)胞被溶解時才釋放到培養(yǎng)基中,因此,通常在對數(shù)生長期的末期收集細(xì)胞以回收胞內(nèi)酶最為合適。

2.3微生物酶的提取

2.3.1酶的粗提工業(yè)生產(chǎn)上用到的微生物酶一般用量都很大,純度要求也不很高。如果待開發(fā)的酶是工業(yè)用途的話,則提取方法可以比較粗放。具體的提取流程如下:

2.3.2酶精制的一般流程粗提酶液→脫鹽→濃縮→凝膠干燥→ 分離→ 純化→ 酶的結(jié)晶

3微生物酶的應(yīng)用

用微生物生產(chǎn)的商業(yè)化酶已有100余種,但產(chǎn)量大、應(yīng)用廣、經(jīng)濟(jì)效益高的酶品種主要是各種分解酶,基因工程工具酶日新月異的進(jìn)步也從根本上改變了人們的生活。

3.1微生物酶在乳制品生產(chǎn)中的應(yīng)用

乳制品的種類很多,這里主要談一下微生物酶在干酪和低乳糖牛乳生產(chǎn)中的應(yīng)用。

3.1.1干酪在干酪生產(chǎn)中需要大量的凝乳酶,凝乳酶本由犢牛第四胃中提取,現(xiàn)在犢牛數(shù)量減少,凝乳酶的供應(yīng)發(fā)生了問題,因此,改用日本有馬啟教授的毛霉凝乳酶以代替牛凝乳酶者日益增多,毛霉凝乳酶的消費(fèi)量約占凝乳酶總消費(fèi)量的60%～70%。有馬啟教授的學(xué)生別府輝彥采用基因重組的方法構(gòu)建凝乳酶產(chǎn)生菌已告成功。據(jù)悉,凝乳酶基因菌已獲美國批準(zhǔn),可以用于干酪生產(chǎn)[9]。

3.1.2低乳糖牛奶牛奶中含有乳糖,其發(fā)熱量占全乳的30%左右。在乳制品中加入乳糖酶之后,使乳糖分解,生成葡萄糖和半乳糖,既避免了乳糖在加工過程中的析出,又增加了甜度。如果給嬰兒食用,既有利于消化,又可防止腹瀉等牛奶過敏性反應(yīng)。

3.2微生物酶在肉蛋制品生產(chǎn)中的應(yīng)用

3.2.1肉類的嫩化肉類中存在著一定數(shù)量的膠原蛋白,膠原蛋白交聯(lián)的數(shù)目和強(qiáng)度隨著動物年齡的增加而提高,從而導(dǎo)致肉類質(zhì)量下降,而利用蛋白水解酶類可以把膠原蛋白部分水解成氨基酸,從而使肉類嫩化。現(xiàn)在研究證明,不僅可以利用表面處理浸漬法處理宰后的肉體,而且可以在宰前向動物血管內(nèi)注射霉菌蛋白酶,使蛋白酶隨血液循環(huán)分布到肌肉中去,直接達(dá)到肉質(zhì)嫩化的效果。

3.2.2蛋白片的制造新鮮的雞蛋清中含有0.5%的葡萄糖,可使蛋白片成品在貯存過程中發(fā)生美拉德反應(yīng)引起褐變,使產(chǎn)品色澤加深,蛋白溶解度降低,并有不愉快的氣味。過去用自然發(fā)酵法除去葡萄糖,產(chǎn)品容易變臭,現(xiàn)在利用點青霉深層發(fā)酵制得的葡萄糖氧化酶脫糖,則生產(chǎn)周期縮短,產(chǎn)品質(zhì)量也得到提高。在32 ℃下,每60 kg蛋白中加入50 g葡萄糖氧化酶,蛋白中的葡萄糖就可以完全被氧化成葡萄糖酸。由于葡萄糖化需要氧,工業(yè)利用過氧化氫酶分解雙氧水供給所需氧氣[10]。

4未來展望——極端環(huán)境微生物酶的開發(fā)

微生物酶的工業(yè)化生產(chǎn)雖不過半個世紀(jì),卻在眾多產(chǎn)業(yè)部門創(chuàng)造了巨大的財富,而且也正因為有了微生物生產(chǎn)的廉價酶,才使得許多過去無法做得到的事情得以實現(xiàn)?？梢哉f,微生物是當(dāng)今酶工業(yè)的主角,酶產(chǎn)業(yè)是微生物資源開發(fā)成效卓著的產(chǎn)業(yè)之一。

但是,隨著微生物酶工作的不斷進(jìn)步,如今要開發(fā)出好的酶產(chǎn)品,難度要比過去大多了。目前要面對兩個基本任務(wù):(1)繼續(xù)從天然的微生物資源中去篩選,開發(fā)新的酶產(chǎn)品和產(chǎn)酶菌種;(2)要積極利用基因工程技術(shù)來提高、改造新的或現(xiàn)有的酶生產(chǎn)菌的生產(chǎn)性能。從這兩點出發(fā),我們可以看出,有一個很特別的微生物領(lǐng)域很值得我們?nèi)スぷ?這就是極端環(huán)境微生物酶的研究。在過去,這個領(lǐng)域由于技術(shù)手段的限制,不能對其進(jìn)行深入的研究。而今,以日臻完善的科技技術(shù)為后盾,將會有越來越多的研究成果出自于這個領(lǐng)域?？梢灶A(yù)料,未來的微生物酶研究和開發(fā)將會以此為一個突破口,極端環(huán)境微生物酶的研究必將成為酶學(xué)研究新酶資源開發(fā)的一個方向[11]。

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