陳立燦 念樹芬

摘 要：采用酶抑制率法對7個大類、31個品種1 025批次蔬菜樣品進(jìn)行快速檢測，以了解蔬菜農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀。結(jié)果顯示，1 025批次樣品農(nóng)藥殘留均未實際超標(biāo)，但有49個批次疑似超標(biāo)，占總檢測批次的4.8%，其中油菜疑似超標(biāo)率最高，為16.7%。酶抑制率法具有操作簡便、成本低廉、靈敏度高和檢測速度快等特點，適用于基層蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測。

關(guān)鍵詞：酶抑制率法；蔬菜；農(nóng)藥殘留；檢測

Enzyme Inhibition Rate Method for Detecting Pesticide Residues in Vegetables

CHEN Lican， NIAN Shufen*

（Luoping County Agricultural Environmental Protection Monitoring Station， Luoping 655800， China）

Abstract： The enzyme inhibition rate method was used to rapidly detect 1 025 batches of vegetable samples in 7 categories and 31 varieties to understand the current status of pesticide residues in vegetables. The results showed that none of the 1 025 batches of samples actually exceeded the standard for pesticide residues， but 49 batches were suspected of exceeding the standard， accounting for 4.8% of the total tested batches. Among them， rapeseed plant had the highest suspected over-standard rate at 16.7%. The enzyme inhibition rate method has the characteristics of simple operation， low cost， high sensitivity and fast detection speed， and is suitable for rapid detection of pesticide residues in grass-roots vegetables.

Keywords： enzyme inhibition rate method; vegetable; pesticide residues; detection

農(nóng)藥殘留會對公眾健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，因此快速準(zhǔn)確地檢測蔬菜中的農(nóng)藥殘留量至關(guān)重要。傳統(tǒng)的檢測方法如氣相色譜法[1]、高效液相色譜法[2-3]成本高、耗時長。為了滿足市場需求，快速檢測技術(shù)得以發(fā)展，其中最具代表性的是酶抑制率法。酶抑制率法是一種生物化學(xué)檢測方法，可用于檢測蔬菜中的農(nóng)藥殘留。酶抑制率法是利用乙酰膽堿酯酶分解乙酰膽堿，產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，通過分光光度計測量波長412 nm處的吸光度，計算農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率，判斷蔬菜中農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)。本次實驗應(yīng)用酶抑制率法對蔬菜中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行測定，并分析結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2023年，羅平縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測站完成1 025批次蔬菜的快速定性檢測，樣品來自長底布依族鄉(xiāng)、羅雄街道、臘山街道、九龍街道、板橋鎮(zhèn)和馬街鎮(zhèn)的種植基地和合作社。蔬菜樣品涵蓋7個大類31個品種，包括葉菜類（12個品種）、茄果類（3個品種）、瓜類（5個品種）、甘藍(lán)類（3個品種）、蔥蒜類（2個品種）、根莖類（5個品種）和豆類（1個品種）。其中，葉菜類285批次（占27.8%）、茄果類198批次（占19.3%）、瓜類131批次（占12.8%）、甘藍(lán)類127批次（占12.4%）、蔥蒜類124批次（占12.1%）、根莖類107批次（占10.4%）、豆類53批次（占5.2%）。

1.2 儀器與試劑

實驗所需儀器有HHX-SJ系列農(nóng)藥殘留檢測儀（廈門海葒興儀器有限公司）、SK8200H超聲波清冼儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）、HC-3018高速離心機（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）、XW-2型微型振蕩器、電子石英定時器（姜堰區(qū)普康醫(yī)療器械廠）和可調(diào)式移液器。

實驗所需試劑為有機磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測試劑（廈門海葒興儀器有限公司）。試劑由農(nóng)藥殘留檢測緩沖液、顯色劑、底物和酶試劑組成，有效期為12個月，需要2～8 ℃冷藏保存。

1.3 試驗方法

1.3.1 試劑配制

緩沖液的配制：將農(nóng)藥殘留檢測緩沖液小袋中的白色顆粒狀試劑全部倒入清潔的燒杯中，使用500.0 mL娃哈哈飲用純凈水分5次溶解試劑，將其引入500 mL的容量瓶中并確保達(dá)到刻度線，搖勻。室溫下保存以供后續(xù)使用。

底物的配制：向標(biāo)明農(nóng)藥殘留檢測底物的小塑料瓶中加入5.2 mL娃哈哈飲用純凈水，確保底物完全溶解。需要冷藏保存，并避免冷凍結(jié)冰。

顯色劑的配制：顯色劑已經(jīng)預(yù)先配制好，只需保存在冰箱的冷藏室（0～5 ℃），避免冷凍結(jié)冰。

酶試劑的配制：向標(biāo)注為農(nóng)藥殘留檢測酶試劑的小塑料瓶中加入5.0 mL娃哈哈飲用純凈水，確保酶試劑完全溶解，溶解后的酶試劑應(yīng)在2～4 ℃環(huán)境下冷藏保存，以保持其穩(wěn)定性和活性。

1.3.2 樣液制備及注意事項

獲取各種蔬菜后，先擦去表面泥土，然后根據(jù)蔬菜種類選擇取樣方式：葉菜剪成1.0 cm寬，塊根菜取1.0 cm表皮。稱取2.0 g蔬菜樣品放入25 mL塑料螺口平底離心管中，加10.0 mL緩沖液，擰緊蓋子后搖動，確保緩沖液充分洗脫農(nóng)藥。放入超聲波清冼儀中超聲提取5 min，若浸提液清澈，直接轉(zhuǎn)移至離心管；若混濁，需離心至清澈。若色素干擾嚴(yán)重，需脫色：將浸提液轉(zhuǎn)至10 mL塑料離心管中，加活性炭，振蕩5 min，靜置5～10 min，離心去除活性炭后，用于后續(xù)實驗。

注意事項：制備樣液時，確保器具清潔，避免污染；蔬菜樣品需完全浸泡在緩沖液中；離心時確保離心管平衡；根據(jù)實際情況調(diào)整活性炭用量；特定蔬菜（如蔥、蒜、蘿卜、韭菜等）采取整株浸提；詳細(xì)記錄每一步操作和結(jié)果。

1.3.3 對照測試

樣品測定前，將緩沖液、底物、顯色劑、酶試劑從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫備用。儀器開機穩(wěn)定運行30 min后，進(jìn)行對照測試。使用精確度高的移液器，在微孔板的第1列孔條內(nèi)分別加入20.0 μL酶溶液。隨后，使用另一只移液器，向每個孔中準(zhǔn)確加入250.0 μL的緩沖液。將微孔板放入儀器中，啟動振板功能10 s充分混勻溶液。靜置反應(yīng)10 min，靜置期間使用電子石英定時器精準(zhǔn)計時。待靜置反應(yīng)完成后，迅速加入10.0 μL顯色劑和10.0 μL底物。底物是酶反應(yīng)的關(guān)鍵成分，與顯色劑一同參與反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的顏色變化。底物加入后，應(yīng)立即將微孔板放回儀器中，并按下“對照”鍵進(jìn)行測試。儀器自動將第1列作為對照液、其他列作為樣品液進(jìn)行測試，并自動保存當(dāng)前的對照值數(shù)據(jù)。若測量后續(xù)樣品時，實驗環(huán)境及條件未發(fā)生顯著變化，則可直接調(diào)用先前保存的對照值，無須重復(fù)進(jìn)行對照測量。只有當(dāng)1 min內(nèi)對照吸光度變化值ΔA＞0.1，3 min內(nèi)對照吸光度變化值ΔA＞0.3，酶試劑才能繼續(xù)使用。

1.3.4 樣品測定

使用精確度高的移液器，在微孔板的孔條內(nèi)加入20.0 μL酶溶液。使用另一只移液器，在每個孔中加入250.0 μL的樣品溶液。然后放入儀器中，啟動振板功能振動10 s混勻。靜置反應(yīng)10 min，靜置期間使用電子石英定時器精確計時，確保酶與樣品溶液有足夠的時間充分反應(yīng)。用移液器向每個孔中加入10.0 μL的顯色劑，隨后迅速加入10.0 μL的底物。底物加入后，立刻將微孔板放入儀器中，并按下“樣品”鍵，開始進(jìn)行測量。測量結(jié)束后，儀器會顯示各項測量結(jié)果，包括抑制率及吸光度變化值。

1.3.5 結(jié)果判定

抑制率是判定檢測結(jié)果的重要指標(biāo)，為評估樣品中農(nóng)藥殘留情況提供了關(guān)鍵依據(jù)。根據(jù)《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》（GB/T 5009.199—2003）的規(guī)定[4]，抑制率≤40%的樣品判定為合格，表示農(nóng)藥殘留量未超標(biāo)；抑制率在40%～50%的樣品被視為疑似農(nóng)藥殘留超標(biāo)，表示蔬菜中可能存在低毒農(nóng)藥，對于此類樣品，需要至少復(fù)檢一次，以確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確無誤；抑制率≥50%的樣品直接判定為農(nóng)藥超標(biāo)，表明蔬菜中存在高劑量的有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，對于此類樣品，需要進(jìn)行多次檢測（至少2次以上），以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蔬菜品種的農(nóng)藥殘留檢測情況

由表1可知，所檢測的蔬菜樣品均達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，并未出現(xiàn)農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)的情況。在葉菜類蔬菜中，油菜的疑似超標(biāo)率相對較高，達(dá)到16.7%，其次是芫荽、小米菜、茴香、菠菜和板藍(lán)根等蔬菜；蔥蒜類蔬菜中，蔥的疑似超標(biāo)率最高，為7.0%；豆類蔬菜中，四季豆的疑似超標(biāo)率為5.7%；瓜類蔬菜中，南瓜的疑似超標(biāo)率稍高，為5.5%；茄果類蔬菜中，辣椒的疑似超標(biāo)率最高，為5.3%；甘藍(lán)類蔬菜中，結(jié)球甘藍(lán)的疑似超標(biāo)率最高，為4.7%；根莖類蔬菜中，白蘿卜的疑似超標(biāo)率最高，為2.6%。雖然部分蔬菜存在疑似超標(biāo)的情況，但總體而言，本次檢測的蔬菜樣品質(zhì)量仍然保持在安全可控的范圍內(nèi)。

2.2 不同蔬菜類別的農(nóng)藥殘留檢測情況

由表2可知，檢測的各類蔬菜農(nóng)藥殘留情況相對較好，沒有出現(xiàn)實際超標(biāo)的現(xiàn)象。在總計1 025個檢測批次中，僅有49個批次疑似存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)，占總數(shù)的4.8%。

3 結(jié)論

酶抑制率法具有快速、低成本和操作簡便的優(yōu)勢[5-6]。本文采用酶抑制率法對1 025批次蔬菜樣品農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速檢測，結(jié)果顯示，蔬菜樣品農(nóng)藥殘留均未實際超標(biāo)，但有49批次樣品疑似超標(biāo)，占總檢測批次的4.8%，其中油菜疑似超標(biāo)率最高，為16.7%。雖然本次檢測未發(fā)現(xiàn)實際超標(biāo)現(xiàn)象，但疑似超標(biāo)的情況仍然不容忽視。為進(jìn)一步提升酶抑制率法檢測結(jié)果的精準(zhǔn)度和可信度，需嚴(yán)格遵循實驗操作步驟，確保試劑配制和樣液制備的精確性。同時，實施對照測試和樣品重復(fù)檢測也是提高檢測可靠性的重要手段。酶抑制率法不僅縮短了檢測時間，降低了經(jīng)濟(jì)成本，還有效克服了傳統(tǒng)檢測方的某些弊端，可為保障食品安全提供有力的技術(shù)

支撐[7]。

參考文獻(xiàn)

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