梁友萍,房春林,古小彬*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,四川成都 611130;2.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院,四川成都 611130)

雞球蟲病(chicken coccidiosis)最主要由7種艾美耳屬(Eimeriaspp.)球蟲寄生于腸道特定部位的上皮細胞而引起的一種專性細胞內(nèi)寄生蟲病,包括柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、緩艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲,多危害15～50日齡的雛雞[1]。患病雞體重下降、腸道出血、下痢,甚至衰竭死亡。常用化藥防控雞球蟲病,但是化藥可殘留于雞肉和雞蛋以及通過雞糞排出污染環(huán)境。中草藥抗雞球蟲以驅(qū)蟲殺蟲、清熱燥濕為主,同時具有增強機體抵抗力、促進機體生長等作用。從2020年起,我國動物飼料全面禁止加入抗生素,中草藥以其藥物殘留低、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點,成為防治雞球蟲病的研究熱點,具有廣闊的前景。論文對近10年(2013-2023年)中草藥抗雞球蟲病的相關(guān)研究報道進行綜述。

1 單味中藥防治雞球蟲病

近10年內(nèi)報道的抗雞球蟲病的單味中藥有驅(qū)蟲殺蟲類、清熱燥濕類、清熱解毒類、補氣益血類、活血止痛類和增強免疫力類的中草藥。

1.1 驅(qū)蟲殺蟲類的單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥能夠直接殺死球蟲或抑制球蟲的生長發(fā)育,其是防治畜禽球蟲病的常用中草藥。近10年已報道抗雞球蟲病的驅(qū)蟲殺蟲類單方藥物有常山、大蒜、石榴皮、川楝子、青蒿,上述藥物具有中效或低效的抗球蟲作用。

研究發(fā)現(xiàn),常山、大蒜、石榴皮和川楝子的抗球蟲指數(shù)(ACI)值均在160～180之間。常山抗柔嫩、巨型和堆型3種混合艾美耳球蟲的ACI值為172.3,該中藥的主要活性成分為喹唑酮類生物堿,包括常山堿、異常山堿,占常山總生物堿的90%以上,這些生物堿可以抑制雞球蟲的發(fā)育,從而減輕盲腸和十二指腸腫脹,減少血液性內(nèi)容物,降低卵囊排出量和病變評分,以及可增加肉雞體重和存活率[2]?，F(xiàn)已研發(fā)出常山散、常山口服液等多種劑型,其中常山口服液較托曲珠利具有更好的抗球蟲療效和促生長作用。大蒜精油的ACI值為167.57,其可增強感染球蟲雞的存活率,且可緩解柔嫩艾美耳球蟲感染雞的血性腹瀉癥狀,降低盲腸病變評分,減少糞便中排除的卵囊數(shù),同時可增加采食量、體重和飼料轉(zhuǎn)化率,改善小腸組織病變情況[3],其抗球蟲作用主要與大蒜含有的大蒜素和酚類化合物可改變細胞質(zhì)滲透性從而損害艾美耳球蟲細胞有關(guān)。石榴皮的抗球蟲ACI值為163.38,其提取物可增加雞感染球蟲后的體重增重,促進雞生長,并減少卵囊排出量[4],且其甲醇提取物比水提物更有效,并呈現(xiàn)劑量依賴性的抗球蟲作用,這種抗球蟲作用與石榴皮所含的生物堿、糖甙的驅(qū)殺球蟲有關(guān),還與石榴皮可刺激機體產(chǎn)生某些免疫因子,提高機體細胞免疫功能有關(guān)。另外,石榴皮還能顯著可緩解因球蟲感染而引起的空腸過氧化氫、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、脂質(zhì)過氧化、一氧化氮(nitric oxide,NO)的產(chǎn)生。川楝子的抗球蟲ACI值為162.56,其能減輕球蟲感染而引起的雞血性腹瀉程度和卵囊的排出量,提高相對增重率,且川楝子進行預(yù)防給藥可有效降低球蟲感染引起的肝細胞和腎小管上皮細胞的顆粒狀和空泡狀變性,減輕間質(zhì)浸潤的炎性細胞數(shù)量,提高腸道的高益生菌比例,有效恢復(fù)菌種和微生物多樣性,減少腸道內(nèi)致病菌或球蟲卵囊的定植[5]。

研究發(fā)現(xiàn),青蒿的ACI值為137.03,可減輕感染球蟲雛雞的臨床癥狀,降低死亡率,緩解出血,減輕盲腸黏膜結(jié)構(gòu)破壞和黏膜組織碎片脫落,同時青蒿的石油醚提取物可減少雞感染球蟲后的卵囊脫落,導(dǎo)致每克糞便中的卵囊個數(shù)(oocysts per gramme,OPG)降低,這可能與其主要有效成分為青蒿素有關(guān),還與其下調(diào)球蟲的多種微線蛋白mRNA表達從而降低球蟲第2代裂殖子數(shù)量,最終阻止球蟲黏附宿主細胞有關(guān),以及其可顯著抑制宿主NF-κB mRNA表達來抑制炎癥反應(yīng),最終減少炎癥對宿主損害有關(guān)。此外,青蒿與抗球蟲化藥(二甲氧芐啶、復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶、柳氮磺吡啶、癸氧喹酯)聯(lián)合使用的抗球蟲效果存在較大差異[6],僅青蒿聯(lián)合癸氧喹酯呈現(xiàn)較好的抗球蟲作用(ACI值為205.54)。

1.2 清熱燥濕類單味中藥防治雞球蟲病

球蟲病在臨床上按中獸醫(yī)學(xué)辨證原則為濕證,故清熱燥濕類藥物被應(yīng)用于抗雞球蟲病的研究。近10年已報道抗雞球蟲的清熱燥濕類藥類單方藥物有鴉膽子和黃連、黃柏,上述藥物具有中效或低效的抗球蟲作用。

研究報道,鴉膽子的ACI值達161,其提取物可顯著緩解血性腹瀉,減少出血,從而保護受感染的雞免受繼發(fā)性細菌感染、炎癥反應(yīng)和有毒物質(zhì)的吸收,其還能降低球蟲對盲腸的損傷。鴉膽子抗球蟲效應(yīng)可能是該藥物可減少腸蠕動或直接抗球蟲活性發(fā)揮抗腹瀉作用,還可能通過保護器官來改善雞球蟲病帶來的損傷。

黃連、黃柏中提取的生物堿黃連素的ACI值達153.1,其可減輕盲腸病變,炎癥反應(yīng)、血便程度,提高生存率,減少卵囊排出量,這種抗球蟲效應(yīng)與黃連素濃度有關(guān),其中以300 μg/g劑量的黃連素防治雞球蟲效果更佳,過高濃度會導(dǎo)致雞體減重。黃連素的抗球蟲效應(yīng)與其能明顯抑制感染球蟲雞體異常升高的丙二醛(MDA),以及提高超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等抗氧化酶活性降低氧化應(yīng)激和其可上調(diào)金屬轉(zhuǎn)運基因(ZNT1、CTR1和DMT1)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進而恢復(fù)雞體Cu和Zn失衡有關(guān)[7]。

1.3 清熱解毒類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對癥治療球蟲病引起的溫?zé)?、中毒。?0年已報道抗雞球蟲病的清熱解毒類單方藥物有鬼針草、酸模、余甘子、車前草、黃花蒿,上述藥物具有高效或低效的抗球蟲作用。

研究表明,鬼針草的ACI值高達197.7,其添加的飼料能顯著增加雞體重,降低球蟲感染量、發(fā)病率、病死率和血便值,減少OPG和腸道病理損傷。鬼針草的抗球蟲效應(yīng)與其抑制球蟲生命周期中的卵囊孢子形成、子孢子和裂殖體侵入,以及增強雞體T 細胞介導(dǎo)的免疫力有關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)鬼針草中存在一種有效多炔化合物1(cytopiloyne),有抗雞球蟲病作用,該中藥所含的聚乙炔和黃酮類化合物被證實具有抗瘧活性,而它們是否也有助于鬼針草的抗球蟲作用,有待進一步驗證。酸模的ACI值為143.0,可提高飼料轉(zhuǎn)化率,促進雞生長以及顯著降低病變評分、OPG值[8]。

此外,研究發(fā)現(xiàn),余甘子和車前草均可減少雞體排出的OPG,減輕雞的盲腸和腸道損傷評分[9],但上述研究報道均未計算抗球蟲指數(shù)。

1.4 補氣益血類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對癥治療球蟲病導(dǎo)致的機體氣血陰陽的不足,具有增強機體抵抗力,達到祛邪扶正的目的。近10年已報道抗雞球蟲病的補氣益血類單方藥物有錫蘭肉桂、枳殼葉,它們對球蟲感染均有一定的保護作用。

錫蘭肉桂的ACI值為146.0,其可減輕球蟲對盲腸的損傷、降低盲腸評分和減少卵囊排出,這種抗球蟲作用可能與其含有不同類型的皂甙、生物堿、單寧和類黃酮有關(guān),它們具有抗寄生蟲、抗炎和抗氧化的特性,這些成分會抑制或延緩球蟲在雞體內(nèi)的生長發(fā)育[10]。枳殼葉能減少球蟲感染雞的卵囊脫落,改善血液參數(shù),但未見其報道ACI值。

1.5 活血止痛類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對癥治療球蟲病的出血和止痛。近10年已報道抗雞球蟲病的活血止痛類單方藥物有生姜、姜黃,姜辣素和姜黃素分別是兩者的生物活性成分,前者可引起蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致細胞膜發(fā)生裂解,從而抑制球蟲生長,后者通過抗氧化、抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性發(fā)揮抗球蟲作用,姜黃較生姜具有更好的緩解球蟲感染引起的病變作用[11],但未見它們的ACI值報道。

1.6 增強免疫力類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥能顯著提高畜禽機體的免疫力、提高抗病力、促進動物生長等多重功效,近10年僅報道了葡萄籽的抗雞球蟲病效應(yīng),其原提取物花青素可顯著降低球蟲感染后的死亡率和病變評分,這與其能緩解球蟲感染引起的雞體血漿NO和MDA異常增高,血漿SOD異常下降和氧化應(yīng)激異常增加有關(guān),從而能夠恢復(fù)雞體的抗氧化/氧化系統(tǒng)的平衡[12]。

2 多味復(fù)方中藥在體抗雞球蟲病

根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治理論,抗雞球蟲的中草藥復(fù)方制劑主要以驅(qū)蟲殺蟲、清熱燥濕、清熱解毒為主,輔以補益氣血、活血止血、緩急止痛、止痢、健脾促消化功效的中草藥。有關(guān)復(fù)方中草藥制劑抗球蟲活性的研究近年來備受青睞,各味中草藥間相互協(xié)調(diào)以及對機體有利因子進行整體調(diào)動,使得復(fù)方制劑抗球蟲效果一般優(yōu)于單方,同時部分方劑兼具抗菌消炎、助消化、促生長和提高雞的免疫力的作用。

近10年,有20個中草藥復(fù)方用于防治雞球蟲病的研究報道,其中,“常山、檳榔、地榆、黃芩、青蒿”[13]、“常山、青蒿、地榆、白頭翁和黃芪粗多糖”和“常山、地榆、鴉膽子、地錦草”分別組成的3個復(fù)方的ACI值最高,分別為183.83、183.90和182.00。由“常山、白頭翁、地榆、黃連”[14]、“青蒿、常山”[15]、“檳榔、青蒿、白術(shù)、黃連、赤石脂”[16]、“苦參、青蒿”[17]、“蛇床子、蒲公英等”[18]、“青蒿、鉤藤、黃芩、黃柏、黃連、甘草、黃芪、酒大黃、黑丑、皂角、大棗、丹皮、丹參、陳皮”[19]、“常山、柴胡、地榆、絞股藍”“常山、青蒿等”“青蒿、白頭翁、仙鶴草、常山、肉桂”、“青蒿、仙鶴草、何首烏、白頭翁”分別組成的8個復(fù)方ACI值在160～180之間。此外,發(fā)現(xiàn)通常中西藥聯(lián)合治療球蟲病效果比單獨使用中草藥效果更佳。超微粉雞球蟲散(青蒿、仙鶴草、何首烏、白頭翁、肉桂)與地克珠利聯(lián)合用藥抗球蟲效果(ACI值188.04)明顯優(yōu)于單獨使用超微粉雞球蟲散的效果(ACI值160.82)[20];“常山、苦參、青蒿”組成的復(fù)方與馬杜霉素聯(lián)合使用的效果(ACI:170)明顯優(yōu)于該復(fù)方的單獨抗球蟲效果(ACI值150)。

3 中草藥體外抗雞球蟲卵囊

外環(huán)境中卵囊孢子化和雞體內(nèi)子孢子的入侵是完成一個世代的雞球蟲發(fā)育必不可少的2個階段,因此,用中草藥對上述2個階段進行干預(yù)可能達到防控球蟲的效應(yīng)。研究者常通過卵囊孢子化抑制試驗評價中草藥對體外卵囊的孢子化抑制率,以及通過細胞實驗評價中草藥對子孢子繁殖抑制率和子孢子入侵宿主腸道上皮細胞的抑制率。

3.1 中藥體外抑制球蟲卵囊孢子化

近十年已報道用于雞球蟲卵囊孢子化抑制實驗的中藥有青蒿、艾葉、柑桔、苦艾、松針等25種單方中藥和4種復(fù)方中藥,不同中草藥抑制效果存在差異。

以青蒿、艾葉、柑桔、苦艾、松針與4種復(fù)方制劑的體外抗球蟲作用最好,卵囊孢子化抑制率均大于80%。青蒿對雞球蟲的體外抑制率差異較大,趙瑞平等其抑制率可高98.18%,而李蘊玉和Fatemi A的報道的抑制率分別為72.49%和46%,這種差異較大的結(jié)果可能與中藥濃度、提取方式和球蟲種類和數(shù)量有關(guān)。其次,艾葉、柑桔[21]、苦艾和松針4種單味中藥的卵囊孢子化抑制率分別為97.03%、97%、96.60%和95.39%。有報道以“青蒿、常山、仙鶴草、白頭翁、肉桂”組成復(fù)方的卵囊孢子化抑制率最高(97.64%),其次為“白僵蟲、生大黃、桃仁、地鱉蟲、生白術(shù)、桂枝、白茯苓、澤瀉、豬苓”組成復(fù)方抑制率(96.42%),“使君子、貫眾、烏梅、檳榔、滑石、常山、黃芪、苦艾、艾葉、青蒿、松針”組成復(fù)方的抑制率次之(93.36%),而抗球散(常山、檳榔、穿心蓮、地榆、黃芪、大青葉等)的卵囊孢子化抑制率最低(83.46%)。此外,發(fā)現(xiàn)抗球散的卵囊孢子化抑制率具有濃度依賴性,這與Ishaq A N等人的結(jié)論相同,而趙瑞平等得到不同的結(jié)論,認(rèn)為在相同的作用時間下,藥物濃度與球蟲孢子化抑制率不一定正相關(guān),試驗結(jié)果并非呈濃度依賴性,存在最適濃度。

蘆薈、白頭翁、鬼針草、川楝子、商陸、苦參、草果、使君子的體外抗球蟲作用處于中間水平,卵囊孢子化抑制率處于50%～80%之間。其中,蘆薈表現(xiàn)出最高的卵囊孢子化抑制率(79.35%)[22],其次為白頭翁對毒害艾美耳球蟲的孢子化抑制率(75.64%),但它的球蟲卵囊孢子化抑制率與供試球蟲品種有關(guān),其對堆型和柔嫩艾美耳球蟲的卵囊孢子化抑制率偏低(22.68%、7.80%),最后為鬼針草(71.43%)[23]、川楝子(70.07%)、商陸(70.07%)、苦參(60.07%)、草果(59.18%)、使君子(56.88%)。

南瓜子、柴胡、常山、馬鞭草、仙鶴草、貫眾、余甘子、苦楝皮、鶴虱、北烏梅、南烏梅、菊苣的體外抗球蟲作用處于相對低水平,卵囊孢子化抑制率均低于50%。其中,南瓜子表現(xiàn)出最高的卵囊孢子化抑制率(41.54%),其次為柴胡(41.21%)、常山(41.04%)、馬鞭草(40.11%)、仙鶴草(38.33%)、貫眾(37.19%)、余甘子(36.7%)、苦楝皮(35.25%)、鶴虱(35.19%)、北烏梅(35.02%)、南烏梅(34.12%)、菊苣(29.69%)。此外還發(fā)現(xiàn),同一種中草藥的不同部位提取物對同一種球蟲的卵囊的孢子化抑制率也會有差異,如余甘子的葉子和果實提取物對柔嫩艾美耳球蟲的體外卵囊孢子化抑制率分別為35.7%和36.7%。

3.2 中藥體外細胞抗球蟲孢子活性

近10年內(nèi),有學(xué)者以細胞為模型進行體外抗雞球蟲活性的研究,報道所使用的細胞系包括牛腎細胞(madin darby bovine kidney cells,MDBK)和雞肺上皮細胞(chicken lung epithelial cell-213,CLEC-213),主要以子孢子入侵抑制率和子孢子的繁殖抑制率為指標(biāo)來評價藥物抗柔嫩艾美耳球蟲、堆形艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲的效果。近10年已用于體外細胞抗雞球蟲活性研究的中藥有牛至、抗微生物混合藥物AG、洋蔥、大蒜、提琴形凹唇姜、羅勒葉、鬼針草、桑黃、香芹酚、皂苷、甘草、肉豆蔻、肉桂,不同中草藥制劑抗球蟲活性存在較大差異。

牛至精油抑制子孢子入侵的效果最好,其可抑制93%的柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細胞[25],其次為抗微生物混合藥物AG(麥芽糊精、氯化鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、二氧化硅、蘋果酸、柑橘提取物和橄欖提取物),其可抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細胞和CLEC-213,抑制率最高達82%[26],洋蔥入侵抑制率次之,它的2種有機硫化合物(丙基硫代亞磺酸鹽和丙基硫代磺酸鹽)可抑制堆型艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細胞,2種藥物的入侵抑制率分別為75.2%和71.7%[27]。而大蒜精油[28]、提琴形凹唇姜、羅勒葉精油、鬼針草和桑黃素[29]可抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細胞,抑制率在55%～70%之間。香芹酚和皂苷協(xié)同作用能抑制約30%的混合球蟲(柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲)入侵MDBK細胞。在子孢子繁殖抑制方面,甘草酸苷和肉豆蔻油能有效阻止MDBK細胞中柔嫩艾美耳球蟲子孢子的復(fù)制,兩者的抑制率分別為81.7%和49.5%,而肉桂油未檢測到抑制作用[30]。

4 展望

中藥具有藥源廣泛、廉價易得、毒副作用小、藥物殘留低、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點,兼?zhèn)渌幬镄耘c營養(yǎng)性的雙重作用,它能有效緩解雞球蟲病病變,在今后對中藥防治雞球蟲病的工作中,為增強中藥的抗球蟲效果,要進一步探討藥物有效成分,巧妙運用中獸醫(yī)辨證論治原則,確定各種草藥之間的最佳比例,在劑型、給藥方式和聯(lián)合用藥方面做進一步研究,經(jīng)過現(xiàn)代生物工程技術(shù)對中草藥進行加工,開發(fā)出低毒、高效、價低的驅(qū)球蟲新藥。但由于中藥成分比較復(fù)雜,作用機理尚不明確,其在雞體內(nèi)的分布、代謝、藥代動力學(xué)也缺少研究,因此需要在細胞和分子水平上對中藥成分、防治球蟲病機理進行探究,以便研制出更為合適的抗球蟲中藥制劑。