王雨婷 陳曼 王秀景 鄧天琦 奚嘉 蔣小飛

*基金項目：江蘇省徐州市科學技術(shù)局項目（KC22186）

第一作者簡介：王雨婷（1997-），女，碩士研究生，研究方向：婦科腫瘤。

△通信作者：蔣小飛，E-mail：1004357062@qq.com

摘要：目的? 本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學探討痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的有效成分、關(guān)鍵靶標及作用機制，旨在為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)、為進一步的研究提供思路和研究方向。方法? 使用TCMSP和UniProt數(shù)據(jù)庫獲取痛經(jīng)丸的有效成分及對應(yīng)靶點基因，利用GeneCards、DisGeNET等疾數(shù)據(jù)庫獲取AM和痛經(jīng)的相關(guān)疾病靶點基因。利用Venny2.1平臺得到藥物-疾病的交集靶點基因，通過Cytoscape 3.9.1軟件中構(gòu)建“藥物-有效成分-靶蛋白-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)，再利用String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)；最后基于Metascape數(shù)據(jù)庫進行GO及KEGG分析。結(jié)果? 共篩選出痛經(jīng)丸藥物有效成分共141個，獲得藥物-疾病交集靶點基因21個；GO 功能富集分析分別獲得了484項生物過程（BP）、10項細胞成分（CC）和30項分子功能（MF），涉及的信號通路主要有PI3K-Akt信號通路、p53信號通路、IL-17 信號通路、TNF 信號通路、NF-κB 信號通路等和HIF-1信號通路。結(jié)論? 痛經(jīng)丸可能是通過多成分-多靶標-多通路協(xié)同作用于細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移、血管生成、細胞凋亡、炎癥反應(yīng)、間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化等病理過程，從而發(fā)揮治療子宮腺肌病痛經(jīng)的作用。

關(guān)鍵詞：痛經(jīng)丸；子宮腺肌病；痛經(jīng)；網(wǎng)絡(luò)藥理學；拓撲分析；作用機制

中圖分類號：R271.11+3??? 文獻標志碼：A??? 文章編號：1007-2349（2024）05-0022-09

Exploration the Action Mechanism of Menstrual Pain Pills in the Treatment of Dysmenorrhea in Adenomyopathy Based on Network Pharmacology

WANG Yu-ting1， 2， CHEN Man1， 2， WANG Xiu-jing1， DENG Tian-qi2， XI Jia2， JIANG Xiao-fei2

（1. Anhui University of Traditional Chinese Medicine， Hefei 230038， China;2. Xuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xuzhou 221000， China）

【Abstract】Objective：To explore the active ingredients， key targets and action mechanism of Menstrual Pain Pills in the treatment of dysmenorrhea in adenomyopathy based on network pharmacology in order to provide theoretical basis for clinical application and ideas and research direction for further research. Methods： The active ingredients and corresponding target genes of Menstrual Pain Pills were obtained by TCMSP and UniProt databases， and the target genes of AM and dysmenorrhea related diseases were obtained by GeneCards and DisGeNET disease databases. The intersection target genes of herb-disease were obtained using Venny2.1 platform. The visualization network of “herb-ingredient-targetprotein-disease” was constructed via Cytoscape 3.9.1 software， and the protein interaction （PPI） network was constructed by using String database. Finally， GO and KEGG analysis were made on the base of Metascape database. Results： A total of 141 active ingredients of Menstrual Pain Pills were screened， and 21 genes of herb-disease intersection were obtained. And 484 biological processes （BP）， 10 cell components （CC） and 30 molecular functions （MF） were obtained respectively by GO functional enrichment analysis. The signaling pathways that were involved mainly included PI3K-Akt signaling pathway， p53 signaling pathway， IL-17 signaling pathway， TNF signaling pathway， NF-κB signaling pathway and HIF-1 signaling pathway. Conclusion： Menstrual Pain Pills may play a role in the treatment of dysmenorrhea in adenomyopathy through the synergistic action of multi-ingredient， multi-target and multi-pathway on cell proliferation， invasion and metastasis， angiogenesis， apoptosis， inflammatory response， mesenchymal cell transformation and other pathological processes.

【Key words】Menstrual Pain Pills; Adenomyopathy; Dysmenorrhea; Network Pharmacology; Topological Analysis; Action Mechanis

子宮腺肌?。╝denomyosis，AM）以子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)向肌層的浸潤性生長為病理表現(xiàn)，以盆腔疼痛（表現(xiàn)為痛經(jīng)、性交痛和慢性盆腔痛）、異常子宮出血和生殖功能受損為主要臨床癥狀［1］。該病好發(fā)于育齡期女性，發(fā)病率為7%～23%［2］，其中約有30%以上的AM患者有典型的進行性痛經(jīng)［3］。痛經(jīng)往往是AM發(fā)病的前驅(qū)癥狀，嚴重的痛經(jīng)會影響學習、工作和睡眠質(zhì)量。其嚴重程度與AM的發(fā)病程度之間呈線性相關(guān)關(guān)系［4］，因此及早干預AM的進展尤為重要。本文將以痛經(jīng)為主要癥狀的AM簡稱為子宮腺肌病痛經(jīng)。

AM歸屬中醫(yī)學“痛經(jīng)”、“癥瘕”等范疇，病機關(guān)鍵在于“血瘀”，瘀血內(nèi)阻，不通則痛，故見經(jīng)行腹痛；瘀阻胞脈胞宮，日久則致癥瘕積聚，如《醫(yī)學入門》所言“血滯瘀積于中，與血相搏，則為疼痛”，“離經(jīng)之血，留聚下焦，瘀滯日久成癥”。本院自制劑痛經(jīng)丸，由“少腹逐瘀湯”加減化裁而來，方中以肉桂、干姜、吳茱萸（制）、小茴香、烏藥溫經(jīng)散寒、活血止痛；當歸、川芎、白芍（炒）、香附（醋制）補血活血，舒肝行氣止痛，川牛膝活血通經(jīng)止痛，善引血下行。在前期研究中，安艷等［5］用本院協(xié)定方痛經(jīng)湯（痛經(jīng)丸前身）治療寒凝血瘀型子宮腺肌病痛經(jīng)，研究發(fā)現(xiàn)治療組的痛經(jīng)VAS評分明顯下降；在痛經(jīng)的緩解率和治愈率方面，治療組均明顯優(yōu)于對照組。子宮腺肌病痛經(jīng)為慢性起病，病程較長，與湯劑相比，丸劑更方便攜帶和服用，能夠提高患者長期治療的依從性。此外王好古曾提出“丸者緩也，不能速去之，其用藥之舒緩而治之意也”［6］。

中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學是一門將中藥藥理學、系統(tǒng)生物學、網(wǎng)絡(luò)科學等多門學科聯(lián)合運用的新興交叉科學［7］，它以“網(wǎng)絡(luò)靶標”為核心，將藥物和疾病關(guān)聯(lián)起來。拓撲數(shù)據(jù)分析［8］是網(wǎng)絡(luò)藥學的重要環(huán)節(jié)之一，通過分析結(jié)果，可以篩選出藥物或中藥復方治療疾病的關(guān)鍵有效成分和靶標，從而探究網(wǎng)絡(luò)各節(jié)點的生物功能與疾病的互作關(guān)系。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學探討痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的藥物有效成分、關(guān)鍵靶標及作用機制，旨在為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，為進一步的研究提供思路和研究方向。

1? 資料與方法

1.1? 痛經(jīng)丸藥物有效成分及對應(yīng)靶點的獲取? 在 TCMSP數(shù)據(jù)庫（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）以“白芍”“川芎”“當歸”“干姜”“川牛膝”“肉桂”“烏藥”“吳茱萸”“香附”“小茴香”為關(guān)鍵詞，以最新藥物篩選標準：口服生物利用度（OB）≥20%和類藥性（DL）≥0.1為篩選閾值，獲取以上各中藥的化合物。將篩選出的化合物的Mol ID去重后輸入該平臺的靶點信息搜索欄中，獲得該化合物的預測靶點，刪除沒有靶點信息的中藥化合物。將所有中藥的預測靶點匯總?cè)ブ睾?，導入UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/），將靶點名轉(zhuǎn)化為基因名，搜索條件限定為“Reviewed”和“Human”，將無對應(yīng)基因名的靶點和化合物剔除。

1.2? AM和痛經(jīng)疾病靶基因的獲取? 分別以“adenomyosis”、“dysmenorrhea”為關(guān)鍵詞，在GeneCards數(shù)據(jù)庫、DisGeNET數(shù)據(jù)庫、DrugBank數(shù)據(jù)庫、TTD數(shù)據(jù)庫、CTD數(shù)據(jù)庫和OMIM數(shù)據(jù)庫中進行檢索，其中在CTD數(shù)據(jù)庫選擇標記為的“M（marker/mechanism）”或“T（therapeutic）”的基因，GeneCards數(shù)據(jù)庫篩選條件為relevance score≥1，DisGeNET數(shù)據(jù)庫篩選條件為score_gda≥0.1［9］。此外DrugBank數(shù)據(jù)庫只能獲得疾病靶點名，需要將獲得的靶點名輸入Uniprot數(shù)據(jù)庫中獲得基因名，其余數(shù)據(jù)庫均可直接獲得潛在靶點對應(yīng)的基因名。

1.3? 構(gòu)建“藥物-有效成分-靶基因-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖? 將中藥有效成分的靶點基因、AM和痛經(jīng)的疾病靶點基因?qū)隫enny2.1.0平臺，三者取交集，作為痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的潛在靶點基因，并繪制韋恩圖。將中藥化合物、交集靶點基因等數(shù)據(jù)導入Cytoscape 3.9.1軟件，利用軟件中的Network Analyzer工具對網(wǎng)絡(luò)進行拓撲數(shù)據(jù)分析，將節(jié)點按照Degree值進行排列分布，形成“藥物-有效成分-靶蛋白-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)。

1.4? 構(gòu)建痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)蛋白互作（Protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)? 將1.3獲取的藥物-疾病交集靶點基因?qū)隨tring數(shù)據(jù)庫，將物種選定為“Homo Sapiens（人類）”，其余參數(shù)為默認值（置信度>0.400），得到初步構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)，導出為TSV格式。將文件導入 Cytoscape 3.9.1 軟件，利用cytoHubba插件，選擇Degree算法對PPI網(wǎng)絡(luò)進行拓撲數(shù)據(jù)分析，以篩選痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的關(guān)鍵靶標。

1.5? 基于Metascape的GO和KEGG分析將1.3獲取的藥物-疾病交集靶點基因輸入Metascape數(shù)據(jù)庫，物種選擇為“H.sapiens（人類）”，分別進行GO和KEGG分析，以默認值P<0.01 為篩選條件，獲取子宮腺肌病痛經(jīng)相關(guān)的生物學過程和相關(guān)通路。打開微生信平臺，用GO數(shù)據(jù)制作BP，CC，MF三合一柱狀圖；用KEGG數(shù)據(jù)制作富集氣泡圖。

1.6? 構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點-通路”可視化網(wǎng)絡(luò)圖? 通過整合痛經(jīng)丸“藥物-有效成分-靶基因-疾病”和子宮腺肌病痛經(jīng)PPI網(wǎng)絡(luò)中的數(shù)據(jù)，制作“網(wǎng)絡(luò)文件”和“屬性文件”，利用Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)圖”。

2? 結(jié) 果

2.1? 痛經(jīng)丸藥物有效成分及對應(yīng)靶點數(shù)據(jù)的獲取? 通過TCSMP數(shù)據(jù)庫并剔除沒有對應(yīng)靶點的成分后，共獲得痛經(jīng)丸中藥化合物141個，其中白芍6個、川牛膝4個、川芎16個、當歸3個、干姜9個、肉桂3個、烏藥24個、吳茱萸28個、香附28個、小茴香3個以及17個共同化合物；通過UniProt數(shù)據(jù)庫，去重并剔除無對應(yīng)基因名的靶點，最終得到281個藥物作用靶點。

2.2? AM和痛經(jīng)疾病靶基因的獲取? 分別以“adenomyosis”和“dysmenorrhea”為關(guān)鍵詞在GeneCards、DisGeNET、DrugBank、TTD、CTD、OMIM數(shù)據(jù)庫中進行檢索，將各個數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)匯總?cè)ブ睾?，共獲得189個AM的相關(guān)基因和159個痛經(jīng)相關(guān)基因。

2.3? 構(gòu)建“藥物-有效成分-靶基因-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖? 將痛經(jīng)丸的有效成分靶點基因、AM和痛經(jīng)的疾病靶點基因?qū)隫enny2.1平臺，三者取交集，繪制韋恩圖（圖1），共得到痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的潛在靶點基因21個。將數(shù)據(jù)導入Cytoscape 3.9.1軟件，得到痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的“藥物-有效成分-靶基因-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖（圖2）。該網(wǎng)絡(luò)中共173個節(jié)點，389條邊（去除重復邊之后），其中包含10個中藥節(jié)點，124個藥物有效成分節(jié)點，17個共同藥物有效成分節(jié)點，1個疾病節(jié)點，21個治療靶點基因節(jié)點，利用Network Analyzer工具對網(wǎng)絡(luò)進行拓撲數(shù)據(jù)分析，排在前10位的藥物有效成分拓撲數(shù)據(jù)見表1。

2.4? 構(gòu)建痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的PPI網(wǎng)絡(luò)? 將藥物-疾病交集靶點基因?qū)隨tring數(shù)據(jù)庫，得到初步構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)（置信度>0.400）（圖3）。下載TSV格式的蛋白互作信息，導入 Cytoscape 3.9.1 軟件，利用cytoHubba插件，選擇Degree算法對網(wǎng)絡(luò)進行拓撲數(shù)據(jù)分析，該網(wǎng)絡(luò)（圖4）包含21個節(jié)點，128條邊，節(jié)點代蛋白。節(jié)點的大小和顏色由參數(shù)Degree值決定，Degree值越高，節(jié)點越大、顏色越深，在網(wǎng)絡(luò)中越重要，排在前7位節(jié)點的拓撲數(shù)據(jù)見表2；邊代表蛋白之間互相作用關(guān)系，線越多代表蛋白之間連接程度越高，關(guān)系就越緊密。

2.5? 基于Metascape的GO和KEGG分析? 對痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)交集靶點基因進行 GO分析（P<0.01），共獲得484項生物過程（BP）、10項細胞組成（CC）和30項分子功能（MF）。其生物過程（BP）涉及：細胞凋亡過程的正調(diào)控、激素應(yīng)答、腺體發(fā)育、多細胞生物過程、炎癥反應(yīng)應(yīng)答、缺氧應(yīng)答等方面；細胞促成（CC）涉及：細胞外基質(zhì)、分泌顆粒腔、細胞質(zhì)囊泡腔等；分子功能（MF）涉及：轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、細胞因子活性、ATP酶結(jié)合等。根據(jù)LogP值降序排列，分別挑選排名前10的條目繪制柱狀圖（圖5）。進行KEGG分析，共得到55條通路，剔除與疾病不相關(guān)的通路，得到15條密切相關(guān)的通路，利用氣泡圖進行可視化分析（圖6），氣泡的大小代表富集在該通路上的基因數(shù)目，氣泡越大代表與該通路相關(guān)的基因越多。

圖5? BP、CC和 MF 中排名前 10 的條目

圖6? KEGG 通路富集分析氣泡圖

2.6? 構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點-通路”可視化網(wǎng)絡(luò)圖? 將藥物有效成分（因潛在有效成分較多，故僅篩選拓撲參數(shù)分析中度值排名前20的有效成分進行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建）、藥物-疾病交集靶基因以及通路整合構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)痛經(jīng)丸中的同一藥物含有多個有效成分，同一有效成分可調(diào)控多個不同靶點，同一信號通路涉及多個不同的靶點基因。其中PI3K-Akt信號通路包括BCL2、IL6、TP53、VEGFA等6個靶基因；p53信號通路包括BCL2、TP53等4個靶基因；其余信息詳見圖7。該網(wǎng)絡(luò)充分體現(xiàn)了痛經(jīng)丸可能通過多成分、多靶點、多通路治療子宮腺肌病痛經(jīng)的特點。

注：左側(cè)內(nèi)圈代表藥物，外圈代表有效成分；右側(cè)外圈代表通路，中間三角形代表疾?。涣庑未硭幬?疾病交集靶基因。圖7? 藥物-成分-疾病-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)圖

3? 討論

AM 病理表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)向肌層的浸潤性生長，因此AM雖然是一種良性婦科疾病，但它表現(xiàn)出的侵襲性和轉(zhuǎn)移性卻與腫瘤疾病相似，有研究［10］發(fā)現(xiàn)AM存在惡性的傾向，且大多數(shù)發(fā)生于絕經(jīng)后婦女，因此及早干預AM的進展具有重要的意義。異位內(nèi)膜細胞的增殖和侵襲、新生血管的生成是AM發(fā)生、發(fā)展的重要因素［11］；異位病灶在激素的影響下發(fā)生出血，刺激周圍組織產(chǎn)生高濃度的前列腺素及炎性因子，是導致AM出現(xiàn)周期性痙攣疼痛的原因之一［12］。因此抑制細胞增殖、遷移和侵襲，減少新生血管的生成、抗炎抗氧化可能是治療子宮腺肌病痛經(jīng)的關(guān)鍵。

根據(jù)“藥物-有效成分-靶基因-疾病”網(wǎng)絡(luò)的拓撲數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)槲皮素、β-谷甾醇、油酸、山奈酚、木犀草素、豆甾醇、6-姜酚等可能是痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的關(guān)鍵成分。槲皮素是本次網(wǎng)絡(luò)藥理學研究中得分最高的有效成分，并且是痛經(jīng)丸中多種中藥的共有成分。Xu等［13］發(fā)現(xiàn)，隨著槲皮素濃度的增加，與遷移和侵襲相關(guān)的蛋白（MMP2、MMP9等）顯著下調(diào)，這表明槲皮素可能通過抑制這些蛋白的表達，從而達到抑制AM中異位子宮內(nèi)膜的增殖、降低其遷移性和侵襲性，進而抑制了AM的疾病進展。另一項研究中［14］發(fā)現(xiàn)，槲皮素可延長AM小鼠的熱板反應(yīng)潛伏期，降低背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中痛覺基因表達水平，從而改善全身性痛覺過敏。痛經(jīng)丸組方中肉桂、干姜同用具有溫經(jīng)活血、散寒止痛之功，是臨床中常用的藥對，Liu等［15］發(fā)現(xiàn)，油酸、6-姜酚是該藥對產(chǎn)熱作用的潛在活性成分，因此筆者推測這兩個成分可能是痛經(jīng)丸緩解寒凝血瘀型子宮腺肌病痛經(jīng)的相關(guān)靶標，但目前尚無藥物產(chǎn)熱與子宮腺肌病痛經(jīng)相關(guān)的基礎(chǔ)研究，值得后續(xù)深入探索。植物甾醇是一種具有抗炎作用的活性物質(zhì)，其中以β-谷甾醇和豆甾醇最為常見。β-谷甾醇可通過使NF-κB信號通路失活，抑制促炎細胞因子TNF-α、IL-1β 和IL-6以及 COX-2 的表達來實現(xiàn)抗炎作用［16］。Ju等［17］研究發(fā)現(xiàn)山奈酚可以顯著降低MMP9的活性并下調(diào)其在細胞中蛋白表達，并分抑制Akt的磷酸化。木犀草素具有抗炎和鎮(zhèn)痛作用，Block等［18］發(fā)現(xiàn)，木犀草素對醋酸誘導的小鼠腹部收縮具有顯著的抑制作用，最大抑制率為57%，通過對照實驗發(fā)現(xiàn)木犀草素比一些常用鎮(zhèn)痛藥物（乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚、二吡咯烷酮和吲哚美辛）更具活性。

通過交集靶點基因PPI網(wǎng)絡(luò)的拓撲數(shù)據(jù)分析得出，TP53、PTGS2、IL6、ESR1、VEGF、MMP2、MMP9可能是痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的潛在核心靶標。TP53又稱腫瘤蛋白P53，是一種腫瘤抑制蛋白，可以誘導細胞凋亡、衰老等過程。Speidel等［19］發(fā)現(xiàn)P53可以通過抑制抗凋亡基因 BCL-2 的表達，促進內(nèi)源性細胞凋亡的發(fā)生。PTGS（又稱COX），是前列腺素生物合成中的關(guān)鍵，在炎癥反應(yīng)過程中起到重要作用。Jin等［20］發(fā)現(xiàn)，塞來昔布（COX2選擇性抑制劑）能顯著降低COX2的表達、抑制子宮內(nèi)膜浸潤到子宮肌層的深度；此外，同一研究中發(fā)現(xiàn)高劑量塞來昔布治療延長了AM小鼠的熱反應(yīng)潛伏期，提示抑制COX2可以降低AM小鼠的疼痛敏感性。IL6是一種促炎細胞因子，有研究［21］發(fā)現(xiàn)，IL6在AM子宮內(nèi)膜活檢中的水平增加。Li等［22］發(fā)現(xiàn)，IL6產(chǎn)生增加可能激活神經(jīng)元受體，誘導疼痛信號，導致痛經(jīng)。ESR1在生長、代謝、生殖功能等方面中發(fā)揮作用，有研究發(fā)現(xiàn)在AM、甲狀腺結(jié)節(jié)、乳腺結(jié)節(jié)等激素依賴性疾病中，ESR1的表達均顯示出增加［23］。VEGFA是VEGF家族中的一員，它可以促進血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，抑制細胞凋亡，誘導血管通透性增加，是血管生成的關(guān)鍵介質(zhì)。Yalaza等［24］發(fā)現(xiàn)，AM患者的異位子宮內(nèi)膜組織中VEGF的表達顯著增加。MMPs可通過降解細胞外基質(zhì)，誘導異位內(nèi)膜轉(zhuǎn)移后侵襲肌層［25］，Li等［26］發(fā)現(xiàn)AM病理標本中MMP2、MMP9和VEGF的表達均顯著高于正常內(nèi)膜，并且VEGF表達與MMP-2和MMP-9表達呈正相關(guān)，推測MMP2和MMP9通過上調(diào)促血管生成細胞因子VEGF的表達，導致新生血管生成。

GO分析顯示，痛經(jīng)丸的功能主要涉及細胞凋亡過程的正調(diào)控、激素應(yīng)答、腺體發(fā)育、炎癥反應(yīng)應(yīng)答、缺氧應(yīng)答等方面。KEGG分析顯示，主要涉及的通路有PI3K-Akt信號通路、p53信號通路、IL-17 信號通路、TNF 信號通路、NF-κB 信號通、HIF-1信號通路等。PI3K-Akt信號通路參與蛋白質(zhì)合成、增殖和存活等過程，對細胞凋亡有抑制作用。Xu等［27］發(fā)現(xiàn)，PI3K-Akt通路與子宮內(nèi)膜細胞的增殖活性增加密切相關(guān)。P53信號通路是主要的細胞凋亡信號通路之一，P53蛋白可調(diào)節(jié)與細胞凋亡、生長停滯或衰老相關(guān)的多種基因的表達，有研究［28］發(fā)現(xiàn)，AM 患者往往伴隨有較低的 P53基因表達。與炎癥相關(guān)信號通路包括：IL-17 信號通路、TNF 信號通路及 NF-κB 信號通路等。IL-17 可誘導促炎因子產(chǎn)生，并介導 NF-κB等炎性信號通路的病理過程［29］。TNF是由免疫相關(guān)細胞產(chǎn)生的炎性細胞因子，參與機體炎癥反應(yīng)及細胞的增殖分化，此外有研究［30］發(fā)現(xiàn)，TNF信號通路通過激活NF-κB可以誘導VEGF的產(chǎn)生，從而促進AM中新血管的形成，增加異位內(nèi)膜的侵襲性。NF-κB信號通路是經(jīng)典的炎癥通路，有研究［31］表明，植物甾醇可通過抑制NF-κB的激活達到抑制促炎細胞因子的產(chǎn)生。劉曉娟等［32］發(fā)現(xiàn)，地諾孕素可通過降低異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞中抗凋亡基因 NF-κB的表達，發(fā)揮誘導異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞凋亡的作用。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是上皮到間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化的過程，這個過程使上皮細胞具有遷移侵襲的能力，與子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［33］。HIF-1是氧穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)節(jié)因子，HIF-1α亞基可在缺氧時積聚，Xiong等［34］發(fā)現(xiàn)缺氧和缺血條件下，HIF-1α可以誘導子宮內(nèi)膜細胞發(fā)生EMT，因此推測HIF-1信號通路可能與AM的形成有關(guān)。

綜合以上文獻中的研究發(fā)現(xiàn)，痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的主要有效成分可能是槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、油酸、6-姜酚、山奈酚、木犀草素等，協(xié)同作用于TP53、PTGS2、IL6、ESR1、VEGF、MMP2、MMP9等靶蛋白，涉及PI3K-Akt、p53、IL-17、TNF、NF-κB、HIF-1等信號通路，共同調(diào)控細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移、血管生成、細胞凋亡、炎癥反應(yīng)、間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化等病理過程。根據(jù)本次探究結(jié)果可以推測，痛經(jīng)丸可能通過多成分、多靶標、多通路發(fā)揮對子宮腺肌病痛經(jīng)的治療作用，并且痛經(jīng)丸的作用體現(xiàn)在兩方面，一是緩解痛經(jīng)癥狀，二是抑制AM的繼續(xù)進展。本次研究初步探討了痛經(jīng)丸治療子宮腺肌病痛經(jīng)的作用機制，然而其具體作用機制仍需的體內(nèi)外實驗進行驗證，本研究旨在為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，為進一步的研究提供思路和研究方向。

參考文獻：

［1］Gordts S，Grimbizis G，Campo R.Symptoms and classification of uterine adenomyosis，including the place of hysteroscopy in diagnosis［J］.Fertility and sterility，2018，109（3）：380-388.

［2］中國醫(yī)師協(xié)會婦產(chǎn)科醫(yī)師分會子宮內(nèi)膜異位癥專業(yè)委員會.子宮腺肌病診治中國專家共識［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2020，55（6）：376-383.

［3］Pinzauti S，Lazzeri L，Tosti C，et al.Transvaginal sonographic features of diffuse adenomyosis in 18-30‐year‐old nulligravid women without endometriosis：association with sympto-ms［J］.Ultrasound in Obstetrics & Gynecology，2015，46（6）：730-736.

［4］Kissler S，Zangos S，Kohl J，et al.Duration of dysmenorrhoea and extent of adenomyosis visualised by magnetic resonance imaging［J］.European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology，2008，137（2）：204-209.

［5］安艷.痛經(jīng)湯對寒凝血瘀型子宮腺肌病痛經(jīng)的臨床研究［D］.南京：南京中醫(yī)藥大學，2014.

［6］王好古.湯液本草［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2019：19-20.

［7］Zhao J，Yang J，Tian S，et al.A survey of web resources and tools for the study of TCM network pharmacology［J］.Quantitative Biology，2019，7：17-29.

［8］任艷，鄧燕君，馬焓彬，等.網(wǎng)絡(luò)藥理學在中藥領(lǐng)域的研究進展及面臨的挑戰(zhàn)［J］.中草藥，2020，51（18）：4789-4797.

［9］陳元歡，張作良，武權(quán)生，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學和分子對接探討少腹逐瘀湯治療EMT痛經(jīng)的作用機制［J］.中國中藥雜志，2021，46（24）：6484-6492.

［10］李林，李征宇.子宮腺肌病惡變合并子宮內(nèi)膜癌1例［J］.實用婦產(chǎn)科雜志，2020，36（3）：237-238.

［11］Liu Z，Sun Z，Liu H，et al.Single-cell transcriptomic analysis of eutopic endometrium and ectopic lesions of adenomyo-sis［J］.Cell & bioscience，2021，11（1）：1-17.

［12］Li X，Deng S，Leng J.Adenomyosis and Pain［J］.Adenomyosis：Facts and treatments，2021：37-46.

［13］Xu W，Song Y，Li K，et al.Quercetin inhibits adenomyosis by attenuating cell proliferation，migration and invasion of ectopic endometrial stromal cells［J］.Drug Design，Development and Therapy，2020：3815-3826.

［14］Nie J，Liu X.Quercetin alleviates generalized hyperalgesia in mice with induced adenomyosis［J］.Molecular Medicine Reports，2017，16（4）：5370-5376.

［15］Liu X，Gao Y，Shen Z，et al.Study on the experimental verification and regulatory mechanism of Rougui-Ganjiang herb-pair for the actions of thermogenesis in brown adipose tissue based on network pharmacology［J］.Journal of Ethnopharmacology，2021，279：114378.

［16］Lee I A，Kim E J，Kim D H.Inhibitory effect of β-sitosterol on TNBS-induced colitis in mice［J］.Planta medica，2012，78（9）：896-898.

［17］Ju P C，Ho Y C，Chen P N，et al.Kaempferol inhibits the cell migration of human hepatocellular carcinoma cells by suppressing MMP‐9 and Akt signaling［J］.Environmental Toxicology，2021，36（10）：1981-1989.

［18］Block L C，Santos A R S，de Souza M M，et al.Chemical and pharmacological examination of antinociceptive constituents of Wedelia paludosa［J］.Journal of Ethnopharmacology，1998，61（1）：85-89.

［19］Speidel D.Transcription-independent p53 apoptosis：an alternative route to death［J］.Trends in cell biology，2010，20（1）：14-24.

［20］Jin Z，Wu X，Liu H，et al.Celecoxib，a selective COX2 inhibitor，markedly reduced the severity of tamoxifeninduced adenomyosis in a murine model［J］.Experimental and Therapeutic Medicine，2020，19（5）：3289-3299.

［21］Zhihong N，Yun F，Pinggui Z，et al.Cytokine profiling in the eutopic endometrium of adenomyosis during the implantation window after ovarian stimulation［J］.Reproductive Sciences，2016，23：124-133.

［22］Li J，Micevych P，McDonald J，et al.Inflammation in the uterus induces phosphorylated extracellular signal‐regulated kinase and substance P immunoreactivity in dorsal root ganglia neurons innervating both uterus and colon in rats［J］.Journal of neuroscience research，2008，86（12）：2746-2752.

［23］趙元，鄭紅霞，徐穎，等.中藥植物雌激素的研究進展［J］.中國中藥雜志，2017，42（18）：3474-3487.

［24］Yalaza C，Canacankatan N，Gürses Ｉ·，et al.Altered VEGF，Bcl-2 and IDH1 expression in patients with adenomyo-sis［J］.Archives of Gynecology and Obstetrics，2020，302：1221-1227.

［25］Shi Y，Zhang C，Wang X，et al.Analysis of the Mechanism of GuizhiFuling Wan in Treating Adenomyosis Based on Network Pharmacology Combined with Molecular Docking and Experimental Verification［J］.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2022，2022.

［26］Li T，Li YG，Pu DM.Matrix metalloproteinase-2 and-9 expression correlated with angiogenesis in human adenomyosiss［J］.Gynecol Obstet Invest.2006；62（4）：229-235.

［27］Xu X Y，Zhang J，Qi Y H，et al.Linc-ROR promotes endometrial cell proliferation by activating the PI3K-Akt pathway［J］.Eur.Rev.Med.Pharmacol.Sci，2018，22（8）：2218-2225.

［28］Zhang Z，Yang B，Zhang W，et al.Clinicopathological characteristics and survival outcomes of patients with coexistence of adenomyosis and endometrial carcinoma［J］.International Journal of Clinical and Experimental Pathology，2018，11（2）：956.

［29］Tan Z，Qian X，Jiang R，et al.IL-17A plays a critical role in the pathogenesis of liver fibrosis through hepatic stellate cell activation［J］.The Journal of Immunology，2013，191（4）：1835-1844.

［30］孫瑤琦，蔣惠慈，劉潔.炎癥因子與子宮腺肌病發(fā)病機制研究進展［J］.國際婦產(chǎn)科學雜志，2020，47（1）：96-100.

［31］劉雅謙，李琳，孫萬成，等.植物甾醇的抗炎性研究進展［J］.中國油脂，2022，47（5）：93-99.

［32］劉曉娟，張玉虹，王虹.地諾孕素對異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞凋亡的影響及其機制研究［J］.重慶醫(yī)學，2014，43（33）：4434-4435.

［33］林斯麗，段華.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在子宮腺肌病中的研究進展［J］.醫(yī)學研究生學報，2019，32（6）：642-645.

［34］Xiong Y，Liu Y，Xiong W，et al.Hypoxia-inducible factor 1α-induced epithelial-mesenchymal transition of endometrial epithelial cells may contribute to the development of endometriosis［J］.Human reproduction，2016，31（6）：1327-1338.

（收稿日期：2023-08-25）