徐海亮 孫夢茹 馬魁 董祥林 周勤生

[摘 要]目的 探究松果菊苷在異質(zhì)性瘢痕修復(fù)過程中的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)及效果。方法 選擇120只斯普拉格-道利大鼠，以隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組（n=60）和研究組（n=60）。通過創(chuàng)傷誘導(dǎo)異質(zhì)性瘢痕生成，對照組接受安慰劑處理，研究組接受松果菊苷處理。在特定時(shí)間點(diǎn)觀察傷口愈合速度，并收集組織樣本進(jìn)行組織學(xué)分析，使用分子生物學(xué)技術(shù)分析炎癥標(biāo)志物、血管生成、基質(zhì)金屬蛋白酶活性和細(xì)胞凋亡。結(jié)果 研究組傷口愈合時(shí)間為（8.48±1.13）d，短于對照組的（11.35±1.57）d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組炎癥程度、血管密度及膠原沉積面積均優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組白細(xì)胞浸潤、TNF-α、IL-6表達(dá)水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組CD31陽性血管數(shù)目、VEGF表達(dá)水平均高于對照組（P<0.05）。結(jié)論 松果菊苷在促進(jìn)異質(zhì)性瘢痕修復(fù)過程中的作用確切，修復(fù)效果良好，能夠有效促進(jìn)傷口愈合，減輕瘢痕組織的炎癥反應(yīng)并加快血管生長。

[關(guān)鍵詞] 異質(zhì)性瘢痕；松果菊苷；大鼠模型；傷口愈合；炎癥反應(yīng)

[中圖分類號(hào)] R619+.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1004-4949（2024）07-0042-04

Intracellular Signal Research and Effect Evaluation of Heterogeneous Scar Repair Process Based on Echinacoside

XU Hai-liang1， SUN Meng-ru1， MA Kui1， DONG Xiang-lin2， ZHOU Qin-sheng1

（1.Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital，Xinjiang Medical University， Urumqi 830054， Xinjiang， China； 2.The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， Xinjiang， China）

[Abstract]Objective To explore the intracellular signal and effect of echinacoside in the process of heterogeneous scar repair. Methods A total of 120 Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group （n=60） and study group （n=60）. Through wound-induced heterogeneous scar formation， the control group received placebo treatment， and the study group received echinacoside treatment. The wound healing rate was observed at a specific time point， and tissue samples were collected for histological analysis. Molecular biology techniques were used to analyze inflammatory markers， angiogenesis， matrix metalloproteinase activity， and apoptosis. Results The wound healing time of the study group was （8.48±1.13） d， which was shorter than （11.35±1.57） d of the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The degree of inflammation， vascular density and collagen deposition area in the study group were better than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of leukocyte infiltration， TNF-α and IL-6 in the study group were lower than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of CD31 positive blood vessels and the expression level of VEGF in the study group were higher than those in the control group （P<0.05）. Conclusion Echinacoside has a definite effect in promoting the repair process of heterogeneous scars， and the repair effect is good. Meanwhile， it can effectively promote wound healing， reduce the inflammatory response of scar tissue and accelerate vascular growth.

[Key words] Heterogeneous scar； Echinacoside； Rat model； Wound healing； Inflammatory response

異質(zhì)性瘢痕（heterogeneous scar）是皮膚組織異常愈合的一種形式，其特征包括過度的炎癥反應(yīng)、血管生成紊亂以及異常的基質(zhì)重塑[1-3]。盡管現(xiàn)有的治療方法取得了一定效果，但對于異質(zhì)性瘢痕的精確調(diào)控和治療仍然存在挑戰(zhàn)[4，5]。松果菊苷作為一種天然植物提取物，具有抗炎、抗氧化和細(xì)胞保護(hù)等作用。既往研究中發(fā)現(xiàn)[6，7]，松果菊苷已經(jīng)在不同領(lǐng)域顯示了其治療潛力。然而，松果菊苷在異質(zhì)性瘢痕修復(fù)中的作用及其作用機(jī)制尚未明確[8]。本研究旨在通過使用斯普拉格-道利大鼠模型，深入探討松果菊苷在異質(zhì)性瘢痕修復(fù)過程中的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，并評估其對傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血管生成等方面的影響，通過綜合研究結(jié)果，以期為松果菊苷在異質(zhì)性瘢痕治療中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，并為未來深入研究其分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)，從而拓展異質(zhì)性瘢痕治療的新途徑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇120只斯普拉格-道利大鼠，平均體重為200 g（月齡2～2.5個(gè)月，雌雄不限），均在同一環(huán)境下飼養(yǎng)，嚴(yán)格遵循國家動(dòng)物飼養(yǎng)規(guī)則飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)已通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審批。

1.2 模型制作方法 將120只斯普拉格-道利大鼠以隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組（n=60）和研究組（n=60）。通過創(chuàng)傷誘導(dǎo)異質(zhì)性瘢痕生成，例如通過皮下植入異物或機(jī)械性損傷誘導(dǎo)形成異質(zhì)性瘢痕。對照組接受安慰劑處理，研究組接受松果菊苷處理，可使用口服給藥或局部注射給藥方式，兩組需保證給藥方式相同。觀察和取樣：在特定時(shí)間點(diǎn)，觀察大鼠傷口愈合情況，拍攝照片并定期取樣，包括組織樣本和血液。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分析：使用分子生物學(xué)技術(shù)，如免疫組化、PCR、Western blot等，分析組織樣本中與異質(zhì)性瘢痕修復(fù)相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，如炎癥標(biāo)志物等。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1記錄兩組傷口愈合速度 記錄大鼠的傷口愈合速度，包括初期的愈合速度和愈合完成所需的時(shí)間。可以通過定期測量傷口大小或拍攝照片進(jìn)行定量分析。

1.3.2評估兩組組織學(xué)變化 對收集的組織樣本進(jìn)行組織學(xué)分析，包括炎癥程度、血管生成、膠原沉積等。采用組織切片技術(shù)制備組織樣本，隨后進(jìn)行多種染色處理，以便更準(zhǔn)確地觀察和評價(jià)生物學(xué)變化。

1.3.3檢測兩組炎癥標(biāo)志物 分析組織樣本中的炎癥標(biāo)志物，如白細(xì)胞浸潤、炎性因子表達(dá)水平等。通過免疫組化進(jìn)行檢測，組織取材后使用濃度為10%的中性緩沖固定液進(jìn)行緩沖固定，固定時(shí)間不少于2 h，在使用梯度酒精（低濃度到高濃度）對其脫水處理，然后再使用透明液進(jìn)行透明處理，浸于石蠟液內(nèi)浸蠟，再進(jìn)行石蠟包埋處理，實(shí)施常規(guī)切片法處理，并且將病理組織切成厚度為2 μm的切片，用具有粘附性的防脫玻片進(jìn)行撈片，然后檢測白細(xì)胞浸潤、TNF-α、IL-6表達(dá)水平。

1.3.4分析兩組血管生成情況 分析瘢痕組織中的血管生成情況，評估新生血管形成情況，可通過免疫組化檢測血管標(biāo)志物CD31陽性血管數(shù)目及VEGF表達(dá)水平。

1.3.5檢測兩組基質(zhì)金屬蛋白酶活性 考察瘢痕組織中基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，以評估瘢痕的重塑能力，可使用基質(zhì)金屬蛋白酶活性檢測試劑盒等方法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組傷口愈合時(shí)間比較 研究組傷口愈合時(shí)間為（8.48±1.13）d，短于對照組的（11.35±1.57）d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.8875，P=0.0000）。

2.2 兩組組織學(xué)變化狀況比較 研究組炎癥程度、血管密度及膠原沉積面積均優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 兩組炎癥標(biāo)志物狀況比較 研究組白細(xì)胞浸潤、TNF-α、IL-6表達(dá)水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 兩組血管生成情況比較 研究組CD31陽性血管數(shù)目、VEGF表達(dá)水平均高于對照組（P<0.05），見表3。

3 討論

異質(zhì)性瘢痕屬于臨床中比較常見的皮膚問題，屬于皮膚修復(fù)過程中的異常病癥，疾病表現(xiàn)以瘢痕過度生長為主，不僅會(huì)對患者的外觀形成較大影響，還有可能導(dǎo)致疼痛與功能障礙，從而嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[9-11]。當(dāng)前關(guān)于異質(zhì)性瘢痕的治療方式非常多，雖然能夠一定程度的緩解或修復(fù)異質(zhì)性瘢痕，但是大多數(shù)治療方式的效果較不理想，同時(shí)還存在一定副作用，因此尋找一種有效、安全的瘢痕修復(fù)治療方式成為了臨床研的究重要方向[12，13]。

松果菊苷屬于一種天然存在的化合物，近年來在抗炎、促進(jìn)傷口愈合等方面具有一定作用[14，15]。當(dāng)前臨床研究主要集中在其抗氧化和抗炎作用上，但是對于松果菊苷在修復(fù)異質(zhì)性瘢痕過程中的具體作用和機(jī)制探索尚不明確[16]。近些年有研究認(rèn)為[17]，松果菊苷處理后傷口愈合速度顯著加快，并認(rèn)為松果菊苷可能對促進(jìn)傷口愈合過程產(chǎn)生積極影響。另一研究發(fā)現(xiàn)[18]，應(yīng)用松果菊苷的實(shí)驗(yàn)組瘢痕組織外觀更為正常，顏色較淺，質(zhì)地較柔軟，而對照組瘢痕則呈現(xiàn)出較為明顯的炎癥反應(yīng)。松果菊苷作為一種天然的酚類化合物，其抗炎效果主要通過抑制炎癥介質(zhì)的生成和釋放來實(shí)現(xiàn)，比如降低促炎細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-6的水平[19]。此外，松果菊苷還能通過抑制NF-κB信號(hào)通路來發(fā)揮作用，這是控制炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一[20]。

本研究結(jié)果顯示，研究組傷口愈合時(shí)間為（8.48±1.13）d，短于對照組的（11.35±1.57）d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組炎癥程度、血管密度及膠原沉積面積均優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組白細(xì)胞浸潤、TNF-α、IL-6表達(dá)水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組CD31陽性血管數(shù)目、VEGF表達(dá)水平均高于對照組（P<0.05），表明松果菊苷在促進(jìn)異質(zhì)性瘢痕修復(fù)過程中的作用確切，這為進(jìn)一步深入研究其分子機(jī)制提供了基礎(chǔ)，組織切片呈現(xiàn)出更少的纖維化和膠原沉積，瘢痕組織的形態(tài)更加接近正常皮膚組織。血管生成方面的結(jié)果也證實(shí)了松果菊苷的積極影響，松果菊苷可以展現(xiàn)更為豐富和緊密的血管網(wǎng)絡(luò)。分析原因可能在于松果菊苷促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管生成過程，有助于提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，從而促進(jìn)傷口愈合。本研究還存在一定局限性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型雖然提供了有價(jià)值的信息，但其生物學(xué)特征和人體可能存在差異。因此，未來的研究還需在更接近人體條件的模型中進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步深入研究松果菊苷的劑量和給藥時(shí)機(jī)等參數(shù)的最優(yōu)選擇，以確保其在治療中的最佳效果。

綜上所述，松果菊苷可能作為異質(zhì)性瘢痕修復(fù)治療期間的有效技術(shù)方式，有助于改善異質(zhì)性瘢痕的形成和愈合。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李夏林，胡廣詢，潘大宇.許旺細(xì)胞外泌體減少脊髓損傷區(qū)血管生成和瘢痕形成促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)[J].中國組織工程研究，2023，27（10）：1567-1571.

[2]馮聰，李佳，張寅斌，等.基于基因瘢痕評分（GSS）探索乳腺癌中的同源重組修復(fù)缺陷（HRD）[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2023，31（5）：855-860.

[3]龔琬茹，劉夢嫦，劉星可，等.增生性瘢痕與瘢痕疙瘩上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及CD26表達(dá)的異質(zhì)性研究[J].陸軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，44（21）：2174-2182.

[4]楊雨婷，劉蘭，丁曉斌，等.瘢痕疙瘩中心與邊緣表皮層形態(tài)學(xué)和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的異質(zhì)性研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，43（11）：1025-1031.

[5]丁毓威，曹青，楊陸濤，等.組織工程真皮聯(lián)合燒傷瘢痕表皮移植在瘢痕整形中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)信息，2023，36（5）：131-134.

[6]馮茜，董波，楊旭紅.松果菊苷治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中草藥，2023，54（5）：1654-1662.

[7]王倩婷，江硯，徐良輝，等.松果菊苷通過調(diào)節(jié)AKR1B10/ ERK信號(hào)傳導(dǎo)抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的惡性進(jìn)程[J].中國中藥雜志，2023，48（3）：744-751.

[8]決利利，梁婧，李曉婷，等.松果菊苷固體脂質(zhì)納米粒的制備及其在體腸吸收特性、體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究[J].中成藥，2022，44（8）：2429-2434.

[9]王玨，胡曉紅，賀偉峰.成纖維細(xì)胞的異質(zhì)性及其在創(chuàng)面愈合和瘢痕形成中的作用[J].中華損傷與修復(fù)雜志（電子版），2021，16（4）：353-357.

[10]楊凱，潘穎，宇芙蓉，等.外源性白介素17A激活PLC/PRF/5細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制HBsAg表達(dá)的研究[J].中國免疫學(xué)雜志，2023，39（7）：1358-1361.

[11]楊雨婷.瘢痕疙瘩中心與邊緣表皮層形態(tài)學(xué)和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的異質(zhì)性研究[D].瀘州：西南醫(yī)科大學(xué)，2021.

[12]劉蓓，高泓浩，程莉，等.干擾素-γ刺激人巨噬細(xì)胞后的轉(zhuǎn)錄組變化與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)調(diào)控機(jī)制研究[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2022，30（5）：1590-1595.

[13]陳雙雙，武靖，王愉靖，等.絲氨酸蛋白酶抑制劑通過細(xì)胞內(nèi)吞作用參與調(diào)控細(xì)胞信號(hào)通路的機(jī)制的研究現(xiàn)狀[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2021，37（22）：3189-3192，3203.

[14]米妍妍，徐曼，王春雙.松果菊苷通過IL-33/STAT軸對膿毒癥大鼠急性腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].西部醫(yī)學(xué)，2023，35（4）：519-523，528.

[15]毛羽佳，殷俏，鄭琳璐，等.松果菊苷對高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及新生血管形成的影響[J].眼科新進(jìn)展，2022，42（4）：272-277.

[16]王舒，甘衛(wèi)冬，金錦祥，等.Slit-Robo細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2022，49（2）：318-327.

[17]廖恒毅，王若霖，黃進(jìn).ROPs：植物細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路的分子開關(guān)[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2022，38（3）：271-283.

[18]竇志慧，王玉佩，張紅.液-液相分離在細(xì)胞信號(hào)調(diào)控過程中的作用機(jī)制[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2020，36（9）：1013-1023.

[19]崔艷紅，李克芳，金博，等.松果菊苷抑制博來霉素誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷及炎癥反應(yīng)[J].中國病理生理雜志，2021，37（11）：2024-2030.

[20]熊瑋，彭斌，高智.松果菊苷對尿毒癥大鼠腎損傷的影響及機(jī)制[J].中國藥房，2024，35（2）：198-203.

收稿日期：2024-2-20 編輯：扶田