李璐 孫曉琳 魏俊杰 劉瑞琪 吳偉鑫 劉海云 張印則

(深圳大學總醫(yī)院 輸血科，廣東 深圳 518000)

根據《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《醫(yī)療機構臨床用血管理辦法》《臨床用血質量控制指標(2019 年版)》《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則(CNAS-CL02:2023)》及《輸血相容性檢測標準》等要求，臨床實驗室應使用質控品對檢測項目進行室內質量控制，評價檢測體系的有效性、可靠性，保證試驗結果準確可信。 輸血相容性檢測項目均為定性檢測，應使用弱陽性質控品對檢測體系有效性、可靠性進行監(jiān)測，以敏銳地發(fā)現(xiàn)檢測體系的細微變化，同時質控品應能檢出IgM 型抗體和IgG 型抗體[1-2]。 目前市售的國內外輸血相容性檢測室內質控品多為強陽性，難以敏銳地發(fā)現(xiàn)檢測體系的變化，易導致假陰性結果。 因此，本實驗室使用自制低值陽性質控品，對實驗室檢測體系進行質量監(jiān)測。 報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

2023 年本院5 份DAT(-)B/RhD(-)E(-)和A/RhD(＋)E(＋)的健康體檢者EDTA 抗凝標本，以及30 份意外抗體篩查陰性的健康體檢者EDTA 抗凝標本和促凝標本。

1.2 儀器與試劑

IgM 型抗-A 和抗-B 血型定型試劑(批號:20211220)、IgM 型抗-E 血型定型試劑(批號:20233201)、IgG 型抗-D 血型定型試劑(批號:20230627) 均為上海血液生物醫(yī)藥公司產品。ABO/RhD 血型檢測卡(批號:23007.01)、抗球蛋白檢測卡(批號:23067.01)、低離子溶液(LISS)(批號:23003.01)均為西班牙Grifols 公司產品。 人ABO 血型反定型用紅細胞試劑盒(批號:202308011)、意外抗體篩查細胞(批號:202308007)均為江蘇力博醫(yī)藥公司產品。 紅細胞保存液(批號:20230801)、抗體稀釋液(批號:20230801)均為深圳市愛康試劑有限公司產品。 全自動血型及配血系統(tǒng)(Erytra，西班牙Grifols 公司)、血清學離心機(KA-2200，日本Kubota 公司)。

1.3 質控品配制

1.3.1血型質控品

正定型:1、2 號質控品分別各加入B/RhD(-)E(-)、A/RhD(＋)E(＋)壓積紅細胞1 mL。 反定型:1、2 號質控品分別各加入紅細胞保存液4 mL，分別加入適量IgM 型單克隆抗-A 和抗-B，使其微柱凝膠法凝集強度達到1＋。 根據RhD 陰性個體的表型分布頻率，大多數RhD 陰性人群Rh 分型為Rh dccee，根據血型ABO、RhD、RhE 抗原互補原則設計多種配伍方式，以相對不易獲取的RhD(-)E(-)紅細胞為1 號管，按照血型抗原互補原則配伍選擇RhD(＋)E(＋)為2 號管，如A/RhD(-)E(-)與B/RhD(＋)E(＋)；O/RhD(-)E(-)與AB/RhD(＋)E(＋)；AB/RhD(-)E(-)與O/RhD(＋)E(＋)。

1.3.2意外抗體篩查質控品

3、4 號質控品分別各配制血漿4 mL、血清4 mL、抗體稀釋液4 mL、血漿2 mL＋抗體稀釋液2 mL、血清2 mL＋抗體稀釋液2 mL 等5 種不同介質，分別加入適量IgM 型單克隆抗-E 和IgG 型單克隆抗-D，使其相應陽性抗篩細胞微柱凝膠法凝集強度達到1＋。

1.4 質控品定標

1)血型質控品。 1、2 號質控品對ABO 正反定型、RhD 血型鑒定反應體系進行監(jiān)測。 2)意外抗體篩查質控品。 3 號、4 號為弱陽性質控品，2 號為陰性質控品，對意外抗體篩查反應體系中IgM 和IgG類抗體進行監(jiān)測。 3)交叉配血質控品。 以3 號質控品為受血者，1、2 號質控品分別為供血者，進行交叉配血，監(jiān)測IgM 型抗體。 以4 號質控品為受血者，1、2 號質控品為供血者，進行交叉配血，監(jiān)測IgG 型抗體。

1.5 穩(wěn)定性監(jiān)測

分別于d1、d2、d5、d10、d15、d20、d25 和d30 對1～4 號質控品，按質控規(guī)則進行血型鑒定、意外抗體篩查、交叉配血檢測并記錄結果。

1.6 重復性監(jiān)測

對1、2 號質控品及保存介質為抗體稀釋液的3、4 號質控品各1 支，按質控規(guī)則連續(xù)進行20 次血型鑒定、意外抗體篩查、交叉配血檢測并記錄結果。

1.7 統(tǒng)計學分析

根據AABB 技術手冊，凝集強度4 ＋、3 ＋、2 ＋、1＋、1＋w、±、-賦值為12、10、8、5、4、2、0 分。 使用IMB SPSS Statistics 22 軟件對數據進行分析，所得數據采用均值±標準差(±s)形式表示，相同介質組內比較變異系數(CV)；不同介質組間比較采用單因素方差分析方差齊Tukey 檢驗進行差異分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 抗體用量

2.1.1血型質控品

1、2 號質控品分別各加入紅細胞保存液4 mL，分別加入IgM 型單克隆抗-A 2 μL(1＋∶2 048)和抗-B 4 μL(1＋∶1 024)使其凝集強度達到1＋。

2.1.2意外抗體篩查質控品

3、4 號質控品分別各配制血漿4 mL、血清4 mL、抗體稀釋液4 mL、血漿2 mL＋抗體稀釋液2 mL、血清2 mL＋抗體稀釋液2 mL 等5 種不同介質，分別加入IgM 型單克隆抗-E 2 μL(1＋∶2 048)和IgG 型單克隆抗-D 2 μL(1＋∶2 048)使其相應陽性抗篩細胞凝集強度達到1＋。

2.2 靶值定標

使用表型Ⅰ:Rh DCCee、Ⅱ:Rh DccEE、Ⅲ:Rh dccee 的意外抗體篩查細胞進行質控品定標檢測，微柱凝膠法質控品定標結果見表1。

表1 室內質控定標結果Table 1 Results of internal quality control calibration

2.3 穩(wěn)定性監(jiān)測

2.3.1血型質控品

分別在d1、d2、d5、d10、d15、d20、d25 和d30 對1 號管和2 號管進行血型鑒定，進行穩(wěn)定性分析，結果見表2。 低值陽性抗體凝集強度評分情況見圖1。

圖1 血型質控品低值陽性抗體凝集強度評分Figure 1 Score of agglutination intensity of weakly positive antibody for blood group quality control products

表2 血型質控品穩(wěn)定性評價評分統(tǒng)計Table 2 Statistics of stability evaluation score of blood type quality control product

2.3.2意外抗體篩查質控品

分別在d1、d2、d5、d10、d15、d20、d25 和d30 對5 種不同抗體保存介質的低值陽性意外抗體篩查質控品3、4 號管中IgM 型抗-E 和IgG 型抗-D 進行穩(wěn)定性監(jiān)測，根據AABB 技術手冊，凝集強度1＋賦值為5 分。 其中抗體稀釋液保存介質與其他4 組介質穩(wěn)定性差異有統(tǒng)計學意義(F＝11.35，P＜0.05)，結果見圖2。 低值陽性抗體在抗體稀釋液介質中凝集強度評分情況見圖3。

圖2 意外抗體在不同保存介質中凝集強度評分Figure 2 Agglutination intensity scores of unexpected antibodies in different preservation media

圖3 意外抗體篩查質控品低值陽性抗體在抗體稀釋液介質中凝集強度評分Figure 3 Score of agglutination intensity of weakly positive antibodies of unexpected antibody screening quality control products in antibody diluent medium

2.3.3交叉配血質控品

分別在d1、d2、d5、d10、d15、d20、d25 和d30 對5 種不同抗體保存介質的3 號管和4 號管分別與1號管和2 號管進行交叉配血穩(wěn)定性監(jiān)測，根據AABB 技術手冊，凝集強度1＋賦值為5 分，其中抗體稀釋液保存介質與其他4 組介質穩(wěn)定性差異有統(tǒng)計學意義(F＝7.66，P＜0.05)，結果見圖4。 抗體稀釋液介質中交叉配血凝集強度評分情況見圖5。

圖4 交叉配血在不同保存介質中凝集強度評分Figure 4 Score of agglutination intensity of cross-matching in different preservation media

圖5 抗體稀釋液介質中交叉配血凝集強度評分Figure 5 Score of agglutination intensity of cross-matching in antibody diluent medium

2.4 重復性監(jiān)測

對1、2 號質控品及保存介質為抗體稀釋液的3、4 號質控品各1 支，按質控規(guī)則連續(xù)進行20 次血型鑒定、意外抗體篩查、交叉配血檢測，結果見表3～4。

表3 血型質控品重復性評價評分統(tǒng)計Table 3 Statistics of repeatability evaluation score of blood type quality control products

表4 意外抗體篩查與交叉配血質控品重復性評價評分統(tǒng)計Table 4 Statistics of repeatability evaluation score of unexpected antibody screening and cross-matching quality control products

3 討論

采用與日常待檢標本相同的檢測程序對質控品進行檢測，通過質控品檢測值與靶值之間的偏離程度，判斷檢測體系(試劑、設備、檢測程序、人員操作等)的有效性與穩(wěn)定性，從而推斷出日常檢測結果是否可信[3-4]。

弱凝集檢出能力的質量控制在臨床工作中至關重要[5]，在保證試驗結果的準確性及保障臨床用血安全方面有重要價值[6-7]。 通過血漿4 mL、血清4 mL、抗體稀釋液4 mL、血漿2 mL＋抗體稀釋液2 mL、血清2 mL＋抗體稀釋液2 mL 以上5 種不同抗體保存介質分別在d1、d2、d5、d10、d15、d20、d25 和d30 對低值陽性質控品IgM 型抗-E 和IgG 型抗-D進行穩(wěn)定性監(jiān)測，抗體稀釋液保存弱陽性抗體穩(wěn)定性最強，AABB 技術手冊將凝集強度1 ＋賦值為5分，抗體稀釋液組得分為5.25±1.75。 血型質控品穩(wěn)定性評價，ABO 血型抗原變異系數均為0，低值陽性血型抗體變異系數均＜10%。 可見，該質控品體系在30 d 內穩(wěn)定性良好。 《標準物品/標準樣本的使用指南(CNAS-GL04:2017)》對標準樣品做了明確定義“具有一種或多種規(guī)定特性足夠均勻且穩(wěn)定的材料”。 可見，質控品的核心要求是定值穩(wěn)定，并未對其形式做出明確限定，因此該質控品體系采用穩(wěn)定性更強的抗體稀釋液而非血漿作為弱陽性抗體保存介質。

根據《輸血相容性檢測室內質量控制的失控判定與處理專家共識》對于抗體篩查室內質控品設計推薦要求，使用有臨床意義的特異性弱抗體(如抗-E、抗-Fya、抗-c)為低值陽性質控品，以確保檢測的敏感性和試劑保存過程中紅細胞抗原表達的完整性[8]。 根據室內質控品制備和使用要求[9-12]，該自制質控品體系充分考慮Rh 表型頻率及抗原劑量效應配制4 支質控品對ABO/RhD 血型、意外抗體篩查(陰性/IgM 弱陽性/IgG 弱陽性)、交叉配血(陰性/IgM 弱陽性/IgG 弱陽性)進行全面質量控制。

該質控品體系選擇使用低值陽性IgM 型抗-E和IgG 型抗-D 對意外抗體篩查及交叉配血反應體系進行監(jiān)測，根據RhD 陰性個體的表型分布頻率，大多數RhD 陰性人群Rh 分型為Rhdccee，以相對不易獲取的RhD(-)E(-)紅細胞為1 號管，按照血型抗原互補原則配伍選擇RhD(＋)E(＋)為2 號管，如:B 型RhD(-)E(-)與A 型RhD(＋)E(＋)；A 型RhD(-)E(-)與B 型RhD(＋)E(＋)；O 型RhD(-)E(-)與AB 型RhD(＋)E(＋)；AB 型RhD(-)E(-)與O 型RhD(＋)E(＋)。 避免因RhD(-)紅細胞標本較少而影響自制質控品配制和使用的問題。

在Rh 血型系統(tǒng)中，RhD 抗原性最強，其次為RhE、RhC、Rhc、Rhe 抗原，均具有明顯的劑量效應[13]，其對輸血相容性檢測結果影響顯著[14]。 為保障該質控體系中(3 號管)意外抗體篩查與(3 號管＋2 號管)交叉配血凝集強度的一致性，應充分考慮2 號管所用紅細胞RhE 抗原的劑量效應，最終選用純合子還是雜合子，取決于抗篩細胞性質，建議與抗篩細胞RhE 抗原性質保持一致。

輸血相容性檢測實驗室需要通過質控品監(jiān)測檢測體系的準確性、穩(wěn)定性及有效性，保障臨床用血安全[15]。 該質控品體系經過1 年的使用，重復性及穩(wěn)定性好、配制原料易獲取、配制方法簡單、實用性強，能靈敏地監(jiān)測檢測體系的有效性、可靠性。受技術條件的限制，目前技術無法制備出血型抗原弱陽性質控品，弱陽性抗原的人工制備尚待進一步研究。