劉旭映 黃伯泉 廖芬芳 李仲平 梁浩堅 杜榮松 謝君謀 黃愛瓊 王淏

(廣州血液中心 廣州市血液安全重點實驗室，廣東 廣州 510095)

ABO、Rh 血型系統(tǒng)是人類血液系統(tǒng)中最重要的2 個血型系統(tǒng)，準確鑒定獻血者血型是保障臨床輸血安全的首要前提，也是給獻血者提供優(yōu)質(zhì)服務的需要。 我們統(tǒng)計分析了2021—2022 年本中心無償獻血者ABO、RhD 血型檢測結(jié)果，得出廣州地區(qū)獻血人群ABO、RhD 血型的檢測情況、ABO 亞型及稀有血型的構(gòu)成及分布，并通過分析重復獻血者血型正反不一致檢出情況來了解各類亞型的漏檢率，以此積累本地區(qū)獻血人群血型生物學流行數(shù)據(jù)，為進一步提高獻血者血型篩查的準確性，保障臨床用血安全有效提供參考。

1 材料與方法

1.1 標本來源

2021 年1 月1 日—2022 年12 月31 日廣州血液中心(包括中心城區(qū)及從化、花都、增城3 個集中檢測點)無償獻血者標本共749 123 份，所有獻血者均符合《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2011)的相關(guān)要求。 采用EDTA-K2抗凝試管采集獻血者標本，所有標本在檢測前1 800×g 離心5 min。

1.2 試劑與儀器

抗-A/B 血型定型試劑(上海血液醫(yī)藥公司，批號:20200912、20201222、2021122)、RhD(IgM)血型定型試劑(北京金豪公司，批號:20200901103、20201201104、20220201101)、人ABO 血型反定型紅細胞試劑(廣東營安生物公司，批號:01210801、01211001、01221003)，STAR-CH8 全 自 動 加 樣 儀(Hamilton 公司)、8420 離心機(久保田公司)、UNIVERSAL 320 臺式平板離心機(Hettich 公司)、Thermostar 微孔板振蕩孵育器(Thermo 公司)、340RT 酶標儀(Anthos 公司)，所有試劑均在有效期內(nèi)使用，儀器設備均經(jīng)計量部門校準合格。

1.3 方法

1.3.1獻血者血型檢測

ABO 血型及RhD 血型檢測均參照參考文獻[1-2]方法操作。 ABO 血型定型與RhD 血型初檢使用96 孔微型板法，具體操作如下:使用全自動加樣儀在96 孔血型板中按程序加樣，手工輕拍混勻，平板離心機320×g 離心1 min，經(jīng)微孔板振蕩孵育器震蕩后使用酶標儀判讀結(jié)果，并由人工核對。 在ABO 正反定型判讀中，把正定型凝集程度＜3＋或反定型凝集程度＜2＋的情況判讀為凝集減弱，正/反定型出現(xiàn)意外凝集則判讀為額外凝集反應，以上情況均判斷為正反不一致標本。 對檢測中所有RhD初篩陰性標本及正反不一致標本送檢本中心臨床輸血研究所血型參比實驗室進行確證實驗，作為最終結(jié)果。 RhD 陰性確認時，使用抗體篩查細胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)檢出意外抗體。

1.3.2數(shù)據(jù)分析

對無償獻血者標本中的重復獻血者標本進行剔除(同1 獻血者在2021—2022 年獻血≥2 次的計為1 次)，計算剔除重復獻血者后各類血型的占比。漏檢率:對確證為ABO 亞型獻血者的以往獻血檢測資料進行查詢，剔除初次獻血者后統(tǒng)計重復獻血者(獻血≥2 次)過往ABO 血型定型判讀正反不一致的次數(shù)，計算漏檢率(1-判讀正反不一致的次數(shù)/累計檢驗次數(shù))(在計算漏檢率時，將具有相同血型血清學特征的各型亞型歸為1 組，如A3、B3、A3B、AB3為1 組，數(shù)據(jù)合并統(tǒng)計，以“A3/B3”表示)。采用Microsoft Excel 2003 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與圖表繪制，計數(shù)資料采用(n，%)表示。

2 結(jié)果

2.1 獻血者ABO 血型分布與RhD 陰性檢出情況

獻血者標本ABO 血型分布見表1。 RhD 血型初篩陰性標本3 366[3 366/749 123(0.45%)]，經(jīng)RhD 陰性表型確認標本3 215 份[3 215/749 123(0.43%)]， RhD 變異型標本151 份[151/749 123(0.02%)]；剔除重復獻血者后計算RhD 血型初篩陰性標本共2 277 份，其中RhD 陰性表型確認2 188份[2 188/2 277(96.09%)]，合并檢出意外抗體標本30 份[30/2 188(1.37%)]，RhD 變異型標本89 份[89/2 277(3.91%)]。

表1 獻血者標本ABO 血型分布情況(n，%)Table 1 Distribution of ABO blood groups in blood donor samples (n，%)

2.2 獻血者標本檢測ABO 血型正反定型不一致情況

共檢測出506 份ABO 血型正反定型不一致標本，經(jīng)血型血清確認其中ABO 正反一致357 份，正反不一致149 份(表2)，剔除重復獻血者后各類亞型38 份(表3)。

表2 ABO 正反定型不一致標本血清學確認結(jié)果Table 2 Serological identification results of samples with ABO discrepancy between forward and reverse blood grouping

表3 獻血者標本ABO 正反定型不一致亞型檢出情況Table 3 Dectection of subtypes in blood donor samples with ABO discrepancy between forward and reverse blood grouping

2.3 重復獻血者ABO 亞型漏檢率分析見表4。

表4 重復獻血者標本各類亞型漏檢情況Table 4 Missed detection of various subtypes in repeat blood donor samples

2.4 意外抗體檢出情況

共檢出136 份意外抗體標本，剔除重復獻血者后意外抗體標本檢出128 份，檢出率為25/10 萬(128/513 291)，合并檢出意外抗體檢出的血型有:類孟買A 型4 份、類孟買B 型3 份、Bx5 份、ABx1份、RhD 陰性30 份。

3 討論

2021—2022 年廣州地區(qū)獻血者ABO 血型的構(gòu)成比例和RhD 陰性、RhD 變異型的檢出率與廣州地區(qū)2016—2019 年的情況基本一致[3]。 剔除重復獻血者后共檢出RhD 變異型標本89 份，占Rh 血型初篩陰性的3.91%(89/2 277)，略高于北京的3.82%[4]， 低 于 西 安 的 4.06%[5]、 石 家 莊 的6.84%[6]、寧夏的5.49%[7]。

ABO 基因編碼區(qū)的突變引起A、B 抗原數(shù)量和/或質(zhì)量的異常，導致在ABO 血型定型時出現(xiàn)正反定型不符或者凝集強度的改變[8-11]。 使用AB0抗血清試劑檢測紅細胞的典型陽性結(jié)果通常為3＋～4＋的強凝集，正定型凝集減弱極有可能是ABO亞型[12]。 通過對重復獻血者疑難血型漏檢情況分析(表4)，我們發(fā)現(xiàn)A3/B3和Ax/Bx的漏檢率較高，這2 類亞型因其與單克隆抗體產(chǎn)生較強的凝集而容易被漏檢[13]。 A3/B3在微板法正定型中的凝集程度一般在2＋～3＋，紅細胞凝集塊較大，凝集紅細胞占一半以上，而反定型往往不存在意外ABO 抗體，因此容易被認為正反定型相符而忽略混合視野的存在。 Ax/Bx大多數(shù)伴有ABO 意外抗-A/B，反定型中會出現(xiàn)強弱不等的額外的血清凝集反應，本研究在統(tǒng)計剔除重復獻血者檢出的9 份Ax/Bx標本中，有5 份Bx 檢出伴有意外抗-B。 在正定型中易被誤判成“O”型的血型有Am/Bm、Ael/Bel及類孟買血型，其紅細胞表面微弱的抗原需通過靈敏性更高的吸收放散試驗來檢測[14]，而其在反定型中的凝集反應通常表現(xiàn)正常。 Am/Bm不伴意外抗-A/B 的出現(xiàn)，表現(xiàn)出正定型為O 型，反定型為A/B 型的格局，這一特點使其不易被漏檢(表4)。 類孟買血型是1 種較為罕見的血型，是由于α-1，2 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(α-1，2-fucosyItransferase gene，F(xiàn)UT1)基因突變導致紅細胞表面H 抗原部分或完全缺失，而分泌液中存在H 物質(zhì)。 多數(shù)類孟買表型是由于ABO正反定型不一致或存在意外抗體被發(fā)現(xiàn)[15]。 本地區(qū)2 年間檢測的513 291 份剔除重復獻血者的標本中，檢測出12 份類孟買血型標本，類孟買A 型和類孟買B 型各6 份，檢出率為2.3/10 萬。 類孟買也可以出現(xiàn)在O 型個體中，但在常規(guī)血型檢測中因其正反定型一致而不能從中篩查出來，通過紅細胞或分泌液中檢測出1 型H 抗原可以鑒定。 本研究統(tǒng)計的5 份AB 亞型標本(表2)，因其紅細胞與抗-B反應凝集減弱，正定型表現(xiàn)為A 強B 弱，同時反定型表現(xiàn)為AB 型格局而被發(fā)現(xiàn)；3 份B(A)型標本則是因為紅細胞與抗-A 反應凝集減弱，正定型表現(xiàn)為A 弱B 強，反定型表現(xiàn)為B 型格局而被發(fā)現(xiàn)。B(A)型在本研究統(tǒng)計中出現(xiàn)了40%的漏檢率，提示我們在讀取正定型結(jié)果時，需分時段多次判讀，微型板在經(jīng)過振蕩器震蕩后，弱凝集被打散，即時讀取結(jié)果多為陰性，應靜置3 ～5 min 后再觀察結(jié)果，以避免弱凝集的漏檢。

除ABO 亞型、意外抗體外，冷凝集素、補體致敏、直接抗體陽性、血清蛋白過多等也是導致血型正反定型不一致的常見因素[16-17]。 本研究統(tǒng)計顯示，因弱/無紅細胞反應的58 份正反定型不一致標本中，確證各類亞型55 份，提示正定型凝集減弱極有可能是因為ABO 亞型或類孟買型。 在215 份弱/無血清反應的標本中沒有檢出特殊血型，可能原因有:1)健康成人的ABO 抗體效價為4 ～2 048，差異較大[18-20]；2)方法學原因:待測血清與試劑紅細胞的反應通常稍弱，同時使用機械震動儀的震動能力較強，對比手工試管法更容易出現(xiàn)弱血清反應的情況，可通過室溫下孵育5 ～15 min、重復離心等操作來增強抗體的弱反應性。 在常規(guī)的血型檢測試劑抗-A 能與A2細胞呈現(xiàn)強凝集，故A2亞型常表現(xiàn)為正反一致，黃可君等[21]報告廣州地區(qū)A2亞型在A 型獻血者中的頻率為1.64%。 除A2/A2B 亞型外，本地區(qū)獻血人群B 亞型的檢出率最高，與國內(nèi)多地報道一致[13，22-24]

綜上所述，通過統(tǒng)計分析近2 年廣州地區(qū)獻血者ABO 及RhD 血型的相關(guān)數(shù)據(jù)，匯總血型篩查中容易疏忽和漏檢的ABO 亞型凝集特征，借此提高實驗室篩查能力和完善獻血者血型信息，確保輸血安全。