中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì) 血液安全專(zhuān)業(yè)委員會(huì) 紅細(xì)胞血型意外抗體篩查專(zhuān)家共識(shí)編寫(xiě)組

1 紅細(xì)胞血型意外抗體篩查專(zhuān)家共識(shí)的適用范圍

紅細(xì)胞血型意外抗體(unexpected antibody)篩查專(zhuān)家共識(shí)適用于醫(yī)院輸血科(血庫(kù))及血站抗體篩查試驗(yàn)。

2 紅細(xì)胞血型意外抗體篩查專(zhuān)家共識(shí)目的及意義

針對(duì)紅細(xì)胞抗原的同種免疫可由妊娠、輸血、移植或注射免疫原性物質(zhì)引起。 不同人群同種免疫的發(fā)生頻率差異很大。 據(jù)報(bào)道，鐮狀細(xì)胞貧血、地中海貧血等長(zhǎng)期輸血的受血者，同種免疫頻率高達(dá)14%～50%，而在一般人群中，同種免疫頻率約為0.5%～1.5%[1-4]。 血型意外抗體的產(chǎn)生除了由紅細(xì)胞暴露引起外，也可通過(guò)暴露于類(lèi)似血型抗原的細(xì)菌或病毒抗原產(chǎn)生；或者是通過(guò)注射免疫球蛋白、藥物治療、輸注獻(xiàn)血者血漿、移植器官或從造血干細(xì)胞中的過(guò)客淋巴細(xì)胞被動(dòng)獲得，在新生兒體內(nèi)的抗體可能來(lái)源于母體。 在進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)前，往往無(wú)法確認(rèn)其是否存在于血液中。

此類(lèi)可與紅細(xì)胞表面抗原反應(yīng)的意外抗體可引起溶血性輸血反應(yīng)(hemolytic transfusion reaction， HTR)、胎兒新生兒溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn， HDFN)、自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia，AIHA)并顯著降低輸入紅細(xì)胞存活率。 基于此，紅細(xì)胞血型意外抗體篩查可輔助診斷某些疾病，并保障輸血的安全性和有效性。

紅細(xì)胞血型意外抗體篩查專(zhuān)家共識(shí)旨在規(guī)范紅細(xì)胞意外抗體篩查細(xì)胞要求及操作規(guī)程，避免具有臨床意義的抗體漏檢，保證抗體篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性，為相關(guān)疾病的診斷和安全輸血提供保障。

3 血型意外抗體篩查現(xiàn)狀

正常ABO 血型中抗-A、抗-B 之外的血型抗體稱(chēng)為意外抗體，也曾被稱(chēng)為不規(guī)則抗體(irregular antibody)。 意外抗體分為2 類(lèi):同種抗體和自身抗體。 同種抗體為自身缺少的抗原所產(chǎn)生的對(duì)應(yīng)抗體，僅與表達(dá)相應(yīng)抗原的異體紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，而自身抗體能與抗體產(chǎn)生者的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。

紅細(xì)胞意外抗體可能導(dǎo)致血型鑒定及配血困難，紅細(xì)胞意外抗體篩查已廣泛應(yīng)用于臨床輸血反應(yīng)的診斷和預(yù)防，是保障輸血安全、有效的重要試驗(yàn)。 我國(guó)已有許多醫(yī)院全面開(kāi)展了意外抗體檢測(cè)。本研究組向86 家全國(guó)代表性三級(jí)甲等醫(yī)院(覆蓋全國(guó)23 個(gè)省市地區(qū)及直轄市)發(fā)放了調(diào)查問(wèn)卷，從返回的結(jié)果來(lái)看，所有的調(diào)查單位均開(kāi)展了血型意外抗體篩查，極少數(shù)單位同時(shí)開(kāi)展了抗體鑒定。

目前，部分國(guó)家和地區(qū)規(guī)定血液中心對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本必須篩查意外抗體，然而我國(guó)有關(guān)法律并未對(duì)其做強(qiáng)制要求。 本研究組向10 家代表性血液中心或血站(回復(fù)問(wèn)卷調(diào)查的血站)發(fā)放了調(diào)查問(wèn)卷，從返回的結(jié)果來(lái)看，所有的調(diào)查單位均開(kāi)展了血型意外抗體篩查及鑒定，但尚未對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本意外抗體進(jìn)行常規(guī)篩查。 據(jù)了解，上海市血液中心和深圳市血液中心對(duì)所有獻(xiàn)血者開(kāi)展了意外抗體篩查。

4 抗體篩查細(xì)胞要求

4.1 組成

用于輸血前抗體篩查的細(xì)胞通常由2 個(gè)或者3個(gè)O 型供者紅細(xì)胞組成。 用于抗體篩查的O 型試劑細(xì)胞應(yīng)排除A 和/或B 亞型、H 缺失型(如孟買(mǎi)型、類(lèi)孟買(mǎi)型)。 英國(guó)血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(British Committee for Standards in Haematology， BCSH)和美國(guó)食品藥物監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration， FDA)對(duì)批準(zhǔn)的商品化抗體篩查試劑紅細(xì)胞做出了要求，即應(yīng)當(dāng)包含以下抗原:D、C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka和Jkb。

4.2 劑量效應(yīng)

由于針對(duì)Rh、MNS、Duffy 和Kidd 系統(tǒng)抗原的抗體常表現(xiàn)出“劑量效應(yīng)”，因此，抗體篩查紅細(xì)胞組宜盡量包含以下抗原雙倍劑量表達(dá)的純合子供者紅細(xì)胞:D、C、E、c、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb。 如果1 個(gè)試劑盒不能完全覆蓋，實(shí)驗(yàn)室可購(gòu)買(mǎi)/儲(chǔ)備不同供應(yīng)商試劑，盡量全部覆蓋。 其中，本地區(qū)或本民族有臨床意義的意外抗體對(duì)應(yīng)抗原應(yīng)為雙倍劑量表達(dá)的純合子。

4.3 配組

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可選擇2 個(gè)或3 個(gè)單一供者的商品化試劑紅細(xì)胞配組進(jìn)行抗體篩查試驗(yàn)。 可根據(jù)本地區(qū)人群抗原分布的特異性選擇相應(yīng)的品牌和型號(hào)，以提高意外抗體檢出率。 使用自動(dòng)化儀器進(jìn)行抗體篩查檢測(cè)時(shí)，儀器平臺(tái)可能會(huì)指定試劑紅細(xì)胞配組。 抗篩試劑紅細(xì)胞不宜使用混合細(xì)胞。 在美國(guó)，僅在檢測(cè)獻(xiàn)血者標(biāo)本時(shí)，可使用來(lái)自2 個(gè)不同供者的混合紅細(xì)胞試劑。

4.4 儲(chǔ)存

試劑細(xì)胞應(yīng)使用細(xì)胞保存液，宜2 ～8℃冷藏保存。 應(yīng)使用保質(zhì)期內(nèi)的試劑紅細(xì)胞用于抗體篩查。試劑紅細(xì)胞要求外觀應(yīng)無(wú)溶血。

4.5 地區(qū)特征

我國(guó)為多民族國(guó)家，其血型抗原有區(qū)別于白種人和黑種人的特點(diǎn)。 例如:Dia抗原在白種人和黑種人中發(fā)生頻率極低，但在黃種人中卻有較高的發(fā)生頻率，在中國(guó)漢族人群中達(dá)10%[5-6]。 Mur 和Mia均屬于MNS 系統(tǒng)抗原。 Mur 抗原在白種人中罕見(jiàn)，而在黃種人中較為常見(jiàn)，尤其在我國(guó)南方地區(qū)頻率較高[7-9]，有報(bào)道顯示抗-Mur 的漏檢可致交叉配血不合[10]。 也有部分國(guó)內(nèi)研究報(bào)道由抗-Mia引起輸血反應(yīng)及HDFN 病。 K 抗原常見(jiàn)于白種人，在我國(guó)的基因頻率較低(除維吾爾族等少數(shù)民族外)，但其免疫原性較強(qiáng)[11]。 因此，篩查細(xì)胞宜根據(jù)本地區(qū)人群血型抗原分布的特點(diǎn)進(jìn)行選擇。

本共識(shí)建議，我國(guó)商品化抗篩細(xì)胞除了BCSH和FDA 要求的必須含有的血型抗原外，宜覆蓋Dia、Mur(或Mia)抗原。 此外，盡管K 抗原基因頻率普遍較低，但我國(guó)新疆等地區(qū)其頻率較高且臨床意義較大，故該地區(qū)抗篩細(xì)胞也宜覆蓋K 抗原。 對(duì)于具有劑量效應(yīng)的Rh、MNS、Duffy 和Kidd 系統(tǒng)的主要抗原，一組抗篩細(xì)胞中宜包含相應(yīng)純合子抗原，至少其中本地區(qū)或本民族有臨床意義的意外抗體對(duì)應(yīng)抗原應(yīng)為純合子。

推薦1:我國(guó)商品化抗篩細(xì)胞應(yīng)至少覆蓋D、C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb、Dia抗原，參考表1。

表1 中國(guó)抗體篩查細(xì)胞覆蓋抗原推薦Table 1 Recommendation of antigen on antibody screening cells for Chinese

推薦2:我國(guó)為多民族分布國(guó)家，不同地區(qū)血型抗原分布頻率不同。 各單位宜根據(jù)本地人群血型抗原分布特點(diǎn)合理選擇抗篩細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)對(duì)血型意外抗體敏感、簡(jiǎn)便的篩查。 血型糖蛋白雜合型比例高的地區(qū)抗篩細(xì)胞宜覆蓋Mur(或Mia)抗原，新疆等地區(qū)宜覆蓋K 抗原。

推薦3:對(duì)于具有劑量效應(yīng)的Rh、MNS、Duffy和Kidd 系統(tǒng)的主要抗原，一組抗篩細(xì)胞中宜包含相應(yīng)純合子抗原，至少其中本地區(qū)或本民族有臨床意義的意外抗體對(duì)應(yīng)抗原應(yīng)為純合子。 避免具有臨床意義的弱反應(yīng)抗體漏檢。

5 抗體篩查試驗(yàn)操作規(guī)程

5.1 試驗(yàn)申請(qǐng)

抗體篩查應(yīng)作為輸血前常規(guī)試驗(yàn)，臨床科室在申請(qǐng)抗體篩查試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)完善患者相關(guān)病史的調(diào)查并在輸血申請(qǐng)單中注明。 重點(diǎn)了解:1)患者輸血史或妊娠史；2)現(xiàn)病史與診斷；3)藥物和生物治療史。

5.2 標(biāo)本

5.2.1標(biāo)本要求

血漿和血清均可用于抗體篩查，應(yīng)根據(jù)檢測(cè)方法或廠家試劑說(shuō)明書(shū)選擇血清或血漿。 一般5 ～10 mL 全血中包含的血清或血漿可滿(mǎn)足抗體篩查及簡(jiǎn)單鑒定特異性抗體的要求。 采集血液標(biāo)本前，應(yīng)注意盡量避免影響血液標(biāo)本質(zhì)量的因素:包括患者的不良生理狀態(tài)(如溶血、菌血等)、使用藥物(如肝素、抗-CD47 或抗-CD38 單克隆藥物等)等[13]。

5.2.2標(biāo)本采集時(shí)間與期限

根據(jù)我國(guó)《輸血相容性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》及美國(guó)血液與生物治療促進(jìn)協(xié)會(huì)(Association for the Advancement of Blood＆ Biotherapies， AABB)的《AABB 技術(shù)手冊(cè)(20 版)》建議，對(duì)于近3 個(gè)月內(nèi)無(wú)輸血史或妊娠史，以及不需要輸血的患者，抗體篩查及鑒定宜使用7 d 內(nèi)采集并于2～8℃儲(chǔ)存的標(biāo)本；對(duì)于有輸血史或妊娠史或既往史不明或無(wú)法獲得的患者，以及需要輸血的患者，抗體篩查及鑒定宜使用3 d 內(nèi)采集的標(biāo)本；對(duì)于3～14 d 內(nèi)有輸血史的人群，抗體篩查及鑒定應(yīng)使用24 h 內(nèi)采集的標(biāo)本。

5.2.3標(biāo)本接收與保存

接收標(biāo)本時(shí)，應(yīng)確認(rèn)患者信息。 接收標(biāo)本后，應(yīng)立即離心，觀察標(biāo)本有無(wú)溶血(自身溶血患者除外)、乳糜、稀釋等異常情況后，方可進(jìn)行下一步檢測(cè)。

5.3 檢測(cè)方法

目前普遍使用的抗體篩查方法均基于紅細(xì)胞凝集反應(yīng)或紅細(xì)胞黏附的原理，主要包括鹽水試管法、抗球蛋白法、凝聚胺法、微柱凝膠法、固相凝集法等。 每一種方法各有優(yōu)點(diǎn):試管法可靈活地運(yùn)用在不同介質(zhì)的檢測(cè)中，可使用多種添加劑從而獲得不同程度的靈敏度，需要的設(shè)備也比較少；微柱凝膠法和固相凝集法穩(wěn)定結(jié)果，主觀判斷少，工作流程標(biāo)準(zhǔn)化，可以整合到半自動(dòng)或全自動(dòng)化系統(tǒng)之中，提供靈敏的檢測(cè)平臺(tái)。 微柱凝膠法、固相凝集法及敏感度高的試管法也可以增強(qiáng)血清學(xué)反應(yīng)性。不同的方法其靈敏度、自動(dòng)化能力及成本不同，為實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行抗體篩查提供了多種選擇。

根據(jù)患者群體的不同需求、實(shí)驗(yàn)室的不同規(guī)模，選擇適宜的檢測(cè)方法進(jìn)行患者紅細(xì)胞抗體篩查，建議應(yīng)包括使用抗球蛋白介質(zhì)的試驗(yàn)方法。 抗球蛋白試驗(yàn)分為直接抗球蛋白試驗(yàn)(direct antiglobulin test，DAT)和間接抗球蛋白試驗(yàn)(indirect antiglobulin test，IAT)。 檢測(cè)血清中的意外抗體最重要的方法之一是IAT，即將待測(cè)血清標(biāo)本加入具有特異抗原的紅細(xì)胞懸液中，使抗原抗體相結(jié)合，在洗滌去除未結(jié)合的血漿蛋白后，再加入抗球蛋白抗體，最終出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。 常規(guī)檢測(cè)時(shí)可不包括自身對(duì)照或DAT。 檢測(cè)結(jié)果中篩檢細(xì)胞全部陽(yáng)性時(shí)應(yīng)加測(cè)自身對(duì)照或DAT。

需要注意的是:抗篩細(xì)胞所包含的血型抗原通常是當(dāng)?shù)厝巳褐校?%的抗原，因此當(dāng)遇到針對(duì)低頻率血型抗原的抗體時(shí)，抗篩試驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)漏檢的情況。 鹽水法只能檢測(cè)到IgM 型抗體，無(wú)法檢測(cè)出具有臨床意義的不完全抗體，因此不能單獨(dú)使用其作為常規(guī)的抗體篩查。 酶處理抗篩細(xì)胞法雖然可以增加對(duì)某些抗原的敏感度，但因?yàn)闀?huì)破壞另一些抗原，也不能作為常規(guī)的抗體篩查方法。 本共識(shí)建議在檢驗(yàn)報(bào)告上注明意外抗體篩查所使用的方法類(lèi)型。

5.4 檢測(cè)試劑

5.4.1添加劑

盡管抗體篩查反應(yīng)體系可以?xún)H由血清(或血漿)和紅細(xì)胞(商品化試劑紅細(xì)胞或生理鹽水配制的紅細(xì)胞懸液)組成，但大多數(shù)檢測(cè)者會(huì)使用添加劑以減少孵育時(shí)間和提高反應(yīng)靈敏度。

常用的幾種添加劑包括:低離子強(qiáng)度鹽溶液(low-ionic-strength saline，LISS)、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)和蛋白酶。 另有增強(qiáng)反應(yīng)技術(shù)可用于復(fù)雜的研究。

5.4.2抗球蛋白試劑

IAT 是抗體篩查最常用的試驗(yàn)之一。 試驗(yàn)中可以使用僅特異性針對(duì)人免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)的抗球蛋白(antiglobulin，AHG)，也可以使用包含抗-IgG 和抗補(bǔ)體C3 的多特異性試劑。 多特異性試劑更容易檢出結(jié)合補(bǔ)體的抗體。參考廠家說(shuō)明書(shū)了解每種試劑性能特點(diǎn)非常重要。

5.4.3質(zhì)控試劑

為確保整個(gè)檢測(cè)的有效性，包括抗體篩查細(xì)胞的抗原表達(dá)，試驗(yàn)中應(yīng)選擇合適的室內(nèi)質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)控。 血清反應(yīng)強(qiáng)度可設(shè)置為±至1＋(至少可以檢出)，如弱抗-D(不低于0.1 IUmL-1)、弱抗-Fya、弱抗-c、弱抗-S。 檢測(cè)頻次為每批次檢測(cè)1 次。

5.5 抗體篩查試驗(yàn)影響因素與解決策略

5.5.1漏檢補(bǔ)體依賴(lài)性抗體

對(duì)于少數(shù)需要補(bǔ)體參與的抗體檢測(cè)方法(如抗球蛋白法檢測(cè)Kidd 血型系抗體)，由于血清中的抗凝劑會(huì)螯合鈣離子，使其不能用于激活補(bǔ)體。 因此推薦使用血清而非血漿進(jìn)行檢測(cè)，或添加新鮮AB型血清作為補(bǔ)體的來(lái)源，可以減少補(bǔ)體依賴(lài)性抗體的漏檢。

5.5.2疾病與藥物干擾

對(duì)于白蛋白/球蛋白比值改變的患者(例如多發(fā)性骨髓瘤患者)，或輸注了高分子量血漿代用品(例如葡聚糖)的患者，其血清可能會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞的非特異性緡錢(qián)狀凝集。 緡錢(qián)狀凝集在微柱凝膠法抗體篩查時(shí)不易察覺(jué)，很容易與抗體介導(dǎo)的真凝集混淆。 要注意區(qū)分真凝集和緡錢(qián)狀凝集，可利用鹽水替代法排除緡錢(qián)狀非特異性凝集的干擾。 此外，靜脈注射免疫球蛋白可能導(dǎo)致Rh 陽(yáng)性患者中存在抗-D 或其他意外抗體。 抗-CD38(達(dá)雷妥尤單抗)與正常紅細(xì)胞(包括抗體篩查和鑒定試劑紅細(xì)胞)上少量CD38 結(jié)合，將導(dǎo)致包含抗球蛋白的血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性。 少數(shù)接受抗-CD38 治療的患者出現(xiàn)DAT 弱陽(yáng)性。 宜使用DTT 等試劑破壞紅細(xì)胞表面CD38 抗原，以排除CD38 對(duì)抗體篩查和交叉配血的干擾。 此外，抗-CD47、抗-CD38 的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，有報(bào)道此類(lèi)藥物也可干擾抗體篩查試驗(yàn)。 CD38 單抗治療的患者其抗體篩查方法建議參考《CD38 單克隆抗體對(duì)輸血相容性檢測(cè)干擾及其應(yīng)對(duì)方案的專(zhuān)家共識(shí)》。

5.5.3自身抗體掩蓋同種抗體

在自身免疫性溶血性貧血等免疫性疾病患者的抗體篩查試驗(yàn)中，同種抗體易被自身抗體掩蓋。本共識(shí)建議采用以下方法去除血漿/血清中自身抗體:1)自身紅細(xì)胞吸收法:患者血漿/血清用先經(jīng)放散至直抗陰性的自身紅細(xì)胞吸收，然后放散，重復(fù)操作至末次自身紅細(xì)胞吸收后直抗陰性，表明血漿/血清中自身抗體已被完全去除。 多次反復(fù)吸收放散，自身紅細(xì)胞會(huì)不斷丟失，所以需要采集較多自身紅細(xì)胞，不適用于貧血嚴(yán)重的患者。 局限性:①只適用于1 個(gè)月內(nèi)無(wú)輸血史者；②類(lèi)同種特異性自身抗體漏檢；③各種放散技術(shù)都會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞不同程度溶血/丟失；④反復(fù)吸收可能導(dǎo)致血漿/血清不同程度稀釋?zhuān)托r(jià)同種抗體漏檢。 2)同種紅細(xì)胞吸收法:采用獻(xiàn)血者紅細(xì)胞反復(fù)吸收放散，操作同自身紅細(xì)胞吸收法。 用于吸收的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞要與患者ABO 血型同型(或O 型)，RhD/C/c/E/e血型相同(或比患者抗原特異性少)，其他有臨床意義的血型系統(tǒng)盡量相同(或比患者抗原特異性類(lèi)少)。 本法適用于貧血嚴(yán)重的患者。 局限性:可能導(dǎo)致供者紅細(xì)胞未覆蓋抗原所對(duì)應(yīng)的抗體漏檢，其余同自身紅細(xì)胞吸收法。 3)稀釋法:把患者血漿/血清倍比稀釋?zhuān)钡脚c1 套抗體鑒定譜細(xì)胞中部分而不是全部細(xì)胞反應(yīng)，表明自身抗體已被稀釋去除，殘留同種抗體，根據(jù)反應(yīng)格局分析同種抗體特異性。 如果稀釋后不出現(xiàn)僅與部分譜細(xì)胞反應(yīng)的格局，抗體篩查就有可能漏檢效價(jià)低于自身抗體的同種抗體。 本法只適用于同種抗體效價(jià)高于自身抗體者。

5.5.4低效價(jià)、低親和力意外抗體

為防止低效價(jià)、低親和力意外抗體篩查漏檢，建議注意以下要點(diǎn):1)控制抗篩細(xì)胞濃度，應(yīng)用試管法檢測(cè)時(shí)試劑細(xì)胞濃度應(yīng)為3%～5%(其他濃度應(yīng)標(biāo)注對(duì)應(yīng)的適用方法)，如果抗體篩查細(xì)胞濃度過(guò)高，抗體效價(jià)低時(shí)，每個(gè)細(xì)胞上黏附的抗體太少，凝集不明顯，容易漏檢；2)加大血清量，提高血清與細(xì)胞的比例至(5～10)∶1；3)增加反應(yīng)強(qiáng)度，采用增強(qiáng)劑如LISS、22%牛血清白蛋白、PEG 等；4)延長(zhǎng)孵育時(shí)間，延長(zhǎng)抗球蛋白試驗(yàn)的保溫孵育時(shí)間至60 min；5)多種試驗(yàn)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，采用吸收、放散技術(shù)濃縮抗體。

5.5.5唯酶抗體

一些抗體如Rh 系統(tǒng)的抗-E、抗-e 只有在木瓜酶或菠蘿酶等介質(zhì)中或這些酶和抗球蛋白聯(lián)合檢測(cè)才能檢測(cè)到，稱(chēng)之為“唯酶抗體”。 這些抗體多無(wú)臨床意義，但也有發(fā)生輸血反應(yīng)的報(bào)道。 為防止漏檢唯酶意外抗體，對(duì)于AHG 陰性而輸血無(wú)效或發(fā)生溶血反應(yīng)的患者要增加酶-AHG 方法的抗體篩查。

6 抗體篩查試驗(yàn)結(jié)果分析

6.1 抗體篩查結(jié)果判讀

任何抗體篩查試驗(yàn)中出現(xiàn)的凝集或溶血現(xiàn)象都被判定為陽(yáng)性結(jié)果，表明需進(jìn)行抗體鑒定。 抗體篩查結(jié)果可以為抗體鑒定提供線(xiàn)索及方向。 抗體篩查結(jié)果判定應(yīng)該考慮以下幾個(gè)問(wèn)題:1)反應(yīng)介質(zhì):IgM 類(lèi)抗體發(fā)生反應(yīng)的最適溫度為室溫或更低，在鹽水介質(zhì)中可引起紅細(xì)胞(立即離心)凝集，而IgG 類(lèi)抗體在抗球蛋白試驗(yàn)階段反應(yīng)最佳。 在常見(jiàn)的抗體中，抗-N、抗-I 和抗-P1 通常是IgM，而那些針對(duì)Rh、Kell、Kidd、Duffy 血型系統(tǒng)抗原和S、s抗原的抗體一般是IgG 抗體。 針對(duì)Lewis 系統(tǒng)和M抗原的抗體可以是IgG 抗體、IgM 抗體或2 者的混合物。 2)自身對(duì)照:自身對(duì)照是采用與抗體篩查檢測(cè)相同的方式，用患者紅細(xì)胞檢測(cè)患者的血清或血漿。 抗篩陽(yáng)性并且自身對(duì)照陰性，則表明檢測(cè)到同種抗體。 自身對(duì)照陽(yáng)性可能表明存在自身抗體或藥物抗體。 如果患者近3 個(gè)月內(nèi)有輸血史，自身對(duì)照陽(yáng)性也可能是由同種抗體結(jié)合供者紅細(xì)胞而引起的。 3)溶血:某些抗體，如抗-Lea、抗-Leb、抗-PP1Pk和抗-Vel，會(huì)導(dǎo)致體外溶血。 4)混合凝集外觀。 混合凝集外觀通常與抗-Sda和Lutheran 抗體有關(guān)。

6.2 抗體篩查結(jié)果解釋

6.2.1DAT 陰性、3 個(gè)抗體篩查細(xì)胞均陰性

判定無(wú)游離自身抗體，無(wú)同種抗體。 某些情況下，抗體篩查陰性并不能完全保證血清或者血漿中不存在具有臨床意義的紅細(xì)胞抗體，需要注意以下問(wèn)題:1)抗體篩查細(xì)胞抗原覆蓋面太窄或某些抗原不互補(bǔ)，會(huì)漏檢某些意外抗體；2)抗體篩查細(xì)胞的某些抗原如為雜合子，可能漏檢對(duì)應(yīng)的低效價(jià)意外抗體；3)試驗(yàn)方法不敏感，可能漏檢弱抗體；4)試驗(yàn)中未使用增強(qiáng)技術(shù)，可能漏檢弱抗體；5)使用O 型抗篩細(xì)胞，漏檢ABO 亞型抗體；6)常規(guī)方法檢測(cè)不到的抗體；7)如果抗體篩查試驗(yàn)在25℃操作，可能漏檢37℃反應(yīng)型抗體；8)漏檢早期產(chǎn)生的抗體:其原因，一是自身抗體初次產(chǎn)生后14～21 d 只有在自身紅細(xì)胞放散液中才能被檢測(cè)到，而血清中檢測(cè)不到，二是因?yàn)樵缙?0%患者的意外抗體篩查只有用兩步酶法和凝聚胺法能查到，抗球蛋白法可漏檢；9)漏檢Rh 系統(tǒng)的“唯酶抗體”，抗體篩查一般不用酶法，可能會(huì)導(dǎo)致此類(lèi)抗體漏檢；10)抗體較弱或其它原因，導(dǎo)致無(wú)法檢出。 有文獻(xiàn)報(bào)告，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，患者血漿中具有臨床意義的意外抗體效價(jià)逐漸降低，甚至無(wú)法檢出，1 年內(nèi)有36%、10 年后有近70%的抗體降至無(wú)法檢出的水平[14]。 因此，許多國(guó)家如荷蘭、法國(guó)、德國(guó)和美國(guó)已建立起國(guó)家或地區(qū)范圍的患者意外抗體篩查試驗(yàn)歷史檔案數(shù)據(jù)庫(kù)，以有效降低與輸血相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。

6.2.2DAT 陰性，3 個(gè)抗體篩查細(xì)胞中1～2 個(gè)陽(yáng)性

判定無(wú)游離自身抗體，有1 種或多種同種抗體，或是1 個(gè)以上的篩查細(xì)胞同時(shí)具有單個(gè)抗體的靶抗原，也可能患者血清中含有特異性自身抗體。需要做抗體鑒定來(lái)進(jìn)一步確定有臨床意義的抗體及特異性。

6.2.33 個(gè)抗篩細(xì)胞均陽(yáng)性

有4 種情況可導(dǎo)致3 個(gè)抗篩細(xì)胞均陽(yáng)性:1)存在游離自身抗體；2)自身抗體掩蓋同種抗體；3)存在高頻抗體，需要去除患者血漿/血清自身抗體干擾以后再作抗篩。 再次抗篩陰性，判定有游離自身抗體，無(wú)同種抗體。 再次抗篩3 個(gè)抗篩細(xì)胞有陰性也有陽(yáng)性，判定有游離自身抗體和同種抗體。 再次抗篩3 個(gè)抗篩細(xì)胞均陽(yáng)性，不排除高頻抗體的可能，需送參比實(shí)驗(yàn)室鑒定；4)3 個(gè)抗篩細(xì)胞均陽(yáng)性，自身對(duì)照陰性，存在1 種或多種同種抗體可能性。此外還需要排除洗滌前細(xì)胞凝集、離心力太大等原因?qū)е碌目骨虻鞍自囼?yàn)抗篩結(jié)果假陽(yáng)性。

排除抗體篩查細(xì)胞的非特異性凝集:1)血漿(血清)蛋白紊亂所致抗體篩查細(xì)胞的非特異性凝集。 排除方法:加鹽水稀釋?zhuān)㈤_(kāi)。 2)冷凝集素所致非特異性凝集。 排除方法:規(guī)范步驟，加溫到37℃操作，可排除大部分冷凝集素干擾。 3)針對(duì)試劑紅細(xì)胞介質(zhì)的抗體較為罕見(jiàn)，宜更換試劑。

6.2.4抗體特異性判定

含意外抗體者宜進(jìn)一步用抗體鑒定譜細(xì)胞作抗體特異性鑒定，必要時(shí)檢測(cè)抗體效價(jià)。

7 抗體篩查試驗(yàn)臨床意義

2022 年我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布了中國(guó)人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《輸血相容性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》(WS/T 794—2022)，其第4.3.2.2 條“申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞成分的檢測(cè)項(xiàng)目”規(guī)定，在申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞成分之前，應(yīng)對(duì)受血者進(jìn)行抗體篩查檢測(cè)，必要時(shí)加做獻(xiàn)血者抗體篩查；《AABB 技術(shù)手冊(cè)(20 版)》提出，在輸注全血、紅細(xì)胞、粒細(xì)胞前必須做意外抗體篩查。 抗體篩查試驗(yàn)對(duì)于指導(dǎo)相容性輸血，確保臨床安全有效具有重要的臨床意義。

原衛(wèi)生部《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》第十七條規(guī)定，短期內(nèi)需要接收多次輸血者必須按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)程作抗體篩查試驗(yàn)。 對(duì)于多次進(jìn)行輸血治療的患者，前幾次輸血可能由于意外抗體水平低于目前常用方法的檢測(cè)低限而未能檢出，但由于輸入了紅細(xì)胞抗原，導(dǎo)致“回憶反應(yīng)”而使意外抗體效價(jià)迅速升高。 因此，我們建議對(duì)于住院期間多次輸血治療的患者，進(jìn)行意外抗體篩查試驗(yàn)復(fù)查，以確保臨床用血安全。 對(duì)于意外抗體篩查試驗(yàn)復(fù)查的時(shí)機(jī)，2022 年我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《輸血相容性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》(WS/T 794—2022)中5.4.3.4 條及5.4.3.5 條規(guī)定，已知患者存在意外抗體時(shí)，超過(guò)24 h 再次輸血時(shí)需重新采集血液標(biāo)本進(jìn)行抗體篩查，排除新的意外抗體。 而對(duì)于多次輸血未產(chǎn)生抗體的患者，抗體篩查間隔可不小于3 d。

圖1 抗體篩查結(jié)果分析及處理辦法Figure 1 Analysis and processing methods of antibody screening

抗體篩查與交叉配血都可發(fā)現(xiàn)血型抗體，抗體篩查陰性只能說(shuō)明，經(jīng)所采用的3 個(gè)抗體篩查細(xì)胞或技術(shù)檢測(cè)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)標(biāo)本含有抗體。 不能因抗體篩查檢測(cè)陰性，而對(duì)微柱凝集法交叉配血中的弱凝集不重視。 一方面，當(dāng)抗體篩查陰性而交叉配血陽(yáng)性時(shí)，可能存在以下情況:1)ABO 血型不相符的供者進(jìn)行交叉配血。 交叉配血是陽(yáng)性的，抗體篩查(O 型細(xì)胞)為陰性。 2)供體細(xì)胞是A 或B 亞型，但在分型時(shí)未檢測(cè)出，未使用抗-A，B 做供者篩查，因此而被鑒定為O 型供者。 此類(lèi)錯(cuò)誤鑒定為O 型的供者與抗篩陰性的O 型患者交叉配血可為陽(yáng)性。3)異體輸血、RhD 免疫球蛋白的使用或單抗藥物治療等被動(dòng)獲得ABO 抗體，可使后續(xù)交叉配血呈陽(yáng)性。 4)交叉配血細(xì)胞含有抗體篩查細(xì)胞上不存在的抗原。 5)抗體篩查細(xì)胞表達(dá)單倍劑量抗原，而交叉配血細(xì)胞表達(dá)雙倍劑量抗原。 6)紅細(xì)胞的壽命可影響凝集或溶血。 一些紅細(xì)胞抗原強(qiáng)度隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)而減少，影響弱抗體檢測(cè)。 另一方面，當(dāng)抗體篩查陽(yáng)性而交叉配血陰性時(shí)，可能存在以下情況:1)抗體篩查細(xì)胞為雙劑量但交叉配血細(xì)胞為單劑量時(shí)，劑量效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致交叉配血漏檢意外抗體；2)篩查細(xì)胞上存在低流行率或中等流行率的抗原如Lua、Ytb和Cob等時(shí)，可呈抗體篩查陽(yáng)性而交叉配血陰性。

推薦4:在申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞成分之前，應(yīng)對(duì)受血者進(jìn)行抗體篩查檢測(cè)，必要時(shí)加做獻(xiàn)血者抗體篩查。

推薦5:對(duì)于住院期間多次輸血治療的患者，宜進(jìn)行意外抗體篩查試驗(yàn)復(fù)查，以確保臨床用血安全。

推薦6:供血機(jī)構(gòu)宜提供抗體篩查陰性的血漿類(lèi)血液成分，若無(wú)條件提供時(shí)，醫(yī)療機(jī)構(gòu)用血前應(yīng)加做獻(xiàn)血者抗體篩查試驗(yàn)，選擇抗篩陰性的血漿類(lèi)制品同型輸注。

本共識(shí)起草人(按姓氏首字母排序):高宏軍(南京醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)健委抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)、胡雪(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)、黃雪原(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院)、蘭炯采(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院)、劉鐵梅(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院)、王玨(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院輸血研究所)、魏亞明(廣州市第一人民醫(yī)院)、張德梅(山西省血液中心)。

所有專(zhuān)家均為本共識(shí)第一作者(按姓氏首字母排序):卞茂紅(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)、蔡曉紅(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院)、曹榮祎(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)、常洪勁(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院)、陳進(jìn)凡(甘肅省中醫(yī)院)、陳偉(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院)、桂霞(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院)、何雪琴(重慶市黔江區(qū)中醫(yī)院)、居敏(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)、黎海瀾[廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院(廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)院)]、李彩霞(麗水市人民醫(yī)院)、李菲(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院)、李玲(西南交通大學(xué)附屬醫(yī)院/成都市第三人民醫(yī)院)、劉春霞(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院)、劉峰(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)、劉久波[湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院(十堰市太和醫(yī)院)]、呂小英[復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院(廈門(mén))]、呂毅(河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院)、毛偉(重慶市血液中心)、年青(四川省人民醫(yī)院)、喬姝(內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)、邵峰(寧夏回族自治區(qū)血液中心)、施麗(伊犁哈薩克自治州友誼醫(yī)院)、石海燕(淄博市第一醫(yī)院)、孫國(guó)棟(邯鄲市中心血站)、田英(南方醫(yī)科大學(xué)順德醫(yī)院)、汪輝(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院)、王曉寧(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院)、吳昌松(黔南布依族苗族自治州人民醫(yī)院)、吳燕(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)、武楊屏(云南省阜外心血管病醫(yī)院)、謝作聽(tīng)(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)、邢志勇(武威市中心血站)、許志遠(yuǎn)(北京市紅十字血液中心)、楊賀才(河南省紅十字血液中心)、楊江存(陜西省人民醫(yī)院)、楊眉(貴州省人民醫(yī)院)、尹文(中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院)、張嬋(云南省第一人民醫(yī)院)、張娟(重慶市中醫(yī)院)、張琦(復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院)、張雪睿(北海市人民醫(yī)院)、趙麗艷(吉林大學(xué)第二醫(yī)院)、趙燕(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院)、周世喬(南方醫(yī)科大學(xué)深圳臨床醫(yī)學(xué)院)、朱培元(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京中醫(yī)院)。