王繼耀,李兆新,邢麗紅,孫曉杰,王淑文,李淑勤

(1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價重點實驗室,中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所,山東青島 266071;2.青島科技大學(xué),海洋科學(xué)與生物工程學(xué)院,山東青島 266042)

食品安全問題是關(guān)系國計民生的重要問題。在影響食品安全的諸多因素之中,農(nóng)藥殘留問題對安全性的影響越來越大,農(nóng)藥殘留污染問題也漸漸引起了人民群眾的關(guān)注和重視。氯芬新是一種苯甲酰脲類殺蟲劑,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的應(yīng)用越來越多,其殘留可以通過食物鏈或環(huán)境傳遞給人畜,人們長期食用受污染的食品會造成其在人體當(dāng)中的積累,對人體造成不良影響。針對氯芬新的檢測方法主要是在植物源性基質(zhì)中,動物基質(zhì)涉及較少。目前世界各國針對各類食品都設(shè)置了嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn),不僅增加了需要檢測的農(nóng)藥種類,也降低了農(nóng)藥在食品基質(zhì)中的最大殘留量,并針對農(nóng)藥殘留設(shè)置貿(mào)易壁壘。

1 氯芬新藥物性質(zhì)

氯芬新(lufenuron),也稱氟丙氧脲、虱螨脲、氯芬奴隆,化學(xué)名為1-[2,5-二氯-4-(1,1,2,3,3,3-六氟丙氧基)苯基]-3-(2,6-二氟苯甲?；?脲,是一種苯甲酰脲類殺蟲劑。20世紀(jì)80年代中期被瑞士西巴蓋吉公司發(fā)現(xiàn),90年代禮藍(lán)動保(Elanco Animal Health)首先將其用于狗的跳蚤防治,之后先正達(dá)(Syngenta)將其作為作物殺蟲劑[1]。氯芬新適用于防治對擬除蟲菊酯和有機(jī)磷類殺蟲劑產(chǎn)生抗性的害蟲以及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的魚虱病[2]。原藥為白色的結(jié)晶體,無味,蒸汽壓在常溫下小于4×10-6Pa,在溫度為25 ℃時難溶于水,易溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇等,在光照下、空氣中都具有穩(wěn)定性[3]。氯芬新是甲殼素合成途徑中一個尚未確定步驟的抑制物,其選擇性是通過干擾新合成的角質(zhì)層中甲殼素的沉積來擾亂昆蟲關(guān)鍵發(fā)育階段的蛻皮過程[4-5],致其死亡,相對于其他殺蟲劑具有殺蟲率高、殺蟲譜寬等特點,被廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品病蟲害的防治。干擾甲殼素的合成途徑是氯芬新作為昆蟲特異性殺蟲劑起作用的一個極具吸引力的特點[6]。由于甲殼素在脊椎動物和高等植物中完全不存在,氯芬新對于人類和其他哺乳動物屬于低毒性。但隨其作為殺蟲劑大量消耗,氯芬新殘留會進(jìn)入食物鏈以及衍生產(chǎn)品(如果汁)和環(huán)境(如土壤、水),從而造成食品污染和對水生生物產(chǎn)生毒性作用,通過慢性接觸和長期毒性影響對人類健康產(chǎn)生危害[7]。

2 氯芬新在生產(chǎn)中的應(yīng)用

2.1 氯芬新在農(nóng)作物種植業(yè)中的應(yīng)用 氯芬新,在農(nóng)業(yè)應(yīng)用上主要稱其為虱螨脲,它具有廣譜、高效、量小以及作用方式多、使用方便、半衰期短等優(yōu)點,因此,在玉米、甘藍(lán)、柑橘、棉花、馬鈴薯、葡萄、大豆等水果、蔬菜和糧食的病蟲害防治得到廣泛應(yīng)用,常用于防治刺吸式口器害蟲,對益蟲的成蟲和捕食性蜘蛛作用溫和[8]。

在已有文獻(xiàn)報道中,許多菌株和農(nóng)業(yè)害蟲的田間種群中都出現(xiàn)了對包括有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯和合成擬除蟲菊酯在內(nèi)的多種殺蟲劑的抗藥性,而氯芬新則對這些害蟲具有很好的殺蟲效果,可作為其他殺蟲劑的替代品。付玉亮等[9]進(jìn)行了田間試驗,采用1%虱螨脲顆粒劑研究對韭菜韭蛆的防治效果,結(jié)果表明藥劑處理對韭菜不產(chǎn)生藥害,對韭蛆的防蟲效果顯著。張小亞[10]通過喂食柑橘小實蠅含有不同濃度虱螨脲的食料,測定其對橘小實蠅的不育效果,達(dá)到對這種害蟲的防治效果。林少源等[11]進(jìn)行試驗推薦使用50 g/L 虱螨脲乳油進(jìn)行廣東草地貪夜蛾幼蟲的生物防治,在其他文獻(xiàn)里也對此有所驗證,氯芬新對草地夜蛾表現(xiàn)出較高的毒性,可有效殺滅害蟲[12]。

氯芬新作為殺蟲劑廣泛用于農(nóng)業(yè),然而,農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用中的氯芬新藥物在施用過程中可以通過農(nóng)業(yè)徑流、地表滲透和循環(huán)廢水等途徑進(jìn)入水生生態(tài)系統(tǒng)[13],氯芬新不僅污染養(yǎng)殖水體對水生環(huán)境構(gòu)成風(fēng)險進(jìn)而影響水體生物的生長發(fā)育,造成水產(chǎn)品質(zhì)量安全隱患,對水生無脊椎動物和蝦、螃蟹等甲殼動物表現(xiàn)出高毒性,還會導(dǎo)致對人類的慢性接觸和長期毒性效應(yīng)[14],危害消費者健康。

2.2 氯芬新在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用 氯芬新因其急性毒性低、生物活性好和其獨特的作用機(jī)制而被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖實踐生產(chǎn)中用于殺菌除虱。魚虱是一種寄生于海水和淡水魚的甲殼動物。此外,魚虱也是傳播其他魚類疾病的媒介。魚虱的抗藥性是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的一個嚴(yán)重問題,如果不加以處理,魚虱大量寄生在魚體,引起魚體糜爛、損傷、出血,嚴(yán)重的感染會導(dǎo)致顯著的發(fā)病率和死亡率,將導(dǎo)致大量魚類損失[15]。氯芬新在智利作為獸藥擁有銷售許可,可用于鮭魚。Elanco公司在2016年開發(fā)了一種含有氯芬新的飼料處理方法,通過藥物飼料口服給藥的方式在轉(zhuǎn)移鮭魚前使用,并為鮭魚提供長期的保護(hù),使其免受海虱侵害[16]。在加拿大和挪威等國家,氯芬新還被批準(zhǔn)用于臨床研究,用于給魚喂食藥物飼料。氯芬新對魚虱的防治效果,在錦鯉中也有報告,J?rg Mayer等[17]采用濃度約為0.1 mg/L的氯芬新治療池塘中錦鯉的魚虱病,每周處理一次連續(xù)5周,在后續(xù)13個月的監(jiān)測中在水生環(huán)境中未再檢出致病菌屬。此外,也有研究通過每2周向給水系統(tǒng)施加氯芬新,有效地控制了海龜寄生蟲感染[18]。

3 氯芬新在食品中的最大殘留量

隨著生活水平的提高,人們對健康和環(huán)境的重視使得藥物殘留問題日益成為人民關(guān)注的焦點。世界各國政府和一些國際組織也針對藥物殘留實施嚴(yán)格的監(jiān)控。氯芬新是苯甲酰脲類農(nóng)藥中銷售額最大的品種,銷售額逐年增加,所以對氯芬新在農(nóng)產(chǎn)品及環(huán)境中的殘留檢測也越來越被大家所關(guān)注,多個國家和組織制定了氯芬新在不同食品中的最高殘留限量(MRL)。

《GB 2763-2021食品中農(nóng)藥最大殘留限量》作為現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn),僅針對部分食品基質(zhì)給出了限量值?！禛B31650.1-2022食品中41種獸藥最大殘留限量》規(guī)定了氯芬新在鮭魚和鱒魚中的最大殘留限量為1350 μg/kg,其他動物源性食品中的最大殘留限量則未涉及。我國國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定氯芬新在大豆中的最大殘留限量為0.01 mg/kg,韭菜和番茄中的最大殘留限量為3 mg/kg,在蘋果中的最大殘留限量為1 mg/kg[19]。2014年歐盟獸用藥品委員會發(fā)布(EU) No 967/2014制定氯芬新在鮭科魚類和鰭魚類中氯芬新的最大殘留限量,限量值為1.35 mg/kg。智利在2015年發(fā)布G/SPS/N/CHL/513通報,制定鮭魚中氯芬新最大殘留限量為1.35 mg/kg。2020年歐盟食品安全局(EFSA)規(guī)定在牛的肌肉、脂肪、肝臟、腎臟中的最高殘留限量為0.02 mg/kg,對于果蔬的最大殘留限量設(shè)定歐盟規(guī)定在0.01～0.8 mg/kg[20]。日本列表規(guī)定其在豬牛雞肉中的MRL為0.1 mg/kg,在甘藍(lán)番茄中為0.5 mg/kg,在柑橘類中為0.3 mg/kg。西班牙政府確定在蔬菜中的最大殘留限量為0.01～0.5 mg/kg[21]。此外,在韓國氯芬新在葉類蔬菜上的最大殘留限量分別為5 mg/kg[22]。部分殘留限量見表1。

表1 不同國家、地區(qū)或國際組織對氯芬新在部分食品中的殘留限量規(guī)定Tab 1 Residue limits for lufenuron in some foods in different countries, regions or international organizations

我國氯芬新在大部分蔬菜水果中的定量限要低于歐盟和其他國家規(guī)定限量值,且設(shè)置規(guī)定的食品種類比較單一,但是也有的設(shè)定值要高于其他國家。

4 食品中氯芬新殘留檢測的前處理方法

樣品前處理是指將樣品進(jìn)行處理提取被測物質(zhì),以便進(jìn)行檢測的過程。實驗所用的樣本基質(zhì)復(fù)雜多樣,不能直接進(jìn)行儀器分析檢測,進(jìn)行樣品前處理操作可防止樣品對儀器性能和靈敏度造成干擾。選擇合適的樣品前處理方法,對確保檢測結(jié)果精準(zhǔn)有效具有重要意義。傳統(tǒng)的樣品前處理方法有液液萃取(LLE)、索氏提取(SE)等,但是這些傳統(tǒng)方法存在操作繁瑣,耗時長,選擇性較差和消耗有機(jī)溶劑多等缺點。目前食品中藥物殘留檢測中常用的樣品前處理技術(shù)主要有固相萃取技術(shù)(SPE)、分散固相萃取(DSPE)、基質(zhì)固相分散處理技術(shù)(MSPD)、微波輔助萃取技術(shù)(MAE)、凝膠滲透色譜技術(shù)(GPC)和超臨界流體萃取(SFE)等,這些技術(shù)都能高效、快速地對樣品進(jìn)行前處理操作。因為氯芬新殘留檢測中主要采用基于固相吸附的萃取方法,本文對以下幾種固相技術(shù)進(jìn)行介紹。

4.1 固相萃取技術(shù) 固相萃取(Solid Phase Extraction, SPE)是利用固體吸附劑的吸附原理,使其與樣品基質(zhì)以及干擾物分離,再進(jìn)行洗脫。固相萃取不需要使用大量有機(jī)溶劑,具有操作簡單、回收率高、分離效果好,不產(chǎn)生乳化現(xiàn)象等優(yōu)點,但是該方法樣品處理時間較長,固定相選擇性不高,復(fù)雜樣品會堵塞固定相的微孔結(jié)構(gòu),進(jìn)而導(dǎo)致回收率的降低。目前,基于吸附原理的固相萃取技術(shù)在氯芬新殘留檢測中應(yīng)用較為廣泛。

張聰?shù)萚23]采用石墨化碳/氨基固相萃取柱對茶葉樣品中的氯芬新等6種農(nóng)藥殘留進(jìn)行凈化,加樣前先用5 mL乙腈-甲苯溶液預(yù)洗柱,準(zhǔn)確移取1 mL樣品提取液轉(zhuǎn)移至固相小柱上,25 mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液進(jìn)行洗脫,結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測。

4.2 基質(zhì)分散固相萃取 基質(zhì)固相分散(Matrix solid phase dispersion,MSPD)技術(shù)與傳統(tǒng)的固相萃取不同,基質(zhì)固相分散是將樣品基質(zhì)與萃取材料一起研磨混合,使樣品分散在萃取劑表面,然后將混合物裝柱再進(jìn)行淋洗?；|(zhì)固相分散技術(shù)可將樣品均質(zhì)、提取、清理同時進(jìn)行,縮減了離心、過濾等多個過程,具有操作簡單、萃取效率高等優(yōu)勢,但可供選擇的吸附劑種類較少,且吸附劑的潛在高成本限制了可用于MSPD的樣品大小,因此對樣品代表性和均質(zhì)性有一定影響。

Luis Fabri′cio等[24]采用基質(zhì)固相分散的萃取方法檢測椰子水中的氯芬新殘留。將凍干的椰子水放入玻璃砂漿中,再加入C18粘結(jié)二氧化硅,使溶液滲透到基質(zhì)中混合均勻再進(jìn)行洗脫。

4.3 分散固相萃取 分散固相萃取(Dispersive solid phase extraction,DSPE)也稱為QuEChERS法(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe),該方法具有快速、簡單、便宜、有效、可靠和安全的特點。樣品經(jīng)由乙腈提取,經(jīng)氯化鈉、無水硫酸鎂無水硫酸鈉等鹽析分層,再采用C18、PSA等吸附劑進(jìn)行凈化處理。QuEChERS法已被應(yīng)廣泛應(yīng)用、修改并用于驗證各種基質(zhì)和目標(biāo)化合物的檢測中。方法可減少樣品處理步驟,提高了農(nóng)獸藥殘留分析的精密度和準(zhǔn)確度。但QuEChERS法也存在污染儀器,重復(fù)性較差的問題。分散固相萃取在某些方面類似于基質(zhì)固相分散 (MSPD),但吸附劑不是像MSPD中那樣添加到原始樣品中,而是被添加到一小份基質(zhì)中。

Li Kailong等[25]采用QuEChERS法結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS/MS)對金桔及其加工產(chǎn)品中氯芬新的殘留量進(jìn)行測定。加樣回收率為82.3 ～ 102.8%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1 ～ 9.4%。Cheng Xi等[26]采用改良的QuEChERS法結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 (UPLC-MS/MS)對使用納米微乳劑(NM)和商業(yè)配方茚蟲威和氯芬新的進(jìn)行田間試驗玉米作物進(jìn)行樣品分析。Ahmed Gotah等[27]建立了用QuEChERS方法分析卷心菜中氯芬新的方法,可以節(jié)省時間和材料。取均質(zhì)混勻的卷心菜勻漿10 g,用10 mL乙腈提取,添加4 g的無水MgSO4和1 g氯化鈉分散固相萃取,150 mg PSA,50 mg GCB,600 mg MgSO4凈化,采用反相高效液相色譜-紫外法進(jìn)行分離定量。

4.4 磁性固相萃取 磁性固相萃取(Magnetic solid phase extraction, MSPE)作為新興的固相萃取方式,在樣品前處理中越來越受到重視。磁性吸附劑作為樣品前處理的新一代材料,通過外部增加磁場或者使用磁鐵等方式可以很容易地收集,取代傳統(tǒng)分散固相萃取中的離心等工藝[28]。研究表明所合成的磁吸附劑可通過包括離子交換、氫鍵和疏水作用在內(nèi)的多重作用力實現(xiàn)對氯芬新等苯甲酰脲類化合物的有效萃取。磁性固相萃取具有操作簡單、回收率高、分離效果好等優(yōu)點,但是該方法中吸附介質(zhì)的作用和性質(zhì)影響著萃取程度和分析物回收率,存在高選擇性吸附介質(zhì)選擇性不高,樣品合成材料較為繁雜等短板。

張詠等[29]以甲基丙烯酸(Methacrylic acid,MA)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(Ethylene dimethacrylate,ED)對Fe3O4磁性納米粒子進(jìn)行改性得到Fe3O4@MAED,同時結(jié)合HPLC-DAD,建立了可用于環(huán)境水樣和果汁中痕量氯芬新等苯甲酰脲類殺蟲劑殘留測定的高效、靈敏的分析方法。在最佳實驗條件下,對于水樣和果汁樣品,氯芬新殘留的檢出限分別為0.18和0.30 μg/L,定量限為0.60和0.97 μg/L。Liu Chaoran等[30]以Fe3O4-支化聚酯納米復(fù)合材料為吸附劑,建立了高效液相色譜法分析茶葉樣品中氯芬新等四種苯甲酰脲類殺蟲劑的方法。將制備好的納米復(fù)合材料作為吸附劑用于茶葉樣品中農(nóng)藥殘留的提取和預(yù)濃縮。在所選擇的最終分析條件下,所有被測化合物具有良好的線性關(guān)系,R2值至少為0.9979。其中氯芬新殺蟲劑的檢出限為0.15 μg/L,定量限為0.5 μg/L。不同加標(biāo)濃度茶葉樣品的加標(biāo)回收率在90.7%～98.4%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=4)小于4.1%。表2為氯芬新殘留檢測的幾種常見前處理方法。

表2 氯芬新殘留檢測的前處理方法Tab 2 Pre-treatment methods for lufenuron residue detection

5 食品中氯芬新殘留的檢測方法

氯芬新施用后,農(nóng)藥殘留可能會殘留在作物中,并因其毒性而構(gòu)成健康風(fēng)險。因此,從消費者安全的角度來看,對其農(nóng)藥殘留的監(jiān)控尤為重要。目前,國內(nèi)外對氯芬新殘留的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)等手段,相關(guān)研究主要集中在蔬菜、水果、糧食和水體中。已有的文獻(xiàn)報道中對氯芬新藥物殘留分析涉及的基質(zhì)主要是植物源性食品,對于動物源性食品中的殘留報道較少。

5.1 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法 傳統(tǒng)上農(nóng)藥殘留的監(jiān)測是基于氣相色譜和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法的檢測方法。然而,許多新的極性和離子型農(nóng)藥由于揮發(fā)性,不能直接用方法進(jìn)行測定。有研究表明氯芬新的熱穩(wěn)定性差,其酰胺鍵在高溫下會發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化[31],因此采用氣相色譜法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測氯芬新殘留的報道較少。

Maria Silva等[32]建立了一種基于的基質(zhì)固相分散(MSPD)的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)法測定椰子中氯芬新、馬拉硫磷、噻苯咪唑等農(nóng)藥的方法。該方法以1.0 g C18和1.0 g 弗羅里硅土作為吸附劑、正己烷飽和乙腈作為洗脫溶劑,得到了最佳效果。結(jié)果表明,椰子果肉的檢測和定量限分別為0.11 mg/kg和0.25 mg/kg。但是氯芬新的加樣回收率為47.2%,回收率的值較低可歸因于氯芬新具有較高的脂溶性可與親脂性基質(zhì)的部分結(jié)合,而氯芬新的高Kow(辛醇/水分配系數(shù))值為105.12支持了這種可能性。

5.2 液相色譜法 液相色譜法是在氣相色譜基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種分析方法,作為一種分析手段,其應(yīng)用范圍已相當(dāng)廣泛。它的流動相通常為甲醇、乙腈、水、緩沖鹽溶液等。液相色譜法比較常見于極性強(qiáng)、分子量大和熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥殘留檢測,通常結(jié)合紫外檢測器、二極管陣列或熒光檢測器使用。

高效液相色譜法在以往的氯芬新殘留檢測中得到了廣泛的應(yīng)用。占繡萍[33]、鄧小嵐[34]等都采用高效液相色譜建立了檢測蔬菜中氯芬新殘留的方法。張詠等[35]制備了聚(3-丙烯酰胺苯硼酸-二乙烯基苯)多孔硼親和整體材料作為萃取介質(zhì),與二極管陣列檢測器聯(lián)用建立檢測果汁樣品中氯芬新殘留的測定方法。唐慶強(qiáng)等[36]建立用高效液相色譜法測定果蔬中氯芬新殘留的檢測方法,當(dāng)添加濃度為0.05～0.2 mg/kg時三個水平濃度的添加回收率為70.6%～100.5%,精密度為5.5%～8.2%,方法的檢測限為0.03 mg/kg。很多新技術(shù)與新材料在方法建立中也得到應(yīng)用。Huazi Wang等[14]采用一種新的樣品制備技術(shù)即新型注射器內(nèi)分散式液-液微萃取法與高效液相色譜-紫外檢測器相結(jié)合,對茶飲料樣品中的氯芬新殘留進(jìn)行檢測。Mingxin Niu等[37]基于合成的金屬有機(jī)框架材料,將其作為吸附劑結(jié)合高效液相色譜用于茶水中氯芬新的測定。Meng Mei等[38]制備了聚(甲基丙烯酸-二甲基丙烯酸乙二酯)柱,與高效液相色譜-二極管陣列檢測相結(jié)合,建立了一種測定果汁中氯芬新殘留的方法,方法的檢出限為0.28 μg/L,定量限為0.94 μg/L。Yeqing Jia等[39]合成了一種新型磁性金屬有機(jī)骨架化合物(Fe3O4@MOF-808),并將其應(yīng)用于茶葉飲料和果汁樣品中氯芬新殘留的磁性固相萃取。與高效液相色譜聯(lián)用,氯芬新在茶葉飲料中的檢出限為0.05 ng/mL,定量限為0.17 ng/mL;在果汁中的檢出限為0.08 ng/mL,定量限為0.30 ng/mL。郭長英等[40]建立了測定蘋果和土壤中氯芬新殘留的超高效液相色譜分析方法,方法的檢出限為0. 01 mg/kg。張月等[41]建立了柑橘中氯芬新測定的超高效液相色譜分析方法,檢測限為0.05 mg/kg。

5.3 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是將液相色譜作為分離系統(tǒng),質(zhì)譜作為檢測系統(tǒng),將色譜的高分離能力與質(zhì)譜高選擇性、高靈敏度的優(yōu)點結(jié)合。質(zhì)譜常用于分析對熱不穩(wěn)定、分子量較大的農(nóng)藥殘留,在當(dāng)今的農(nóng)藥殘留檢測中更受青睞。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法主要包括液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和(超)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。與氣質(zhì)方法相比較,液質(zhì)在凈化、分析方面都有了極大的提高,且不用衍生化。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對于極性強(qiáng)、不易揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥殘留檢測分析效果較好,它具有抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點。

我國發(fā)布的各項針對氯芬新在蔬菜、水果食品基質(zhì)中的檢測標(biāo)準(zhǔn)也采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法。如GB/T 20769-2008 《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中以乙腈提取,鹽析離心,固相萃取柱凈化。采用負(fù)離子掃描模式,以乙酸銨水溶液-乙腈做流動相,方法的檢出限為0.01 μg/kg[42]。SN/T 2540-2010《進(jìn)出口食品中苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》中采用丙酮-正己烷提取,經(jīng)固相萃取小柱凈化,適用于水果蔬菜、小麥、和核桃仁、豬肉、牛奶等高脂基質(zhì),檢測限為5.0 μg/kg,在茶葉中氯芬新農(nóng)藥檢測限為10.0 μg/kg。GB 23200.14-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 果蔬汁和果酒中 512 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜法》采用1%乙酸乙腈溶液提取,經(jīng)固相萃取柱凈化,25 mL乙腈-甲苯溶液洗脫,方法的定量限為0.02 μg/kg。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法可以對更多復(fù)雜基質(zhì)中的氯芬新殘留進(jìn)行檢測。Brutti 等[7]建立了加壓液體萃取-LC-MS/MS法測定水果、蔬菜、谷物和畜產(chǎn)品中氯芬新等9種苯甲酰脲的方法,能夠檢測出食品樣品中低于0.01 mg/kg的氯芬新,方法的定量限在0.002～0.01 mg/kg之間。Anna A. Bletsou等[43]開發(fā)了測定綠豆、豌豆和辣椒中氯芬新的殘留水平,方法的LOD值為0.61 μg/kg。劉錦霞等[44]建立了測定豬肉中氯芬新殘留的分析方法。氯芬新在豬肉中的檢測限為5.0 μg/kg。張聰?shù)萚45]針對茶葉基質(zhì),建立的方法的檢出限為5.0 μg/kg,定量限為11.6 μg/kg。郭鴻瑩[46]建立了一種同時測定韭菜和土壤中氯芬新殘留的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。選用C18色譜柱分離,流動相為乙腈和水(含0.1%甲酸和 5 mmoL乙酸銨),用外標(biāo)法定量,方法在韭菜植株中的最低檢出量為0.01 mg/kg。柳菡等[47]建立了檢測大豆和玉米中氯芬新殘留的高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法。氯芬新在大豆和玉米基質(zhì)中的檢出限均為3.0 μg/kg。王連珠等[48]建立了果汁蔬菜中8種苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留量的液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。方法的檢出限為0.04～0.42 μg/kg,定量限為0.2～1.5 μg/kg。丁慧瑛等[49]以乙腈作提取劑,采用C18柱分離,以甲醇和乙酸銨溶液為流動相,方法的檢出限為3 μg/kg,定量限為10 μg/kg。張月等[50]建立了同時檢測柑橘中氯芬新農(nóng)藥殘留的方法,方法的定量限為0.01 mg /kg。梅麗蕓[51]和彭茂民[52]都分別采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了檢測氯芬新在甘藍(lán)及土壤中的殘留檢測方法,氯芬新殘留在甘藍(lán)中的定量限均為0.01 mg/kg。表3為氯芬新殘留常見檢測方法比較。

表3 氯芬新殘留檢測方法比較Tab 3 Comparison of lufenuron residue detection methods

6 食品中氯芬新殘留風(fēng)險評價

急性參考劑量(ARfD)是一個毒理學(xué)閾值,指食品中某種物質(zhì)在短時間內(nèi)急性暴露造成的不導(dǎo)致健康損害的劑量。根據(jù)國際食品法典委員會(Codex Alimentarius Commission,簡稱CAC)報告,氯芬新的急性參考劑量(ARfD)不需要考慮,因為氯芬新的急性口服毒性較低,且沒有發(fā)育毒性和單次給藥可能引起的其他毒理學(xué)效應(yīng)。

隨著氯芬新在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大量使用,開展食品中氯芬新的膳食暴露風(fēng)險評估,對保障食品質(zhì)量安全、保證居民膳食健康具有重要意義。郭鴻瑩[46]采用風(fēng)險熵值法評價氯芬新在韭菜中的膳食風(fēng)險,計算得到 RQ值為1.32×10-3遠(yuǎn)低于1,表示在韭菜中的風(fēng)險可接受。Majida Mujahid等[53]通過測定估計日攝入量(EDI)和目標(biāo)危害系數(shù)法(THQ)來評估暴露于氯芬新農(nóng)藥污染的蔬菜對成人和兒童的健康風(fēng)險。結(jié)果表明氯芬新的EDI值處于較低水平,在每種蔬菜中兒童均比成年人的EDI值高;只有絲瓜(兒童)的THQ值大于1,食用花椰菜、茄子、辣椒對人體健康無顯著影響,兒童在所調(diào)查的蔬菜時更容易接觸農(nóng)藥。Duck Woong Park等[54]針對韓國四種葉菜采用估計日攝入量(EDI)和可接受日攝入量(ADI)進(jìn)行危害指數(shù)法(Hazard index)風(fēng)險評估。氯芬新在葉菜中的危害指數(shù)范圍為0.09%～1.15%,遠(yuǎn)小于100%,表明葉菜對健康沒有危害。Tang Hongxia等[22]根據(jù)小白菜上氯芬新農(nóng)藥的殘留水平,運(yùn)用風(fēng)險熵值法對不同性別和年齡人群進(jìn)行膳食風(fēng)險評估。結(jié)果得到RQ值低于100%,在小白菜中的飲食風(fēng)險是可以接受的。Feng等[55]根據(jù)施用5 d后菠菜中氯芬新的標(biāo)準(zhǔn)殘留量中值0.22 mg/kg,采用風(fēng)險熵值法對中國城鄉(xiāng)居民進(jìn)行菠菜中氯芬新殘留長期膳食攝入風(fēng)險評估,計算得到氯芬新在一般人群中的NEDI值為0.003998 mg/(kg bw),RQ值為40.0%,說明氯芬新殘留量對一般人群的健康是可接受的。Li Kailong[25]等也采用風(fēng)險熵值法對金桔和金桔果汁中的氯芬新殘留進(jìn)行膳食風(fēng)險評估,評估結(jié)果也證明其對人體風(fēng)險較低,且榨汁工藝可顯著降低金桔汁中氯芬新的殘留量。

以往的膳食風(fēng)險研究表明,氯芬新殘留對于人群的膳食風(fēng)險是可以接受的,然而由于長期接觸殺蟲劑會降低認(rèn)知能力,老人及體弱人士應(yīng)謹(jǐn)慎攝入及接觸氯芬新殺蟲劑。

7 展 望

氯芬新在農(nóng)業(yè)的應(yīng)用越來越廣泛,國內(nèi)外學(xué)者對氯芬新的研究也不斷深入,關(guān)于氯芬新在食品中的殘留分析會得到更多的重視。與此同時,相關(guān)的法律法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)的制定也應(yīng)得到逐步加強(qiáng),目前國內(nèi)關(guān)于高效準(zhǔn)確檢測氯芬新的方法主要針對植物源性食品,動物源性食品尤其是在水產(chǎn)品中的檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)還有待于進(jìn)一步的開發(fā)和探索。

目前氯芬新殘留檢測的前處理方法主要采用的基于固相吸附的萃取方法,包括QuEChERS法、固相萃取法等,同時用于痕量殘留物富集的新材料也得到越來越多的應(yīng)用,其中主要是基于磁性吸附和分子印跡的材料。但這些樣品富集方法存在如萃取過程需要特殊的設(shè)備,吸附劑的合成相對比較復(fù)雜等缺點。目前大多數(shù)檢測氯芬新殘留的方法主要采用的是液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用方法。液質(zhì)聯(lián)用法適用范圍較廣,檢測的準(zhǔn)確度和靈敏度較高,可以預(yù)見氯芬新殘留未來主要檢測方法仍然是采用液質(zhì)聯(lián)用的方法,主要方向是優(yōu)化選擇性強(qiáng)、效率高以及適用性好的前處理方法。社會發(fā)展對藥物殘留相應(yīng)的配套檢測技術(shù)提出了快速、準(zhǔn)確的要求。因此探索前處理方法簡便、一體化自動化程度高的儀器的檢測技術(shù)用于食品中氯芬新殘留的檢測,將具有較為廣闊的應(yīng)用前景。

同時我國有關(guān)于氯芬新在各類食品基質(zhì)中的殘留膳食風(fēng)險的研究還相對較少,亟需開展動物源性食品及水產(chǎn)品等各類食品中的膳食暴露風(fēng)險評估。