瞿紅穎,耿智霞,賈 興,張 沛,任麗花,李卓偉*,劉 欣,楊國(guó)輝,吳聰明

(1．河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司,石家莊 050041;2.河北省獸藥技術(shù)創(chuàng)新中心,石家莊 050041;3.石家莊市獸藥技術(shù)創(chuàng)新中心,石家莊050041;4．中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),北京 100000)

牛呼吸道疾病(BRD)是造成全世界養(yǎng)牛業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的主要原因之一。引起B(yǎng)RD的病原菌主要有溶血曼氏桿菌、多殺巴氏桿菌和睡眠嗜組織菌等,臨床上常使用抗菌藥物治療,包括β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類等。另外,由于BRD病牛常存在發(fā)熱、疼痛、肺組織炎癥反應(yīng),臨床上還常使用抗炎藥進(jìn)行輔助治療,可更加快速地控制病牛癥狀,消除炎癥反應(yīng),提高治愈率[1-2]。

卡洛芬(carprofen)是2-芳基丙酸類非甾體抗炎藥,是花生四烯酸級(jí)聯(lián)酶環(huán)氧合酶COX-2的抑制劑,通過(guò)抑制前列腺素合成而發(fā)揮抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用[3-4],其作用強(qiáng)于阿司匹林、保泰松、對(duì)乙酰氨基酚等,且具有吸收快、副作用小等特點(diǎn),是高效的動(dòng)物用抗炎藥。目前卡洛芬注射液已在美國(guó)、加拿大和歐洲多個(gè)國(guó)家廣泛用于輔助治療牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用表明在使用抗菌藥的同時(shí)聯(lián)合使用卡洛芬注射液,可以快速緩解病牛發(fā)熱并顯著降低肺組織炎癥反應(yīng),效果顯著。在我國(guó),BRD也是一種常發(fā)病,鑒于卡洛芬的高效抗炎活性,本試驗(yàn)進(jìn)行了卡洛芬注射液輔助治療牛呼吸道疾病的臨床療效研究,為該藥物制劑的獸醫(yī)臨床合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 受試藥物:卡洛芬注射液,河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司,規(guī)格100 mL:5 g,批號(hào)KLF020902;對(duì)照藥物:卡洛芬注射液,碩騰公司,規(guī)格100 mL:5 g,批號(hào)M4613-09。

泰拉霉素注射液,法瑞瓦公司,規(guī)格50 mL:5 g,批號(hào)B575806。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)地點(diǎn) BRD病牛,1～3月齡,共80頭,從正在發(fā)生BRD的山東省青島東盛泰奶牛良種繁育基地按試驗(yàn)要求標(biāo)準(zhǔn)篩選。試驗(yàn)期間(D0～D14)所有試驗(yàn)牛未發(fā)生伴隨治療用藥情況。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)依據(jù)《抗菌藥物II、III期臨床藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)指導(dǎo)原則》[5]設(shè)計(jì)。將遴選出來(lái)的80頭滿足試驗(yàn)要求的BRD病牛按計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)數(shù)字表分配到A、B、C、D、E組,每組16頭,按表1給藥。

表1 試驗(yàn)牛給藥方案Tab 1 Administration protocol for experimental cows

1.4 臨床檢查

1.4.1 臨床癥狀檢查 試驗(yàn)期間,對(duì)試驗(yàn)牛進(jìn)行臨床檢查,分別在D0、D1～D7日上下午、D14日測(cè)量體溫,按BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分法系統(tǒng)[6]對(duì)試驗(yàn)牛的發(fā)熱、咳嗽、鼻孔分泌物、眼分泌物、耳朵狀況分別進(jìn)行評(píng)分。各項(xiàng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

表2 BRD癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab 2 Symptoms scoring criteria of BRD

1.4.2 降鈣素原(PCT)濃度檢查 降鈣素原(PCT)是診斷和監(jiān)測(cè)細(xì)菌性疾病感染的一個(gè)重要參數(shù)。在BRD病牛血清中PCT的濃度會(huì)急劇升高,而在抗生素治愈牛的血清中則會(huì)下降至正常水平,與BRD疾病進(jìn)程具有良好的符合性,是一個(gè)較好的診斷BRD的生物標(biāo)志物[7]。采集各組試驗(yàn)牛在D0、D3、D7日的頸靜脈血液樣品,并使用商品化試劑盒測(cè)定血清PCT濃度,分析病牛的恢復(fù)程度。

1.5 有效性評(píng)估主要指標(biāo) A．體溫恢復(fù)正常牛占比:記錄各組在D1～D7各日上下午的體溫恢復(fù)正常牛數(shù),當(dāng)試驗(yàn)牛的體溫<39.5 ℃時(shí)視為體溫正常,按下述公式計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)每組的體溫恢復(fù)正常牛占比并進(jìn)行比較。體溫恢復(fù)正常牛占比(%)=[D1～D7各日上下午體溫恢復(fù)正常牛數(shù)/該觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)試驗(yàn)牛數(shù)]×100

B．體溫恢復(fù)正常時(shí)間:記錄D1～D7期間各組每頭試驗(yàn)牛的體溫恢復(fù)正常時(shí)間,即從給藥開(kāi)始至體溫<39.5 ℃的時(shí)間間隔,統(tǒng)計(jì)各組試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常時(shí)間的均值與標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)以及50%和90%試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常所需時(shí)間并進(jìn)行比較。

C．BRD癥狀解除牛占比:記錄各組在D1～D7各日上下午的BRD癥狀解除(五項(xiàng)評(píng)分均為0)牛數(shù),按下述公式計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)每組的BRD癥狀解除牛占比并進(jìn)行比較。BRD癥狀解除牛占比(%)=[D1～D7各日上下午BRD癥狀解除牛數(shù)/該觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)試驗(yàn)牛數(shù)]×100

D．BRD癥狀解除時(shí)間:記錄D1～D7期間各組每頭試驗(yàn)牛的BRD癥狀解除時(shí)間,即從給藥開(kāi)始至BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分均為0的時(shí)間間隔,統(tǒng)計(jì)各組試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間的均值與標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)以及50%和90%試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間并進(jìn)行比較。

E．血清PCT濃度:記錄各組試驗(yàn)牛在D0、D3、D7各日采集血清測(cè)得的PCT濃度,進(jìn)行比較。

F．D7日治療成功率:在D7日,如果某試驗(yàn)牛滿足體溫<39.5 ℃,且BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分和<4,則視為治療成功;其他任何情況,均視為治療失敗。計(jì)算各組試驗(yàn)牛的D7治療成功率進(jìn)行比較:D7日治療成功率(%)=(D7日治療成功試驗(yàn)牛數(shù)/接受治療試驗(yàn)牛數(shù))×100

1.6 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS軟件,試驗(yàn)牛的體溫、體溫恢復(fù)正常時(shí)間、BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分、BRD癥狀解除時(shí)間、PCT濃度,分別以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示,采用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;各組試驗(yàn)牛的體溫恢復(fù)正常牛占比、BRD癥狀解除牛占比、治療成功率等,分別以百分率(%)表示,采用卡方(χ2)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。比較組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)和/或組間相同時(shí)間點(diǎn)上述指標(biāo)的差異顯著性,所有假設(shè)檢驗(yàn)均在0.05顯著性水平進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床檢查結(jié)果

2.1.1 體溫檢查結(jié)果 試驗(yàn)牛的體溫統(tǒng)計(jì)表如表3所示,給藥前(D0日),所有試驗(yàn)牛的體溫均≥39.5 ℃,各組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。給藥后,多數(shù)試驗(yàn)牛的體溫迅速下降至正常范圍,僅少數(shù)試驗(yàn)牛(尤其是E組)的體溫在短時(shí)內(nèi)(D0～D1日)下降不明顯,給藥后D1日上午,5個(gè)組中只有E組試驗(yàn)牛的平均體溫仍高于正常體溫,其中B、C組試驗(yàn)牛的體溫顯著低于E組(P<0.05),A、D組試驗(yàn)牛的體溫與E組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1日下午,5個(gè)組試驗(yàn)牛的體溫均值都顯著低于D0(P<0.05),回落到正常范圍內(nèi)。

表3 試驗(yàn)牛體溫統(tǒng)計(jì)Tab 3 Body temperature statistics of test cows

體溫恢復(fù)正常牛占比結(jié)果如表4所示,在D0日(給藥前),各組試驗(yàn)牛的體溫均異常,體溫恢復(fù)正常牛占比均為0。在D1日上午,5組均有部分牛體溫恢復(fù)正常,其中A、B、C、D組體溫恢復(fù)正常牛占比顯著高于E組(P<0.05),B、C組顯著高于A、D組(P<0.05)。給藥后隨著時(shí)間延長(zhǎng),在D2日下午和D3日上午,各組絕大多數(shù)牛體溫恢復(fù)正常,其中B、C、D組體溫恢復(fù)正常牛占比顯著高于A、E組(P<0.05),在D4日下午和D5日,A、B、C、D組全部未退出試驗(yàn)牛的體溫恢復(fù)正常,占比顯著高于E組(P<0.05)。

表4 體溫恢復(fù)正常牛占比統(tǒng)計(jì)Tab 4 Statistics on the percentage of cows with normal body temperature

試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常時(shí)間統(tǒng)計(jì)如表5所示,A、B、C、D各組試驗(yàn)牛的體溫恢復(fù)正常時(shí)間均顯著快于E組(P<0.05)。B、C組試驗(yàn)牛的體溫恢復(fù)時(shí)間要快于A組和D組,但差異不顯著(P>0.05)。另外,A、B、C、D組50%試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常時(shí)間比E組快0.5日,90%試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常時(shí)間比E組快0.5日～2.0日。

表5 試驗(yàn)牛體溫恢復(fù)正常時(shí)間統(tǒng)計(jì)Tab 5 Statistics on time to normalization of body temperature of test cows

2.1.2 BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分結(jié)果 如圖6所示,給藥前(D0日),所有試驗(yàn)牛均表現(xiàn)出典型的BRD癥狀,BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分和的范圍為5～11,各組間評(píng)分均值無(wú)顯著差異(P>0.05),D1日上午(用藥后0.5日),5組試驗(yàn)牛的BRD癥狀均有明顯改善,BRD五項(xiàng)癥狀評(píng)分和較D0日顯著下降(P<0.05),各組之間比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。隨著給藥后時(shí)間的延長(zhǎng),各組癥狀評(píng)分和持續(xù)下降直至評(píng)分為0。

給藥前(D0日),所有試驗(yàn)牛均表現(xiàn)出BRD癥狀,各組BRD癥狀解除牛占比均為0,D2日下午(用藥后2.0日),B、C組的BRD癥狀解除牛占比達(dá)100%,顯著高于A、D、E組(P<0.05),A、D、E組之間的BRD癥狀解除牛占比無(wú)顯著差異(P>0.05);直至D5日,除E組仍有個(gè)別牛表現(xiàn)輕微的BRD癥狀外,其他未退出試驗(yàn)牛均保持健康狀態(tài),各組之間的BRD癥狀解除牛占比無(wú)顯著差異(P>0.05),結(jié)果見(jiàn)表7 。

表7 BRD癥狀解除牛占比統(tǒng)計(jì)Tab 7 Statistics on the percentage of test cows with BRD symptoms relieved

試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間如表8所示,B、C、D組試驗(yàn)牛的BRD癥狀解除時(shí)間均顯著快于E組(P<0.05)。B、C、D組試驗(yàn)牛的BRD癥狀解除時(shí)間要快于A組。此外,A、B、C、D組50%試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間比E組快0.5日,90%試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間比E組快0日～1.5日。

表8 試驗(yàn)牛BRD癥狀解除時(shí)間統(tǒng)計(jì)Tab 8 Statistics on the time to relief of BRD symptoms of test cows

結(jié)果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)用治療BRD,可更加快速有效地控制病牛癥狀。與單獨(dú)使用泰拉霉素注射液相比,聯(lián)用低、中、高劑量的卡洛芬注射液或推薦劑量的碩騰公司的卡洛芬注射液,BRD病牛異常體溫的恢復(fù)更快,發(fā)熱、咳嗽、流鼻涕等癥狀的緩解及消除更迅速,疾病恢復(fù)期更短。其中,卡洛芬注射液中、高劑量的效果無(wú)明顯差異(P>0.05),與使用推薦劑量原研卡洛芬注射液的效果相當(dāng)(P>0.05),均優(yōu)于低劑量的仿制卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.2 血清PCT濃度 試驗(yàn)牛血清PCT濃度如表9所示,用藥后D3日,5個(gè)組試驗(yàn)牛的PCT值與D0日比較均顯著下降(P<0.05),組間比較,雖然A組試驗(yàn)牛的PCT值高于B、C、D組,但4個(gè)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05),E組試驗(yàn)牛的PCT值則顯著高于其他4個(gè)組(P<0.05);用藥后D7日,5個(gè)組的PCT值均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表9 試驗(yàn)牛血清PCT濃度統(tǒng)計(jì)Tab 9 Statistics on PCT concentration in serum of test cows

結(jié)果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)用可促進(jìn)BRD病牛消除致病菌感染帶來(lái)的炎癥反應(yīng)。與單獨(dú)使用泰拉霉素注射液相比,聯(lián)用低、中、高劑量的卡洛芬注射液或推薦劑量的碩騰卡洛芬注射液,可使BRD病牛異常升高的血清PCT濃度更快恢復(fù)至正常水平。其中,卡洛芬注射液中、高劑量的效果無(wú)明顯差異(P>0.05),與使用推薦劑量碩騰卡洛芬注射液的效果相當(dāng)(P>0.05),均優(yōu)于低劑量的卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.3 試驗(yàn)牛的治療成功率、后期復(fù)發(fā)率及死亡率 表10中數(shù)據(jù)結(jié)果顯示,A、B組試驗(yàn)牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為93.75%,C、D組試驗(yàn)牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為100%,E組試驗(yàn)牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為87.5%。其中,C、D組試驗(yàn)牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均優(yōu)于A、B、E組試驗(yàn)牛,但組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表10 試驗(yàn)牛的治療成功率、后期復(fù)發(fā)率及死亡率統(tǒng)計(jì)Tab 10 Statistics on treatment success rate, late recurrence rate and mortality rate of test cows

結(jié)果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)用治療BRD,可小幅提高BRD病牛的治療成功率。無(wú)論是泰拉霉素注射液?jiǎn)我恢委熯€是與卡洛芬注射液聯(lián)用治療,治療成功牛在7日內(nèi)未見(jiàn)病情反復(fù)。

2.4 試驗(yàn)牛退出情況說(shuō)明 試驗(yàn)期間(D0～D14日),A組有1頭、B組有1頭、E組有2頭試驗(yàn)牛退出試驗(yàn),退出原因?yàn)锽RD惡化(達(dá)到治療失敗判斷標(biāo)準(zhǔn)),A、B、C、D、E組都未出現(xiàn)其他原因(如死亡、并發(fā)其他疾病、沒(méi)有依從試驗(yàn)方案、出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)等)導(dǎo)致退出的試驗(yàn)牛。

3 討論與結(jié)論

卡洛芬為2-芳基丙酸類非甾體抗炎藥,主要通過(guò)抑制花生四烯酸環(huán)氧酶,導(dǎo)致前列腺素等炎癥介質(zhì)的生成減少,從而發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛、消炎作用?？宸易⑸湟河?0世紀(jì)70年代由美國(guó)輝瑞公司研究開(kāi)發(fā),目前已在美國(guó)、加拿大和歐洲多個(gè)國(guó)家廣泛應(yīng)用,輔助治療牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,臨床效果顯著,是一種高效的動(dòng)物用抗炎藥。

卡洛芬具有良好的抗炎效果,其抗炎作用較一些常用的抗炎藥物要強(qiáng)。T.V. Balmer[8]等用抗菌劑和卡洛芬聯(lián)合治療了自然爆發(fā)的犢牛的呼吸道疾病,同時(shí)用氟尼辛作對(duì)比研究。試驗(yàn)結(jié)果表明,單次以1.4 mg/kg bw的平均劑量皮下注射卡洛芬,與3 d連續(xù)以2.0 mg/kg bw的平均劑量通過(guò)靜脈注射氟尼辛葡甲胺的效果相同,證明了單劑量的卡洛芬與三劑量的氟尼辛葡甲胺作為犢牛急性呼吸道疾病的輔助用藥有同樣的療效。

本試驗(yàn)研究了卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)合用于治療牛的呼吸道疾病的臨床效果,與單獨(dú)用泰拉霉素治療對(duì)比,結(jié)果卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)合用藥的病牛異常體溫恢復(fù)的更快,發(fā)熱、咳嗽、流鼻涕等癥狀的緩解和消除更迅速,疾病恢復(fù)期更短,且聯(lián)合用藥可促進(jìn)病牛消除致病菌感染帶來(lái)的炎癥反應(yīng),小幅提高病牛的治療成功率。

卡洛芬不僅與泰拉霉素聯(lián)合使用能起到良好的臨床療效,與其他的抗菌藥聯(lián)合使用,同樣能明顯改善臨床癥狀,降低炎癥反應(yīng)。例如Elitok B[9]等在研究卡洛芬治療牛呼吸道疾病方面的臨床療效時(shí),使用了替米考星作為基礎(chǔ)治療。用藥后,用卡洛芬-替米考星治療的動(dòng)物的體溫和呼吸頻率都有所下降,且明顯低于單獨(dú)用替米考星治療的動(dòng)物(P< 0.05),表明卡洛芬-替米考星治療病牛的臨床癥狀改善程度明顯大于單獨(dú)用替米考星,證明了卡洛芬輔助用藥的臨床效果。Lockwood P W[10]等研究了卡洛芬與頭孢噻呋一起治療自然發(fā)生的牛呼吸道疾病的臨床療效,同時(shí)用氟尼辛、酮洛芬做了對(duì)比研究。試驗(yàn)將入選病牛分為四組,且都接受了頭孢噻呋(1.1 mg/kg,肌內(nèi)注射)為期三天的治療,其中三組還分別接受了單劑量的氟尼辛(2.2 mg/kg,靜脈注射)、酮洛芬(3 mg/kg,靜脈注射)、卡洛芬(1.4 mg/kg,皮下注射)的輔助治療。結(jié)果表明,24 h內(nèi),用非甾體抗炎藥聯(lián)合治療的三組的熱射病的減輕程度明顯高于單獨(dú)用頭孢噻呋治療的組。證明了卡洛芬與不同抗菌藥物聯(lián)合使用,對(duì)于病癥的改善速度和程度均明顯優(yōu)于單獨(dú)的抗菌藥物治療,且卡洛芬的推薦用藥劑量為1.4 mg/kg bw,與本研究的結(jié)果相同。

綜上所述,卡洛芬與抗菌藥物泰拉霉素、替米考星或頭孢噻呋聯(lián)用,均能有更好的治療BRD的臨床效果。根據(jù)本研究結(jié)果,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯(lián)用治療牛呼吸道疾病,治療安全、有效,推薦卡洛芬注射液的使用劑量為:一次量,每1 kg體重,牛1.4 mg皮下注射。