彭 燦 南華大學附屬第二醫(yī)院婦科,湖南省衡陽市 421001

宮頸癌作為臨床常見的一種惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于乳腺癌位居女性惡性腫瘤的第2位,對女性生命健康造成了嚴重威脅[1]。隨著現代醫(yī)學的發(fā)展和進步,宮頸癌的臨床治療方案已經從單一的手術治療逐漸發(fā)展成為綜合性的治療方式,主要以傳統(tǒng)治療與新型輔助治療相結合,但患者臨床預后狀況仍無明顯改善,患者病死率仍居高不下[2]。因此,尋求宮頸癌疾病發(fā)生發(fā)展的相關分子機制,尋找有效的治療靶點,對于改善患者臨床預后具有著重要價值。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類長度在200nt以上的非編碼RNA,雖然LncRNA不具備編碼蛋白質的能力,但其可通過轉錄以及轉錄后、表觀遺傳等多種途徑調控基因表達,且越來越多的研究發(fā)現,LncRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的調控作用[3]。本文探討分析宮頸癌組織中LncRNA CCAT2表達及其意義,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年3月—2020年3月我院收治的宮頸癌患者86例作為觀察對象,患者年齡32～70歲,平均年齡(49.47±11.20)歲。取術中留存宮頸癌組織標本及距腫瘤組織邊緣5cm以上的癌旁正常組織。本研究經我院倫理委員會批準。

1.2 選擇標準 (1)納入標準:①經病理科檢查確診為原發(fā)性宮頸癌;②患者均經手術治療;③患者臨床資料完整,且組織標本保存完整;④患者術前均未接受放療、化療等其他抗腫瘤治療方案。(2)排除標準:①合并其他原發(fā)性腫瘤患者;②合并嚴重免疫系統(tǒng)疾病患者;③合并嚴重心、肝、腎等器官疾病患者;④妊娠期及哺乳期女性。

1.3 LncRNA CCAT2表達 術中獲取的宮頸癌組織及癌旁正常組織標本置于液氮中保存,根據Trizol試劑(美國Invitrogen)提取總RNA,使用分光光度儀對提取總RNA質量和濃度進行測定,測定結果合格后,將其置于-80℃冰箱內保存。按照逆轉錄試劑盒說明書將RNA逆轉錄為cDNA,然后將cDNA保存于-20℃保存。采用qRT-PCR反應檢測,反應體系20μl,根據目的基因設計上下游引物,引物序列:LncRNA CCAT2上游引物:5’-CCCTGGTCAAATTGCTAAAC CT-3’,下游引物:5’-TTATTCGTCCTGTTTTATGGAT-3’;GADPH上游引物:5’-TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG-3’,下游引物:5’-TCCTTGGAGGCCCAGTGGGCCAT-3’。反應條件:95℃ 30s;95℃ 15s、60℃ 30s,共完成35個循環(huán),以GADPH作為內參基因,采用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量。

1.4 生存預后 以患者術后出院作為起始日期,利用門診資料、電話、微信、郵件等多種方式進行隨訪,隨訪截止日期為2023年1月31日,隨訪終點事件為患者死亡,記錄患者總體生存期。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用統(tǒng)計學軟件SPSS25.0進行數據處理分析,計量資料比較采用t檢驗,計數資料比較采用χ2檢驗,生存分析繪制Kaplan-Meier生存曲線,生存情況比較采用Log-rank檢驗,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌組織及癌旁組織LncRNA CCAT2表達比較 宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對表達量為1.835±0.316,顯著高于癌旁組織的0.972±0.225(t=20.631,P=0.000<0.05)。

2.2 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達與患者臨床病理參數的關系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對表達量顯著高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05),低分化患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對表達量顯著高于中高分化患者(P<0.05),有淋巴結轉移患者宮頸癌組織LncRNA CCAT2相對表達量顯著高于無淋巴結轉移患者(P<0.05),而患者年齡、最大腫瘤直徑、病理類型與LncRNA CCAT2表達無關(P>0.05),見表1。

表1 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達與患者臨床病理參數的關系

2.3 宮頸癌組織LncRNA CCAT2表達與患者預后的關系 以患者宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對表達量平均值1.835作為臨界值,將LncRNA CCAT2相對表達量≥1.835患者作為高表達組(n=43)、LncRNA CCAT2相對表達量<1.835患者作為低表達組(n=43)。低表達組患者生存預后顯著優(yōu)于高表達組(P<0.05),見圖1。

3 討論

由于宮頸癌患者早期臨床癥狀不明顯,容易被忽視,目前對于宮頸癌的早期篩查手段,主要包括細胞學檢查以及HPV檢測[4]。隨著基因芯片技術的不斷發(fā)展和進步,宮頸癌的發(fā)病機制成為了越來越多學者共同關注的焦點,近年來,多項研究顯示,宮頸癌組織中LncRNA表達水平與宮頸癌疾病發(fā)生、侵襲以及患者臨床預后均具有密切的聯(lián)系[5-6]。LncRNA作為一種無完整開放閱讀框的RNA,是非編碼RNA家族中的重要成員之一,并無蛋白質編碼功能。但隨著目前研究的不斷深入,越來越多的研究報道顯示,LncRNA在多種腫瘤進展過程中發(fā)揮著重要的調控作用,包括參與染色質的修飾、轉錄激活以及核內運輸等復雜生物學功能,此外,LncRNA在轉錄調控、表觀遺傳調控等生物學過程中可引起基因表達水平的改變,而這一系列生物學行為在生命體生長、發(fā)育以及增殖等方面具有重要作用[7-8]。

LncRNA CCAT2最初被發(fā)現在結直腸癌組織中高表達,位于染色體8q 24.21上,已被多項研究證實其表達升高與多種惡性腫瘤的風險增加有關[9]。LncRNA CCAT2作為一種潛在的新型惡性腫瘤標志物,其表達增加促進了蛋白質合成以及核糖體生物發(fā)生相關基因的表達,直接與增殖阻斷蛋白1(BOP1)核糖體生物發(fā)生因子之間相互作用,而BOP1可通過增加染色體分離的極光激酶B的活性促進染色體不穩(wěn)定以及癌癥的發(fā)生,同時增加對奧沙利鉑以及5-氟尿嘧啶等化療藥物的耐藥性[10]。為了進一步明確LncRNA CCAT2與宮頸癌之間的關系,本文探討分析宮頸癌組織中LncRNA CCAT2表達及其意義。

本文結果顯示,宮頸癌組織中LncRNA CCAT2相對表達量顯著高于癌旁組織,同時其表達水平與患者臨床分期、組織分化程度以及淋巴結轉移有關。與相關研究報道結果相似[11],表明在宮頸癌中,存在LncRNA CCAT2的異常高表達,且LncRNA CCAT2參與了宮頸癌疾病進展過程,與腫瘤的惡性程度有關。此外,通過生存分析結果顯示,LncRNA CCAT2低表達組患者生存預后顯著優(yōu)于高表達組,LncRNA CCAT2有望成為宮頸癌潛在的生物治療靶點及預后預測分子標志。但關于LncRNA CCAT2對宮頸癌的具體調控機制仍不清楚,提示后續(xù)還需要進一步深入的研究分析。

綜上所述,LncRNA CCAT2在宮頸癌組織中呈高表達,且其表達水平與腫瘤FIGO分期、腫瘤組織分化程度、淋巴結轉移以及患者臨床預后有關,LncRNA CCAT2有望成為宮頸癌早期診斷和治療、預后預測的潛在生物學標志物,值得進一步深入研究分析。