謝曉丹，韓瑞，卜倩倩，李夢璐，張亞楠，黃賽亞，皇甫輝

山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030000

喉鱗狀細(xì)胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）是頭頸部腫瘤中常見的惡性腫瘤之一，占我國耳鼻咽喉部惡性腫瘤的7.9%～35%，列頭頸部惡性腫瘤的第3 位［1］。近40 年來，LSCC 發(fā)病率明顯增加，發(fā)病年齡以40 ～60 歲最多，吸煙和飲酒可協(xié)同增高患LSCC 的危險性［1-2］。臨床治療目前主要采取以手術(shù)為主的多學(xué)科綜合治療［3］，但多數(shù)LSCC 患者就診時已失去最佳手術(shù)時機。LSCC 細(xì)胞與其他惡性腫瘤細(xì)胞一樣，具有無限繁殖、易轉(zhuǎn)移、耐藥等特點，手術(shù)治療后存在較大的復(fù)發(fā)及放化療耐受風(fēng)險。因此，在LSCC 早期診斷及尋找新的治療靶點成為研究的重點領(lǐng)域。

趨化因子是一種趨化性細(xì)胞因子，可調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞在炎癥刺激下進入受損或病變器官的遷移［4-5］。根據(jù)其N-末端半胱氨酸殘基的不同，可分為4 個主要亞家族：CXCL、CC、C和CX3C。CXCL5屬于趨化因子家族中的一員，其基因定位于4號染色體q13-q21部位，CXCR2 是其特異性受體，CXCL5 可結(jié)合CXCR2介導(dǎo)血管增生，也可影響腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移［6-8］。CXCL5在多種癌癥中表達(dá)上調(diào)并參與腫瘤進展，但CXCL5在LSCC中的作用及機制尚不清楚。

因此，本研究在LSCC組織及細(xì)胞中驗證了CXCL5的表達(dá)情況，通過靶向沉默CXCL5后分析對其生物學(xué)功能的影響，并通過TCGA 數(shù)據(jù)庫分析CXCL5基因在LSCC 發(fā)展過程中涉及的免疫浸潤分析、互作基因等，以期為LSCC 的早期診斷、靶向治療等提供新方法。

1 材料與方法

1.1 資料從TCGA（http：／／cancergenome.nih.gov／）數(shù)據(jù)庫中下載頭頸鱗癌（head-neck squamous cell carcinoma，HNSC）的CXCL5基因RNA-seq 數(shù)據(jù)，保留發(fā)病部位為喉部（larynx）或喉咽部（hypopharynx）部位的樣本。

1.2 樣本及細(xì)胞 選取2019 年1 月—2020 年12 月山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院60 例病理科手術(shù)切除的LSCC 及相應(yīng)癌旁組織樣本，所有樣本經(jīng)病理學(xué)診斷均確診為LSCC，本研究獲得山西省倫理委員會批準(zhǔn)（2018044）；LSCC 細(xì)胞系A(chǔ)M-HN-8 和293T 人胚腎上皮細(xì)胞由山西省耳鼻咽喉重點實驗室提供。

1.3 主要試劑及儀器 DAB 顯色試劑盒、羊血清、增強酶標(biāo)山羊抗兔IgG 聚合物購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗CXCL5單抗（EP13083）購自美國Abcam公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；CCK8試劑盒購自美國APExBIO 生物技術(shù)有限公司；Transwell試劑盒購自美國Corning公司；流式細(xì)胞儀（ACEA NovoCyte3130）購自美國艾森公司。

1.4 TCGA 數(shù)據(jù)庫分析CXCL5 在LSCC 中的表達(dá) TCGA 數(shù)據(jù)庫中下載得到腫瘤組織樣本119 份、癌旁組織樣本44 份，利用limma 包對二者進行差異表達(dá)分析，差異基因篩選條件為［log2（fold change）］＞0.5＆adj.P.Val ＜0.05。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng) 用含5%胎牛血清、1%青鏈霉素、1%谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基，于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)人LSCC細(xì)胞AMC-HN-8。

1.6 LSCC 組織中CXCL5 蛋白表達(dá)水平的檢測 采用免疫組織化學(xué)染色法。將石蠟包埋的組織切片常規(guī)脫蠟，二甲苯、乙醇梯度脫水；抗原經(jīng)高溫高壓EDTA 修復(fù)后，切片浸入新鮮配置的3%H2O2甲醇溶液，室溫避光孵育10 min；加入封閉液（羊血清），室溫孵育20 min；加入兔抗CXCL5單抗（1∶100稀釋），4 ℃濕盒孵育過夜；加入增強酶標(biāo)山羊抗兔IgG 聚合物（1∶100 稀釋），室溫孵育60 min；DAB 顯色，復(fù)染封片。胞漿內(nèi)有棕色顆粒判定為陽性細(xì)胞，計數(shù)陽性細(xì)胞率，＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2 分，51% ～75%為3 分，＞75%為4 分；染色強度根據(jù)德國免疫反應(yīng)評分評估，無染色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，褐色為3 分；兩評分乘積為CXCL5的最終免疫組化染色得分。最終得分標(biāo)準(zhǔn)以陽性細(xì)胞率＞50%、染色強度為棕黃色及褐色為高表達(dá)組；以陽性細(xì)胞率≤50%、染色強度為淡黃色以下為低表達(dá)組。

1.7 AMC-HN-8細(xì)胞中CXCL5mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測 采用qPCR 法。待AMC-HN-8 細(xì)胞呈指數(shù)生長后收集細(xì)胞沉淀，根據(jù)Trizol 試劑說明書，提取細(xì)胞中總RNA，反轉(zhuǎn)錄后合成cDNA 第一鏈，以其為模板，以293T 細(xì)胞為對照組，18S 為內(nèi)參，qPCR 法進行定量分析。試驗重復(fù)3次。CXCL5上游引物序列為：5'-ATCAGTAATCTGCAAGTGTTCG-3'，下游引物序列為：5'-CAAGACAAATTTCCTTCCCGTT-3'；18S 上游引物序列為：5'-CCTGGATACCGCAGCTAGGA-3'，下游引物序列為：5'-GCGGCGCAATACGAATGCCCC-3'。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。qPCR反應(yīng)條件：95 ℃10 s，60 ℃30 s，95 ℃15 s，共40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達(dá)量。

1.8 siRNA敲降后的細(xì)胞功能試驗

1.8.1 siRNA 敲降效率檢測 由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司特異性合成3 組siRNA：siRNA-1（CXCL5-homo-438）、siRNA-2（CXCL5-homo-253）、siRNA-3（CXCL5-homo-307），并設(shè)空白對照（NC）組。將各組siRNA 分別轉(zhuǎn)染AMC-HN-8 細(xì)胞，進行qPCR 檢測。試驗重復(fù)3 次。篩選出敲降效率較好的2 組siRNA進行后續(xù)試驗。

1.8.2 細(xì)胞增殖試驗 采用CCK8 試劑盒檢測細(xì)胞增殖能力。將轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞計數(shù)，加至96 孔板中，每孔8 000 ～10 000 個，置37 ℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)；細(xì)胞貼壁后，收集0、24、48、72 h 細(xì)胞，上酶標(biāo)儀，于450 nm 波長處讀取吸光度值。試驗重復(fù)3次。

1.8.3 Transwell 細(xì)胞侵襲試驗 取各組轉(zhuǎn)染24 h 細(xì)胞，提前饑餓處理8 h；計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1 × 106個，用1 mL 無血清培養(yǎng)基重懸，上室（提前稀釋Matrigel 基質(zhì)膠，置37 ℃培養(yǎng)箱使膠凝固）加入200μL 細(xì)胞懸液，下室加入600 μL 含25%胎牛血清的培養(yǎng)基，37 ℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 ～3 d；4%多聚甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色。試驗重復(fù)3 次。顯微鏡下統(tǒng)計穿過小室的細(xì)胞數(shù)量，并計算相對倍數(shù)。

1.8.4 Transwell 細(xì)胞遷移試驗 取各組轉(zhuǎn)染24 h 細(xì)胞，提前饑餓處理8 h；計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5 × 105個，并用1 mL 無血清培養(yǎng)基重懸，上室加入200 μL細(xì)胞懸液，下室加入600μL 含25%胎牛血清的培養(yǎng)基，37 ℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1 ～2 d；4%多聚甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色。試驗重復(fù)3 次。顯微鏡下統(tǒng)計穿過小室的細(xì)胞數(shù)量，并計算相對倍數(shù)。

1.8.5 細(xì)胞周期試驗 將敲降效率較高的2條siRNA及NC 組細(xì)胞均轉(zhuǎn)染48 h 后，1 000×g離心5 min，收集細(xì)胞，沉淀用預(yù)冷的75%乙醇混勻，4 ℃固定過夜；次日1 000×g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，PBS重懸細(xì)胞；加入300μL染色液（染色緩沖液∶PI∶RNaseA=50∶1∶1）重懸細(xì)胞，37 ℃避光孵育30 min；上流式細(xì)胞儀（488 nm波長處）進行檢測。試驗重復(fù)3次。

1.8.6 細(xì)胞凋亡試驗 將敲降效率較高的2條siRNA及NC組各組細(xì)胞均轉(zhuǎn)染48 h后，1 000×g離心5 min，收集細(xì)胞，預(yù)冷PBS 混勻，離心收集細(xì)胞沉淀，用1×Binding Buffer 結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞后，調(diào)整細(xì)胞濃度至（1 ～5）×106個／mL；將500μL細(xì)胞懸液與5μL Annexin V FITC混勻，室溫避光孵育5 min；加入10μL PI，混勻，室溫孵育30 min；上流式細(xì)胞儀（488 nm 波長處）進行檢測。試驗重復(fù)3次。

1.9CXCL5免疫細(xì)胞浸潤分析及其共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)富集分析 使用ssGSEA 方法進一步對高低表達(dá)的2組樣本進行免疫細(xì)胞浸潤分析，利用R軟件對該2組樣本進行ssGSEA 分析，推算浸潤免疫細(xì)胞的比例，再采用wilcox.test檢驗進行相關(guān)性分析。在LSCC 中計算CXCL5基因與其他基因之間的pearson相關(guān)性，篩選|cor| ＞0.6 ＆P＜0.05 的關(guān)系對構(gòu)建CXCL5的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，并進行基于GO和KEGG的富集分析。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 23.0 軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)分布性數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)比較采用t檢驗；采用GraphPad Prism 軟件對實驗數(shù)據(jù)進行繪圖及統(tǒng)計分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CXCL5在LSCC組織中表達(dá)上調(diào)量的改變

2.1.1CXCL5基因在LSCC 組織中的表達(dá) TCGA 數(shù)據(jù)庫分析顯示，CXCL5基因在LSCC 組織中表達(dá)上調(diào)，與癌旁組織相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.830，P＜0.01），見圖1。

圖1 CXCL5在正常組織和LSCC組織中表達(dá)的箱線圖Fig.1 Box diagram of CXCL5 expression in normal tissue and LSCC tissue

2.1.2 CXCL5 蛋白在LSCC 組織中的表達(dá) CXCL5蛋白陽性染色為棕色顆粒樣，主要定位于細(xì)胞漿，見圖2。在相同判定標(biāo)準(zhǔn)下，LSCC 組織陽性染色得分明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），見表1。表明CXCL5在LSCC組織中高表達(dá)。

圖2 免疫組織化學(xué)染色法觀察CXCL5 蛋白在人LSCC組織中的表達(dá)（×200）Fig. 2 Expression of CXCL5 protein in human LSCC tissues observed by immunohistochemical staining（×200）

表1 免疫組織化學(xué)染色法評分表Tab.1 Scoring table of immunohistochemical staining

2.1.3 LSCC 細(xì)胞中CXCL5mRNA 表達(dá)水平 LSCC細(xì)胞中CXCL5mRNA 轉(zhuǎn)錄水平顯著高于對照組（t=5.490，P＜0.01），見表2。

表2 LSCC細(xì)胞中CXCL5 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量分析Tab.2 Quantitative analysis of CXCL5 mRNA expression in LSCC cells

2.2 細(xì)胞功能試驗

2.2.1 3條siRNA敲降效率CXCL5-homo-438、CXCL5-homo-253、CXCL5-homo-307 組轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞表達(dá)量分別為0.502±0.045、0.3275±0.169、0.6497±0.034，與NC組（1.001±0.066）相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），表明siRNA-1和siRNA-2敲降效率較好，見圖3。選擇siRNA-1和siRNA-2進行后續(xù)試驗。

圖3 qPCR法檢測轉(zhuǎn)染siRNA后細(xì)胞的表達(dá)水平Fig.3 Detection of expression level in cells transfected with siRNA by qPCR

2.2.2 siRNA 干擾CXCL5對LSCC 細(xì)胞增殖活性的影響CXCL5-homo-438、CXCL5-homo-253 組細(xì)胞各時間段增殖速度均慢于NC組（P＜0.05），見圖4。

圖4 CCK-8試驗檢測敲降CXCL5后對LSCC 細(xì)胞增殖的影響Fig.4 Detection of effect of CXCL5 knock-down on proliferation of LSCC cells by CCK-8 assay

2.2.3 siRNA 干擾CXCL5對LSCC 細(xì)胞侵襲的影響CXCL5-homo-438、CXCL5-homo-253 組穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)分別為NC組的（0.283±0.033）、（0.528±0.043）倍（P＜0.001），相比于NC 組的細(xì)胞數(shù)減少，可知CXCL5具有促進LSCC 細(xì)胞侵襲的能力，見圖5和圖6。

圖5 Transwell試驗檢測敲降CXCL5后對LSCC細(xì)胞侵襲能力的影響（免疫組織化學(xué)染色，×100）Fig.5 Detection of effect of CXCL5 knock-down on invasive ability of LSCC cells by Transwell test（immunohistochemical staining，×100）

圖6 敲降CXCL5后LSCC細(xì)胞侵襲能力的變化Fig.6 Changes of invasion ability of LSCC cells after knocking down CXCL5

2.2.4 siRNA 干擾CXCL5對LSCC 細(xì)胞遷移的影響CXCL5-homo-438、CXCL5-homo-253 組穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)分別為NC組的（0.276±0.048）、（0.481±0.020）倍（P＜0.001），相比于NC 組的細(xì)胞數(shù)減少，可知CXCL5具有促進LSCC 細(xì)胞遷移的能力，見圖7和圖8。

圖7 Transwell試驗檢測敲降CXCL5后對LSCC細(xì)胞遷移能力的影響（免疫組織化學(xué)染色，×100）Fig.7 Detection of effect of CXCL5 knock-down on migration ability of LSCC cells by Transwell test（immunohistochemical staining，×100）

圖8 敲降CXCL5后LSCC細(xì)胞遷移能力的變化Fig.8 Changes of migration ability of LSCC cells after knocking down CXCL5

2.2.5 siRNA 干擾CXCL5對LSCC 細(xì)胞周期的影響CXCL5-homo-438 組的GO／G1、S、G2／M 期所占比例分別為（57.357 ± 0.793）%、（27.833 ± 1.372）%、（14.810±0.754）%；CXCL5-homo-253組的GO／G1、S、G2／M 期所占比例分別為（55.877 ± 0.533）%、（33.907±1.589）%、（10.217±1.056）%；NC 組GO／G1、S、G2／M期所占比例分別為（42.457±0.810）%、（49.807±0.595）%、（7.560±0.472）%。表明CXCL5主要通過G1期對LSCC細(xì)胞進行周期阻滯，2個干擾組與對照組相比，差異均有統(tǒng)計意義（P＜0.01）。見圖9。

圖9 流式細(xì)胞儀檢測敲降CXCL5后對LSCC細(xì)胞周期的影響Fig.9 Detection of effect of CXCL5 knock-down on cell cycle of LSCC cells by flow cytometry

2.2.6 siRNA 干擾CXCL5對LSCC 細(xì)胞凋亡的影響CXCL5-homo-438、CXCL5-homo-253、NC 組的凋亡率分別為（6.110±1.533）%、（6.657±1.671）%、（2.903±0.768）%。表明CXCL5可促進LSCC 細(xì)胞凋亡，2 個干擾組與對照組相比，差異均有統(tǒng)計意義（P＜0.05）。見圖10。

圖10 流式細(xì)胞儀檢測敲降CXCL5后對LSCC細(xì)胞凋亡的影響Fig.10 Detection of effect of CXCL5 knock-down on apop-tosis of LSCC cells by flow cytometry

2.3CXCL5免疫細(xì)胞浸潤分析及其共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)ssGSEA 分析發(fā)現(xiàn)，僅有DC（t= -2.215，P＜0.05）、中性粒細(xì)胞（neutrophils）（t=-3.136，P＜0.01）、NK（t= 2.485，P＜0.05）和Th17（t= -3.186，P＜0.01）免疫細(xì)胞評分在高低表達(dá)2 組樣本間存在差異，見圖11。獲得與CXCL5相關(guān)的20 個基因，見圖12。GO 富集分析顯示，共富集到調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌（regulation of cytokine secretion）、白細(xì)胞遷移（leukocyte migration）、趨化因子——介導(dǎo)的信號通路（chemokine-mediated signaling pathway）、趨化因子應(yīng)激性（response to chemokine）、中性粒細(xì)胞趨化性（neutrophil chemotaxis）等免疫相關(guān)通路。KEGG 富集分析顯示，共富集到病毒蛋白與細(xì)胞因子及細(xì)胞因子受體的相互作用（viral protein interaction with cytokine and cytokine receptor）通路、趨化因子信號通路（chemo kine signaling pathway）、細(xì)胞因子受體相互作用（cytokine-cytokine receptor interaction）通路。見圖13 和圖14。

圖11 免疫細(xì)胞浸潤分析Fig.11 Immune cell infiltration analysis

圖12 CXCL5共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)Fig.12 CXCL5 co-expression network

圖13 共表達(dá)基因GO富集分析Fig.13 GO enrichment analysis of co-expressed genes

3 討論

LSCC 是嚴(yán)重威脅人類健康的一類惡性腫瘤，近年來LSCC 的治療取得了顯著的進展，手術(shù)仍是其治療的主要手段，包括生物治療在內(nèi)的綜合治療已成為可行的選擇［2］。但目前LSCC 的發(fā)病機制仍不十分明確，尚無明確的靶向治療靶點。

本研究通過LSCC 組織免疫組織化學(xué)試驗驗證，與癌旁組織相比，CXCL5在LSCC 組織中的表達(dá)量增高，與TCGA數(shù)據(jù)庫分析一致。通過qPCR檢測，與正常293T 細(xì)胞相比，CXCL5在LSCC 細(xì)胞系A(chǔ)MC-HN-8中的表達(dá)量也明顯上調(diào)。在體外試驗中，通過轉(zhuǎn)染siRNA分析可知，CXCL5可促進LSCC 的增殖、侵襲及遷移，表明與胃癌、胰腺癌等惡性腫瘤一樣，CXCL5可能會成為LSCC潛在的治療靶點之一。

CXCL5 在許多癌癥的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。大量研究表明，在結(jié)直腸癌［9］、胃癌［10-11］、肝癌［12］、胰腺癌［13］、乳腺癌［14］、前列腺癌［15］、膀胱癌［16-17］、肺癌［18］、宮頸癌［19］、膽管癌［20］等惡性腫瘤組織中均高表達(dá)，并與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。有報道表明，在膀胱癌細(xì)胞系T24 中下調(diào)CXCL5的表達(dá)后，可通過Snail、PI3K-AKT 和ERK1／2 信號通路顯著減少細(xì)胞增殖及遷移［16］。在肝癌中，ERK1／2、p38、MAPK 和JNK 通路的激活參與了CXCL5 誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞遷移及侵襲的調(diào)控（ERK1／2 信號通路可能在發(fā)揮更主要的作用），同時在肝癌細(xì)胞系MHCC97H中，通過siRNA下調(diào)CXCL5的表達(dá)可顯著抑制細(xì)胞侵襲及遷移［12］。這與本研究結(jié)果一致，靶向沉默CXCL5的表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移。

有文獻報道，CXCL5／CXCR2生物軸在促進腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移等腫瘤生物學(xué)中發(fā)揮重要作用［8］。CXCL5可結(jié)合CXCR2介導(dǎo)多種細(xì)胞包括中性粒細(xì)胞等招募以及腫瘤細(xì)胞遷移及轉(zhuǎn)移［21］。在結(jié)直腸癌中，CXCL5／CXCR2軸被發(fā)現(xiàn)通過激活ERK／Elk-1／Snail和AKT／GSK3β／β-catenin通路，從而增強結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力，沉默Snail 和／β-catenin信號通路可減弱CXCL5／CXCR2體外增強細(xì)胞遷移及侵襲能力［9，22］。在鼻咽癌中，CXCL5／CXCR2 軸可通過激活ERK／GSK-3β／Snail 信號通路促進腫瘤細(xì)胞遷移及侵襲［21］。但CXCL5／CXCR2生物軸在LSCC 細(xì)胞遷移及侵襲中的確切作用及其潛在機制尚不清楚，需進一步研究。

本研究通過數(shù)據(jù)庫對CXCL5的互作基因分析發(fā)現(xiàn)，人巨噬細(xì)胞金屬彈性蛋白（human macrophage metalloelastase，MMP12）與CXCL5互相影響最大，MMP12能廣泛分解細(xì)胞外基質(zhì)和血管壁成分，促進LSCC 轉(zhuǎn)移［23］，提示CXCL5對LSCC發(fā)展的影響可能是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程。

此外，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）相關(guān)。腫瘤通過TME 導(dǎo)致機體對腫瘤的免疫監(jiān)視及免疫耐受失衡，減弱抗腫瘤免疫反應(yīng)，維持增殖、逃避細(xì)胞凋亡以及保持炎性環(huán)境和血管生成等特征，從而促進腫瘤生長［24-25］，而且腫瘤細(xì)胞的侵襲及遷移也是通過TME中的信號通路啟動和維持的。本研究通過分析發(fā)現(xiàn)，CXCL5在LSCC中的免疫浸潤與DC、Neutrophils、NK 和Th17 免疫細(xì)胞相關(guān)。有文獻報道，免疫細(xì)胞可沿著CXCL5濃度梯度向腫瘤TME 遷移［26］，表明CXCL5 可能通過改變TME導(dǎo)致機體對腫瘤免疫監(jiān)視的逃避過程。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展還與TME 中的血管生成密切相關(guān)，過表達(dá)的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）誘導(dǎo)生成的豐富的血管為腫瘤組織的快速生長提供了更多的血液［11］。多項研究發(fā)現(xiàn)，CXCL5／CXCR2 生物軸在腫瘤血管生成中起重要作用，因CXCL5［屬于ELR+CXC 類趨化因子，是含有ELR 基因序列（Glu-Leu-Arg，谷氨酸-亮氨酸-精氨酸）的一種亞型（CXC趨化因子家族又可分為ELR+和ELR-組，ELR+CXC類趨化因子被認(rèn)為可促進血管生成［6-8］）］及其唯一已知的功能性受體CXCR2 在促血管生成、遷移、侵襲中發(fā)揮作用，CXCL5 通過激活CXCR2促進血管生成，因此有效阻斷CXCL5／CXCR2通路可減少腫瘤的血液供應(yīng)，從而減緩疾病進程［27］。

CXCL5 作為化療藥物的輔助劑，可提高藥物療效，目前受到廣泛關(guān)注［27］。有文獻報道，在肺癌中，中和CXCL5可提高酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼療效，而不會增加相關(guān)副作用［28］。CXCR2 抑制劑可提高橫紋肌肉瘤免疫治療的有效性［29］。阻斷CXCR2 可降低結(jié)直腸癌進展，并增加對鉑類抗癌藥物的敏感性［30］。抑制CXCR2 還可減少粒細(xì)胞向原發(fā)腫瘤區(qū)域的聚集，從而調(diào)節(jié)胰腺管癌的進展［31］。表明CXCL5及其受體CXCR2 在腫瘤惡性進展中具有重要作用，并且有可能成為腫瘤的潛在治療靶點。

隨著越來越多的研究揭示CXCL5與腫瘤的相關(guān)性，其相應(yīng)的信號旁路也逐漸明確。由于CXCL5 高表達(dá)可促進LSCC 增殖、侵襲及遷移，因此CXCL5 可能成為預(yù)測LSCC 發(fā)展的新指標(biāo)及其治療的潛在靶點及策略。