胡方方,李延,崔趁趁,趙冰,張翠蓮,梁琳琳*

近年來,惡性腫瘤治療技術(shù)的進(jìn)步改善了患者的遠(yuǎn)期預(yù)后,但放化療對卵巢功能的損傷已成為新的焦點問題,越來越多的育齡期女性患者開始重視治療后的生育力保存。女性生育力保存包括胚胎冷凍、卵母細(xì)胞冷凍及卵巢組織冷凍,其中,胚胎及卵母細(xì)胞凍存技術(shù)已近成熟,但不適用于兒童、未婚女性及迫切需要治療的腫瘤患者。卵巢組織冷凍保存是繼胚胎和卵母細(xì)胞冷凍技術(shù)之后的另一重大突破,其保存方法主要包括慢速程序化冷凍和玻璃化冷凍。慢速程序化冷凍是較為常見的卵巢組織冷凍方式,目前應(yīng)用卵巢組織冷凍移植技術(shù)出生的嬰兒多來源于此方法。玻璃化冷凍是指在液氮中迅速降溫,利用高濃度冷凍保護(hù)劑將細(xì)胞內(nèi)液態(tài)轉(zhuǎn)化為似玻璃狀的非晶體化固體狀態(tài)。鑒于玻璃化冷凍操作簡便及成本低的特點,其正在逐步試用于臨床實踐。目前卵巢組織冷凍及移植過程中仍存在許多挑戰(zhàn),例如如何降低冷凍及移植后組織的缺血再灌注損傷。本文就人卵巢組織玻璃化冷凍(組織形態(tài)、冷凍保護(hù)劑和冷凍載體)和移植過程(移植部位、卵巢血運、氧化應(yīng)激和臨床因素)中可能存在的影響因素進(jìn)行分析,以期為女性生育力保存項目提供參考方向。

1 組織冷凍

工作人員通過手術(shù)方式取得卵巢組織,去除髓質(zhì)后切割成塊,得到片狀卵巢皮質(zhì),再經(jīng)冷凍保護(hù)劑滲透脫水后冷凍儲存起來,此過程中的每一環(huán)節(jié)都會影響最終的冷凍效果。

1.1 冷凍保護(hù)劑

冷凍保護(hù)劑(cryoprotective agents,CPAs)可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓、誘導(dǎo)細(xì)胞脫水及減少胞內(nèi)冰晶形成等。根據(jù)其滲透原理,可分為滲透性CPAs和非滲透性CPAs。滲透性CPAs包括亞砜類、醇類、酰胺類及甘油等;而非滲透性CPAs包括蔗糖、海藻糖及聚乙烯吡咯烷酮等。二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)和乙二醇(ethylene glycol,EG)是目前最常用的冷凍保護(hù)劑。Whaley等[1]研究發(fā)現(xiàn),低濃度(5%)的DMSO具有增強(qiáng)細(xì)胞膜滲透性和抗氧化活性的特點,而在高濃度(40%)時DMSO則轉(zhuǎn)為促氧化特性,誘導(dǎo)細(xì)胞損傷。Westphal等[2]研究發(fā)現(xiàn),將牛卵巢皮質(zhì)分別在10%DMSO和EG冷凍保護(hù)劑中滲透、冷凍、解凍后在體外培養(yǎng),10%DMSO冷凍組葡萄糖攝取率與新鮮組無差異(均為20%～25%),EG冷凍組低于新鮮組(10%～15% vs 20%～25%,P<0.05),說明10%DMSO能夠充分保護(hù)卵巢皮質(zhì)免受冷凍損傷,EG對皮質(zhì)有一定的保護(hù)作用,但效果低于DMSO。為降低保護(hù)劑的使用濃度,常在滲透性保護(hù)劑中添加非滲透性成分,如蔗糖、海藻糖等。多數(shù)研究發(fā)現(xiàn),10%～20%(v/v)DMSO+10%～40%(v/v)EG+0.2～1 M蔗糖是人卵巢組織玻璃化冷凍較為適用的聯(lián)合方案[3-4],部分還添加人血清白蛋白、甘氨酸等成分。

1.1.1 抗冷凍損傷物質(zhì)的添加 近年來,有學(xué)者嘗試在冷凍保護(hù)劑中添加抗氧化劑、抗冷凍蛋白(anti-freeze protein,AFP)、L-脯氨酸低聚物(L-proline oligomers,L-Pron)等物質(zhì)減輕冷凍損傷。褪黑素作為一種抗氧化劑,在冷凍過程中可減少活性氧對卵泡的損害。Liu等[5]研究發(fā)現(xiàn),將褪黑素加入小鼠卵巢組織冷凍保護(hù)劑中,解凍后0.1 mM褪黑素處理組的原始卵泡率優(yōu)于冷凍對照組(56.1% vs 26.0%,P<0.05)。目前褪黑素已用于卵巢組織、精子及卵母細(xì)胞冷凍。白藜蘆醇作為一種天然活性多酚化合物,具有抗炎、抗腫瘤、強(qiáng)抗氧化和自由基等特性,Wang等[6]研究表明,將白藜蘆醇加入小鼠的冷凍保護(hù)劑中,解凍后該處理組正常形態(tài)的原始卵泡率是對照組的2倍(P<0.05)。AFP能夠控制細(xì)胞外冰晶生長和保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷,而與AFP具有相同聚脯氨酸II螺旋結(jié)構(gòu)的L-Pron應(yīng)用于卵母細(xì)胞的冷凍保護(hù)劑中,發(fā)現(xiàn)有相似作用。Qin等[7]在小鼠的冷凍保護(hù)劑中加入50 mM L-Pro8,發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞存活率提高至99.11%,且處理組細(xì)胞外冰晶的生長速度減慢。除此之外,Tian等[8]研究發(fā)現(xiàn),將海藻鹽水凝膠包裹的小鼠腔前卵泡進(jìn)行玻璃化冷凍,在降低冷凍保護(hù)劑濃度情況下依然約有90%腔前卵泡存活。Rodrigues等[9]研究發(fā)現(xiàn),在玻璃化冷凍過程中使用海藻酸鹽水凝膠封裝斑馬魚卵巢組織,與無封裝的冷凍保護(hù)劑對照組相比,含冷凍保護(hù)劑封裝組和冷凍保護(hù)劑濃度減半的封裝組中丙二醛含量低且無差異[(39.4±4.5) nmol MDA/mg vs (40.5±3.3) nmol MDA/mg,P<0.05]。丙二醛是一種被用作反映氧化應(yīng)激的生物標(biāo)志物,通常用于測量脂質(zhì)過氧化的生成量,說明海藻酸鹽水凝膠封裝技術(shù)不僅能降低冷凍保護(hù)劑的使用濃度,而且能保持膜的完整性。目前,尚無有關(guān)海藻酸鹽水凝膠封裝人類卵巢組織的報道,未來在冷凍過程中是否能利用海藻酸鹽水凝膠封裝卵巢組織以減輕氧化損傷值得進(jìn)一步探索。

1.1.2 滲透平衡溫度及時間的控制 卵巢組織在冷凍保護(hù)劑中的滲透效果與所處的溫度及時間有關(guān)。目前,有關(guān)滲透平衡溫度對卵巢組織玻璃化冷凍效果的研究較少,主要是在室溫下進(jìn)行。Lee等[10]研究發(fā)現(xiàn),將人卵巢組織在室溫下暴露于20% DMSO、20% EG和0.5 M蔗糖中滲透,經(jīng)玻璃化冷凍及解凍后移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)移植物有新生血管形成且保留了形態(tài)完整的原始卵泡。Zhao等[11]將人卵巢組織在室溫下依次暴露于不同冷凍液中平衡(7.5% DMSO和7.5% EG、15% DMSO和15% EG),經(jīng)玻璃化冷凍及解凍后移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi),冷凍組與新鮮對照組在卵泡活力方面無明顯差異(15.3% vs 11.6%,P>0.05)。而有關(guān)卵巢組織在冷凍保護(hù)劑中平衡時間的研究,滲透時間范圍為2～20 min,Mouttham等[12]將貓卵巢皮質(zhì)暴露于CPAs的時間從2 min提高到10 min,明顯改善了冷凍后的卵泡形態(tài)。Behl等[13]比較了人類卵巢組織在冷凍液中不同暴露時間(5 min、10 min、15 min)后對卵泡的影響,發(fā)現(xiàn)10 min組擁有更高的卵泡存活率(分別為3.6%、34.7%、13.8%)和更低的凋亡率(分別為52.1%、31.5%、53.1%)。在實際臨床工作中,滲透平衡時間與保護(hù)劑類型、平衡溫度、組織樣本厚度以及冷凍載體類型均有相關(guān)性。綜上所述,滲透溫度及時間的選擇需要根據(jù)患者卵巢皮質(zhì)的具體情況制定合理的個性化方案。

1.2 冷凍載體

在玻璃化冷凍過程中,冷凍載體是裝載細(xì)胞或組織的裝置。冷凍載體的選擇應(yīng)考慮降溫速率、生物安全性和經(jīng)濟(jì)等方面。根據(jù)卵巢組織是否與液氮直接接觸分為封閉式和開放式載體。封閉式載體不直接與液氮接觸,保證了生物安全性;其材料多由聚丙烯材質(zhì)合成,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性強(qiáng),可耐受低溫,但傳導(dǎo)性差,降溫速率較慢。近年來,學(xué)者開始研究金屬材質(zhì)的封閉式冷凍載體,以期改進(jìn)傳統(tǒng)塑料載體的缺陷。目前,用于人卵巢組織冷凍載體的金屬材質(zhì)主要有銀制[14]、不銹鋼[15]、鈦類[16]等,冷凍后均保留良好的原始卵泡形態(tài)。開放式載體直接與液氮接觸,降溫速率快,但無法避免組織污染的風(fēng)險;目前有針浸式載體、細(xì)胞篩網(wǎng)、冷凍麥管、冷凍環(huán)及商品化載體等。Xiao等[17]設(shè)計的新型針浸式載體,以針灸針承載組織,減少了冷凍保護(hù)劑殘留造成的毒性損傷,改善了載體與組織接觸面積過大導(dǎo)致冷卻速率慢的問題。Sugishita等[15]將用于人卵巢組織的封閉式和開放式載體在冷凍效果方面進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)兩者原始卵泡密度無明顯差異[(16.3±15.2) mm3vs (15.9±14.9) mm3,P>0.05]。由于液氮處于完全開放的環(huán)境,使用開放式冷凍載體會不可避免地遭到微生物污染,盡管已有文獻(xiàn)證明液氮經(jīng)紫外線照射后能夠安全地冷凍人卵母細(xì)胞或胚胎[18],但因為無法完全隔絕生物污染等風(fēng)險,其安全性依然存在隱患。未來在冷凍載體的研發(fā)上,在材料方面可以考慮采用銀、金等傳導(dǎo)性能好的金屬材質(zhì);在設(shè)計方面,盛放組織的載桿部分以中空或網(wǎng)格狀代替密封式,減少冷凍保護(hù)劑殘留,以期改善降溫速率與低毒性兼顧的問題。

1.3 組織形態(tài)

卵巢組織形態(tài)是影響玻璃化冷凍效果的主要因素之一。組織形態(tài)主要包括形狀、大小及厚度。臨床工作者常將組織切割成條形、正方形或碎片狀。Diaz 等[19]總結(jié)了多個國家生殖中心所采用的卵巢組織大小,即① 條形:長寬分別為5～30 mm和1～20 mm;② 正方形:長寬均為5～10 mm;③ 碎片狀:長寬分別為0.5～4 mm和0.3～3 mm;在移植后比較了三者的妊娠率(81.3% vs 45.5% vs 66.7%),發(fā)現(xiàn)條形組織的冷凍及移植效果更好。

目前,卵巢組織冷凍主要采取小皮質(zhì)片冷凍(面積:≤1 cm2,厚度:1～2 mm),較大的組織在滲透效果和實驗室儲存方面存在局限;而較小組織如碎片狀,雖然冷凍效果優(yōu)于大塊皮質(zhì),但其本身因卵泡儲備不足的問題會影響后續(xù)移植效果。Zhao等[11]驗證了人卵巢組織大面積(面積≥1.8 cm2)冷凍的可行性,組織在經(jīng)玻璃化冷凍后未出現(xiàn)明顯的冰晶且保留了約79.6%形態(tài)正常的原始卵泡,這種比率符合其他文獻(xiàn)所述的冷凍后保留70%～90%原始卵泡的數(shù)據(jù)[19]。

厚度不僅關(guān)系到冷凍保護(hù)劑的滲透效果,還影響后續(xù)移植中的新生血管形成。常見的組織厚度為1～2 mm。 Revel等[20]采用卵巢微器官法將人類卵巢組織切割成厚度僅為350 μm的碎片,研究發(fā)現(xiàn)在移植后碎片組織分泌更多的血管生成因子,在3～4天內(nèi)即能形成毛細(xì)血管網(wǎng),且≤1 mm的厚度能確保氧氣及營養(yǎng)物質(zhì)的均勻擴(kuò)散。

2 組織移植

移植后卵巢功能恢復(fù)受到多種因素的影響,如移植部位的選擇、卵巢血運的重建等,這些因素在一定程度上會干擾移植后卵巢組織的生物學(xué)功能。

2.1 移植部位

卵巢組織移植部位關(guān)系到卵巢血運與卵泡微環(huán)境的重建,組織移植根據(jù)供受體關(guān)系分為自體移植、異體移植和異種移植。

2.1.1 自體移植 自體移植,即自身組織再次移回本體,根據(jù)移植部位又可分為原位移植與異位移植。原位移植是將卵巢組織移植到卵巢窩或盆壁腹膜袋等盆腔內(nèi)部位。因解剖結(jié)構(gòu)上與原有結(jié)構(gòu)相似,利于卵泡發(fā)育,增加了自然受孕的可能。2004年Donnez等[21]報道了第一例卵巢組織原位移植的成功案例,該霍奇金淋巴瘤患者在原位移植后5個月恢復(fù)了卵巢功能并生育1女。異位移植主要選擇盆腔外結(jié)構(gòu),常見于腹壁、前臂及腋窩等皮下部位,此外還有腎被膜、腹膜及乳房等部位。相較于原位移植,異位移植解剖部位表淺,更利于卵泡監(jiān)測和卵母細(xì)胞收集。Tammiste等[22]報道了一名28歲乳腺癌患者在性腺毒性治療前接受卵巢組織玻璃化冷凍,后移植到骨盆外側(cè)壁,經(jīng)體外受精-胚胎移植技術(shù)順利生育2子。Demeestere等[23]比較了人卵巢組織原位及異位移植后卵泡生長情況,卵巢原位、皮下和腹膜在同時期超過15 mm的卵泡分別占64%、29%和7%,可見卵泡發(fā)育優(yōu)先在卵巢原位。綜上所述,在考慮卵泡發(fā)育環(huán)境和后續(xù)生育的經(jīng)濟(jì)成本方面,原位移植更為適合。若患者存在各種因素導(dǎo)致無法原位移植的情況,可選擇異位移植并借助輔助生殖技術(shù)獲得臨床妊娠。

2.1.2 異體移植 當(dāng)存在各種無法冷凍保存自身卵巢組織或卵母細(xì)胞的因素,如卵巢早衰,患者若想恢復(fù)生殖與內(nèi)分泌功能,建議考慮同種異體移植。有研究表明,將基因不同但人類白細(xì)胞抗原相容的同卵雙胞胎女性進(jìn)行卵巢同種異體移植,在無免疫抑制治療情況下于移植6月后恢復(fù)了內(nèi)分泌功能[24]。但該方法因存在免疫排斥反應(yīng)和倫理等相關(guān)問題未能在臨床推廣。

2.1.3 異種移植 由于倫理問題尚未解決,異種移植目前僅處于觀察卵泡發(fā)育和評估冷凍移植影響因素的試驗階段,并且若以保存生育力為目的分離其他物種體內(nèi)移植物中的成熟卵母細(xì)胞經(jīng)輔助生殖技術(shù)獲得后代,可能存在病原體感染的風(fēng)險及改變配偶基因型的危險性。

2.2 卵巢血運

與冷凍損傷相比,移植后缺血缺氧對卵巢儲備的損傷更大。因此,促進(jìn)新生血管形成是亟待解決的環(huán)節(jié)。目前關(guān)于促進(jìn)卵巢組織移植后血管生成的研究進(jìn)展有:① 促血管生成生長因子,如血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通過與酪氨酸激酶受體結(jié)合,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖;堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)通過增強(qiáng)bFGF和VEGF受體并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移至缺氧部位以促進(jìn)新生血管形成。Cacciottola等[25]研究發(fā)現(xiàn),在小鼠卵巢組織自體移植時分別添加VEGF、bFGF和兩者聯(lián)合給藥,3組均促進(jìn)新生血管形成,且聯(lián)合給藥組明顯提高卵泡存活率。② 鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是由紅細(xì)胞內(nèi)鞘氨醇激酶催化鞘氨醇合成,能夠保護(hù)玻璃化后卵巢移植物免受缺血再灌注損傷,促進(jìn)新生血管生成[26]。③ Z-VAD-FMK是一種能夠滲透細(xì)胞的半胱天冬酶抑制劑,可抑制由半胱天冬酶激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。研究表明,在異種移植前向小鼠體內(nèi)注射Z-VAD-FMK可改善移植后血管生成、促進(jìn)卵泡增殖以及減少顆粒細(xì)胞凋亡[26]。④ 兩步法方案,有研究表明,在移植前一周于移植部位制造新創(chuàng)面,炎癥可刺激新生血管形成,隨后在創(chuàng)面處進(jìn)行皮質(zhì)片移植,縮短移植后血管生成時間,減少缺血損傷。⑤ 間充質(zhì)干細(xì)胞有促進(jìn)血管生成、分泌生長因子和多譜系分化的能力。Cho等[27]研究發(fā)現(xiàn),向卵巢損傷的大鼠體內(nèi)注射間充質(zhì)干細(xì)胞,與新鮮對照組相比,抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇 (estradiol,E2) 水平顯著升高(P<0.05),說明間充質(zhì)干細(xì)胞能夠恢復(fù)受損卵巢的內(nèi)分泌功能,通過激活PI3K/AKT/mTOR信號通路,促進(jìn)移植后血管生成和卵泡發(fā)育。⑥ 促性腺激素,如Mueller等[28]研究發(fā)現(xiàn), FSH可上調(diào)VEGF、bFGF和FSH受體相關(guān)基因及蛋白表達(dá),改善移植后的卵巢血運。⑦ 處理組織時保留部分髓質(zhì),Mueller等[28]研究發(fā)現(xiàn),與單獨移植牛卵巢皮質(zhì)組相比,含有髓質(zhì)的皮質(zhì)組在冷凍和解凍后都保留了較高的組織形態(tài),且移植后新生血管增加,卵泡存活率增加。

綜上所述,未來在人卵巢組織移植時可以考慮添加促血管生成因子、促性腺激素、S1P、Z-VAD-FMK等物質(zhì),或適當(dāng)保留髓質(zhì),或誘發(fā)炎癥反應(yīng)等方法促進(jìn)血管生成,以期改善移植結(jié)局。

2.3 氧化應(yīng)激

缺血再灌注損傷發(fā)生在移植部位的血運重建之前,是造成卵泡丟失的重要因素之一。在冷凍和移植后加入抗氧化劑能減少氧化應(yīng)激反應(yīng)。常見抗氧化劑有維生素C、維生素E、谷胱甘肽、褪黑素及輔酶Q10等。N-乙酰半胱氨酸為半胱氨酸前體,可合成谷胱甘肽。Olesen等[29]將人卵巢組織異種移植到小鼠體內(nèi),在移植后給予150 mg/kg的N-乙酰半胱氨酸7 d,發(fā)現(xiàn)抗氧化標(biāo)志物、抗凋亡因子及血管生成因子的相關(guān)基因表達(dá)增加,氧化應(yīng)激反應(yīng)減輕。褪黑素作為自由基清除劑,被證明在移植早期可提高卵泡存活率和減少缺血性損傷,移植后期增加卵巢皮質(zhì)大小[30]。

2.4 臨床因素

移植后卵巢組織的壽命和功能還與一些臨床因素相關(guān),如患者年齡、有無接受過性腺毒性治療以及移植碎片的數(shù)量。愛丁堡標(biāo)準(zhǔn)將卵巢組織凍存年齡限定為35歲,該群體女性移植后妊娠率為33%,超過35歲妊娠率僅為18%[31]。卵巢凍存前的放化療可導(dǎo)致卵巢皮質(zhì)纖維化和血管損傷,影響移植后血管生成。因此,在移植前后需要綜合考慮患者的基本情況,制定合理的個性化方案,盡量減少因年齡、放化療后等因素對卵巢造成的額外損傷。

3 組織運輸

冷凍和移植是生育力保存過程中的主要影響因素,除此之外,在卵巢組織摘取之后的運輸及冷凍后的復(fù)蘇過程也是其不可忽略的一部分。

3.1 運輸溫度

靜態(tài)低溫保存(static cold storage,SCS)是目前常用的卵巢運輸和保存的方法,其原理是將組織轉(zhuǎn)移至4～8℃的低溫環(huán)境中,利用低溫分解代謝酶、減緩細(xì)胞新陳代謝及減少氧化應(yīng)激反應(yīng)[32]。溫度與代謝率呈現(xiàn)一定相關(guān)性,在0～4℃時細(xì)胞代謝率降低90%甚至更多[33]。2018年由德國-奧地利-瑞士組成的FertiPROTEKT醫(yī)學(xué)團(tuán)體認(rèn)為4℃是卵巢組織轉(zhuǎn)運的最適溫度[34]。目前有關(guān)人卵巢組織運輸溫度的研究有限,溫度主要在4～37℃之間變化。

3.2 運輸時間

在玻璃化冷凍前,未經(jīng)滲透脫水的卵巢組織置于運輸保存液時間過久會因組織缺血缺氧造成細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體等不可逆性損傷,誘導(dǎo)卵泡凋亡[35]。24 h內(nèi)的卵巢低溫轉(zhuǎn)運是目前大多數(shù)臨床上采取的標(biāo)準(zhǔn)。而Isachenko等[36]驗證了在4℃下低溫運送人卵巢組織26 h的可行性,卵泡雌激素水平與對照組相似(375 pg/mL vs 336 pg/mL)。目前,多數(shù)生殖中心冷凍及移植的成功率表明,低溫下卵巢組織運輸是一個可行方案,但是需要更多的實驗和數(shù)據(jù)驗證人卵巢組織超過26 h轉(zhuǎn)運的有效性。當(dāng)前臨床工作者應(yīng)盡可能節(jié)省運輸時間以防止?jié)撛趽p害。

4 組織復(fù)蘇

組織復(fù)蘇是移植前的關(guān)鍵一步,組織在復(fù)蘇后要盡快移至體內(nèi),臨床工作中常會在移植部位確定后再啟動復(fù)蘇程序,移植手術(shù)和復(fù)蘇時間需要相互協(xié)調(diào),因此,選擇合適的復(fù)蘇程序和時間至關(guān)重要。Perdrix等[37]比較了緩慢及快速兩種復(fù)蘇方案,緩慢復(fù)蘇即將卵巢皮質(zhì)在30℃水浴中預(yù)熱,再依次放入濃度遞減的CPAs中洗滌;而快速復(fù)蘇是將皮質(zhì)在37℃水浴中預(yù)熱,再放入僅有Leibovitz L15培養(yǎng)基中洗滌2次,研究顯示緩慢組和快速組卵泡的形態(tài)正常率分別為97.5%和82.7%,可見CPAs濃度遞減的緩慢復(fù)蘇方案更適合卵巢后期移植。由于冷凍保護(hù)劑成分的多樣性,不同的解凍過程之間毫無可比性。金鳳羽等[38]將冷凍復(fù)蘇后的人卵巢組織分別在體外培養(yǎng)0 min、20 min、40 min、60 min,與新鮮組相比,復(fù)蘇后不同的時間點卵泡數(shù)和雌激素水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。因此,臨床工作者可以考慮移植手術(shù)與復(fù)蘇程序同時啟動,嚴(yán)格等待移植部位確定再復(fù)蘇可能是不必要的。

5 總結(jié)與展望

卵巢組織冷凍保存是生育力保存的重要方法之一,是青春期前女性及迫切需要進(jìn)行放化療的育齡期惡性腫瘤患者的唯一選擇。但該項技術(shù)從實驗室走向臨床僅僅數(shù)十年,仍需深入研究生育力保存過程中的影響因素。本文從4個方面闡述了影響卵巢皮質(zhì)運輸、冷凍、復(fù)蘇及移植的可能因素,由于目前仍無統(tǒng)一的組織保存及移植標(biāo)準(zhǔn),且多數(shù)研究僅限于試驗驗證階段,生育力保存依然任重而道遠(yuǎn),未來應(yīng)該致力于提高卵泡安全性,根據(jù)患者的具體情況,制定合理的個性化方案。