楊玉萍，段永強(qiáng)，梁建慶＊＊，白 敏，馮 鑫，曹力仁，虎峻瑞，范紅麗

（1. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 蘭州 730000；2. 甘肅省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)技術(shù)中心 蘭州 730000；3. 寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 銀川 750004）

原發(fā)性肝癌（Primary liver cancer，PLC）是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率高居國內(nèi)惡性腫瘤第二位[1-3]，中國占全球發(fā)病率的48.4%以上[4]。其作為最常見的消化道惡性腫瘤，早期起病隱匿，發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期，西醫(yī)常規(guī)治療首選手術(shù)及放化療，但由于確診時(shí)患者肝癌已處于晚期，常規(guī)治療對患者的傷害較大，且復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高[5]，其中對不能進(jìn)行肝移植患者，只能用靶向藥物（索拉非尼和倫伐替尼）給肝癌患者進(jìn)行治療，但僅能延長患者生存期2-3個(gè)月[6]，并且對全身各個(gè)系統(tǒng)都產(chǎn)生不同程度的損傷，其中對免疫系統(tǒng)的影響最為顯著[7]，極大地降低了患者的生活質(zhì)量，而中醫(yī)藥有明顯的減毒增效特性，能夠提高患者生活質(zhì)量，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，減輕手術(shù)、放化療等不良反應(yīng)，同時(shí)延長患者生存時(shí)間以及提高生存率[6,8]，因此在治療腫瘤免疫抑制方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢和不可或缺的地位。

《金匱要略·婦人妊娠病脈證并治第二十》篇中載：“妊娠，小便難，飲食如故，當(dāng)歸貝母苦參丸主之”。吳紅彥教授結(jié)合臨床精究此段文意，并在長期的疾病診療中，認(rèn)識到腫瘤之核心病機(jī)與當(dāng)歸貝母苦參丸主治之證有諸多相似之處，只不過腫瘤的虛象和瘀象更加明顯。故此，吳教授在當(dāng)歸貝母苦參丸的基礎(chǔ)上加減化裁，創(chuàng)立了治療腫瘤疾病的常用方——參芪抑瘤方。此方由黃芪、當(dāng)歸、貝母、苦參、山慈菇等藥組成，方中重用黃芪補(bǔ)肺健脾，扶正益氣；貝母入肝經(jīng)，化痰散結(jié)，苦參清熱燥濕解毒；當(dāng)歸補(bǔ)血活血，山慈菇清熱化痰、軟解散結(jié)，諸藥相配，攻補(bǔ)兼施，共奏補(bǔ)氣活血，扶正祛邪，解毒散結(jié)之功。前期課題組研究已表明參芪抑瘤方在抑制腫瘤生長、改善機(jī)體免疫力、防止腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等方面具有一定的療效[9-11]。但關(guān)于其具體的機(jī)制尚不明晰，而HMGB1/TLR4/NF-κB信號作為抑制免疫發(fā)揮作用的經(jīng)典通路，在腫瘤的發(fā)病過程中具有十分重要的作用，因此，深入研究HMGB1/TLR4/NF-κB 信號通路在H22 肝癌荷瘤小鼠病理反應(yīng)中的作用機(jī)制，并應(yīng)用參芪抑瘤方進(jìn)行干預(yù)，這有助于從新的角度認(rèn)識肝癌的發(fā)病本質(zhì)，并為采取積極的治療措施提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞及藥物

SPF級雄性KM 小鼠，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號：SCXK(甘)2020-0009，倫理審查批準(zhǔn)號：2021-205，70日齡，體重18-22 g。H22肝癌細(xì)胞株，購自武漢普諾賽生命科技有限公司（BRF1A0KT3Q）。

參芪抑瘤方所有藥材均購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，并經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中藥生藥學(xué)教研室李岳峰教授鑒定為正品，黃芪30 g、當(dāng)歸20 g、山慈菇10 g、土貝母10 g、苦參15 g、八月札30 g、莪術(shù)10 g、半枝蓮20 g、白術(shù)18 g、枳殼12 g、人參15 g。所有藥材按比例加水煎煮，濃縮至含生藥量2.5 g·mL-1，裝瓶，4℃保存?zhèn)溆谩Ｗ⑸溆庙樸K（購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，OKO554B03）。

1.1.2 試劑與儀器

試劑：RIPA裂解液（Cat#R0010）、BCA蛋白濃度測定試劑盒（Cat#PC0020）、4×蛋白質(zhì)上樣緩沖液（P1016），北京索萊寶科技有限公司；HMGB1（Cell Signaling Technology，6893S）、TLR4（GTX64330）、MyD88（ImmunoWay，YT2928）、NF-κB（Cell Signaling Technology，8242S）、β-actin（ImmunoWay，YM3028）、羊抗兔二抗(ImmunoWay，HRP-conjugated affinipure goat anti-rabbit IgG（H+L），RS0002)；ECL 化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒（Lot NO:57105010）；FITC-CD3+（Lot:A10913）APC-CD4+（Lot:A10811）與Anti-Mouse-CD8+（Lot:A10514）單克隆抗體，聯(lián)科生物；總RNA 提取試劑盒（Lot#W9414）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（LOT：G7106010）；實(shí)時(shí)qPCR Mix（LOT：H9114010）。

儀器：電泳儀（041BR69450）、VE-180 型垂直板電泳裝置（153BR111209）、酶標(biāo)儀（iMark）、伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司；GeLView 6000 plus 凝膠成像系統(tǒng)，廣州博鷺騰生物科技有限公司；高端分析型流式細(xì)胞儀（FACSCelesta），美國BD 公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（CG-05），杭州晶格科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 復(fù)制H22肝癌荷瘤小鼠模型

復(fù)蘇H22 肝癌細(xì)胞，細(xì)胞復(fù)蘇后，將細(xì)胞濃度調(diào)至1×107·mL-1，每只KM小鼠腹腔接種0.2 mL。腹腔傳至第三代，抽取淡黃色腹水，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，選取上述最佳細(xì)胞濃度3×106·mL-1，每只小鼠消毒后于右側(cè)腋窩接種細(xì)胞懸液0.1 mL，待觸到黃豆大小腫塊提示模型復(fù)制成功[12]，可納入實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.2 小鼠分組及干預(yù)

50 只SPF 級雄性KM 小鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法取10 只小鼠作為空白組，（0.1 mL·10 g-1，qd，生理鹽水灌胃），其40只小鼠復(fù)制H22肝癌荷瘤小鼠模型，模型復(fù)制成功后將模型小鼠隨機(jī)分為模型組（0.1 mL·10 g-1，qd，生理鹽水灌胃）、順鉑組（0.1 mL·10 g-1，biw，腹腔注射2.5×10-3g·kg-1）、參芪抑瘤方組（含生藥2.5 g·mL-1，0.1 mL·10 g-1，qd，灌胃）以下簡稱中藥組）、參芪抑瘤方（含生藥2.5 g·mL-1，0.1 mL·10 g-1，qd，灌胃）+順鉑組（0.1 mL·10 g-1，biw，腹腔注射2.5×10-3g·kg-1）（以下簡稱聯(lián)合組）。順鉑和參芪抑瘤方給藥均按照人與動(dòng)物體質(zhì)量進(jìn)行折算[13]，順鉑給藥量為2.5×10-3g·kg-1，參芪抑瘤方給藥量為27.03 g·kg-1?？瞻捉M與模型組均給予相同體積生理鹽水灌胃及腹腔注射，連續(xù)干預(yù)13天，末次給藥24 h 后，用戊巴比妥鈉（每只0.2 mL）麻醉處死小鼠，取材待檢。

1.2.3 腫瘤抑瘤率及臟器指數(shù)測定

在無菌環(huán)境下完整剝離出小鼠瘤組織和臟器組織，電子天平秤重后計(jì)算抑瘤率和臟器指數(shù)。抑瘤率(IR)=[模型組瘤質(zhì)量(g)-用藥組瘤治療(g)]/模型組瘤質(zhì)量(g)×100%]，臟器指數(shù)=[臟器質(zhì)量(㎎)/小鼠體質(zhì)量(g)][14]。

1.2.4 HE染色觀察各組小鼠腫瘤組織病理學(xué)變化

腫瘤組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片后用蘇木精和伊紅染色，封片。光鏡下觀察腫瘤組織形態(tài)學(xué)變化。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測脾組織CD4+、CD8+細(xì)胞水平

摘取新鮮脾臟并用300目細(xì)胞篩網(wǎng)研磨，用PBS沖洗篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106mL，分別用CD3 偶聯(lián)FITC、CD4 偶聯(lián)APC、CD8 偶聯(lián)PE 染色30 min，檢測CD3+、CD4+、CD8+T 細(xì)胞的比例，通過測量T 細(xì)胞總數(shù)（CD3+細(xì)胞）中CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞的百分比來計(jì)算結(jié)果。

1.2.6 Western blot檢測腫瘤組織中相關(guān)蛋白表達(dá)

稱取腫瘤組織，蛋白裂解液裂解，并定量變性，通過SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜，封閉，一抗4℃孵育過夜，1×TBST 洗膜，二抗（1∶20000）室溫孵育1 h。用1×TBST 洗滌后，加入ECL 發(fā)光溶液并用凝膠成像儀曝光。采用Image J 8.0分析蛋白條帶灰度值。

1.2.7 RT-PCR檢測腫瘤組織中相關(guān)mRNA表達(dá)

稱取腫瘤組織，提取RNA，超微光學(xué)分光光度計(jì)測量總RNA 濃度。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。GAPDH 為內(nèi)參基因，每組相同基因設(shè)4 個(gè)重復(fù)，根據(jù)RT-PCR 擴(kuò)充試劑盒說明擴(kuò)增靶基因，并計(jì)算每個(gè)mRNA 的相對表達(dá)。引物由上海百賽生物技術(shù)股份有限公司公司合成，序列見表1。

表1 引物序列

2 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS 24.0 軟件處理，并采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，圖片采用Image J 8.0處理。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠腫瘤病理學(xué)特征的變化

HE 染色顯示，在模型組中，腫瘤組織細(xì)胞排列緊密，邊界清晰，核大漿少，核深染，未見壞死區(qū)域（圖1A）；在順鉑組腫瘤細(xì)胞排列疏松，邊界模糊，細(xì)胞核出現(xiàn)縮小破裂現(xiàn)象，出現(xiàn)壞死細(xì)胞現(xiàn)象（圖1B）；中藥組腫瘤細(xì)胞壞死不明顯（圖1C）；在聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞核固縮破裂明顯，且不同程度出現(xiàn)片狀壞死區(qū)域（圖1D）。用Image J 8.0 進(jìn)行腫瘤細(xì)胞核數(shù)目占比分析，與模型組相比，各治療組腫瘤細(xì)胞核數(shù)目均減少，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與順鉑組和中藥組相比，聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞核數(shù)目減少顯著（P<0.05）（見表2）。

圖1 H22肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織學(xué)變化（HE，×400）

表2 腫瘤細(xì)胞核數(shù)目占比（±s，n=6）

表2 腫瘤細(xì)胞核數(shù)目占比（±s，n=6）

注：與模型組相比，*P<0.05；與順鉑組相比，#P<0.05；與中藥組相比，&P<0.05。

細(xì)胞核占比（%）-39.39±1.833 27.67±0.91*33.83±2.36*24.75±2.22*#&組別空白組模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組

3.2 各組小鼠體質(zhì)量、瘤體積及抑瘤率的變化

與模型組相比，各治療組平均瘤質(zhì)量均降低（P<0.05）見表3。與模型組相比，各治療組小鼠瘤體積均減小，聯(lián)合用藥組小鼠瘤體積減小顯著（P<0.05），見圖2A；與模型組相比，各治療組小鼠體質(zhì)量均升高，聯(lián)合用藥組升高明顯（P<0.05），見圖2B。

圖2 各組小鼠瘤體積和體質(zhì)量變化

表3 各組瘤質(zhì)量和抑瘤率（±s，n=10）

表3 各組瘤質(zhì)量和抑瘤率（±s，n=10）

注：與模型組相比，*P<0.05。

組別空白組模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組瘤質(zhì)量（g）-5.30±1.16 3.01±0.88*4.11±1.31*2.44±0.93*抑瘤率（%）--43.15%22.32%53.97%

3.3 各組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的變化

與空白組相比，模型組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)均降低（P<0.05）；與模型組和順鉑組相比，中藥組和聯(lián)合用藥組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均升高（P<0.05）；與中藥組相比，聯(lián)合組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表4。

表4 各組小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)（±s，n=10）

表4 各組小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)（±s，n=10）

注：與空白組相比，￥P<0.05；與模型組相比，*P<0.05；與順鉑組相比，#P<0.05。

組別空白組模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組脾指數(shù)（mg·g-1）8.59±2.02 4.00±2.69￥3.45±1.71 7.34±3.08*#6.94±2.75*#胸腺指數(shù)（mg·g-1）2.51±0.93 0.79±0.29￥0.70±0.40 2.13±0.92*#1.53±0.53*#

3.4 各組小鼠脾脾淋巴細(xì)胞亞群水平的變化

流式結(jié)果顯示（圖3、表5），與空白組相比，模型組小鼠脾臟組織中CD4+T細(xì)胞水平降低，CD8+T細(xì)胞水平升高（P<0.05）；與模型組和順鉑組相比，中藥組和聯(lián)合組小鼠脾臟組織中CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+比值均升高，CD8+T細(xì)胞水平降低（P<0.05）；與中藥組相比，聯(lián)合組小鼠脾臟組織中CD4+T細(xì)胞水平、CD4+/CD8+比值降低，CD8+T 細(xì)胞水平升高（P>0.05）。結(jié)果表明，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫方面，單用中藥略優(yōu)于聯(lián)合用藥。

圖3 各組小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群水平變化

表5 各組小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群水平變化（±s，n=3）

表5 各組小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群水平變化（±s，n=3）

注：與空白組相比，￥P<0.05；與模型組相比，*P<0.05；與順鉑組相比，#P<0.05。

組別空白組模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組CD4+24.73±1.00 19.13±0.38￥17.77±1.99 24.17±3.10*#21.57±1.70#CD8+18.17±1.33 25.17±2.59￥27.30±1.97 19.90±1.44#22.00±2.85*#CD4+/CD8+1.52±0.15 0.77±0.07￥0.65±0.07 1.21±0.09*#1.00±0.20*#

3.5 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對H22 肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κBmRNA 表達(dá)的影響

RT-PCR 結(jié)果顯示（表6），與模型組相比，各治療組瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB mRNA 表達(dá)均降低（P<0.05）；與順鉑組相比，聯(lián)合組瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB 蛋白表達(dá)均降低（P<0.05）；與中藥組相比，聯(lián)合組瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB 蛋白表達(dá)均降低（P<0.05）。

表6 各組小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB mRNA的表達(dá)變化（±s，n=4）

表6 各組小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB mRNA的表達(dá)變化（±s，n=4）

注：與模型組相比，*P<0.05；與順鉑組相比，#P<0.05；與中藥組相比，&P<0.05。

NF-κB/GAPDH 1.00±0.00 0.64±0.04*0.87±0.05*0.47±0.03*#&組別模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組HMGB1/GAPDH 1.00±0.00 0.57±0.03*0.83±0.05*0.32±0.02*#&TLR4/GAPDH 1.00±0.00 0.74±0.05*0.91±0.07*0.61±0.06*#&MyD88/GAPDH 1.00±0.00 0.48±0.03*0.75±0.10*0.37±0.02*#&

3.6 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對H22 肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表達(dá)的影響

Western Blot 結(jié)果顯示（圖4，表7），與模型組相比，各治療組瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NFκB 蛋白表達(dá)均降低（P<0.05）；與順鉑組相比，聯(lián)合組HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB 蛋白表達(dá)降低（P<0.05）；與中藥組相比，聯(lián)合組HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB 蛋白表達(dá)降低（P<0.05）。結(jié)果表明單用參芪抑瘤方或順鉑能夠降低瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB 蛋白表達(dá)水平，抑制炎性反應(yīng)，但聯(lián)合用藥組治療效果顯著。

圖4 參芪抑瘤方對H22肝癌小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表達(dá)影響圖譜

表7 參芪抑瘤方對H22肝癌小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表達(dá)影響（±s，n=3）

表7 參芪抑瘤方對H22肝癌小鼠腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表達(dá)影響（±s，n=3）

注：與模型組相比，*P<0.05；與順鉑組相比，，#P<0.05；與中藥組相比，&P<0.05。

組別模型組順鉑組中藥組聯(lián)合組HMGB1/β-actin 1.42±0.06 0.87±0.04*1.06±0.05*0.56±0.04*#&TLR4/β-actin 1.13±0.04 0.75±0.02*1.05±0.05*0.54±0.08*#&MyD88/β-actin 1.46±0.07 0.94±0.04*1.08±0.21*0.53±0.03*#&NF-κB/β-actin 1.34±0.07 0.99±0.03*1.01±0.03*0.63±0.04*#&

4 討論

肝癌屬于中醫(yī)“積聚”、“肝積”等范疇。特別是近年來，隨著中醫(yī)藥的發(fā)展和臨床的廣泛應(yīng)用，相較于西醫(yī)治療后雖能取得一定的宏觀效果，但其不良反應(yīng)明顯、復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高等特點(diǎn)[5]，5 年生存率僅為10.1%[15]，中醫(yī)藥治療能改善患者臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，延長患者生存時(shí)間的優(yōu)勢正更加突出[16]。此已被國內(nèi)的診療指南所推薦[17]。因此，中西醫(yī)結(jié)合療法已成為臨床治療腫瘤的一種有效手段。本實(shí)驗(yàn)通過小鼠腹腔注射H22 肝癌細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳至第3 代，收集細(xì)胞，于小鼠右側(cè)腋窩皮下種植的方法復(fù)制H22 肝癌荷瘤小鼠模型，并給與參芪抑瘤方和順鉑進(jìn)行干預(yù)治療，本研究結(jié)果顯示，各治療組小鼠的腫瘤抑制率為43.15%、22.31%、53.97%，與模型組相比，各治療組小鼠平均瘤質(zhì)量均下降，且聯(lián)合組對腫瘤抑制效果顯著（P<0.05），表明參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑能有效抑制腫瘤生長，且優(yōu)于單用參芪抑瘤方或順鉑；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑顯著抑制瘤體的生長，病理檢測同樣證實(shí)了這一結(jié)論。

順鉑作為臨床治療腫瘤疾病的一線化療藥，能有效抑制癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡，但其選擇性差，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，損害正常組織細(xì)胞和免疫器官，且具有免疫抑制作用[7,18]。脾臟和胸腺作為機(jī)體最大的免疫器官，主要通過淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫功能，其臟器指數(shù)通常用于評價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)[19]。T 淋巴細(xì)胞對于維持機(jī)體正常免疫功能至關(guān)重要[20]，其中CD4+為輔助性T 細(xì)胞，主要通過促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，CD8+為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，具有免疫抑制作用，CD4+T 和CD8+T 淋巴細(xì)胞相互制約，共同調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡[21]，其比值能夠直接用于評價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)[20,22]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與空白組小鼠比較，H22 肝癌荷瘤小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、CD4+T 細(xì)胞水平以及CD4+/CD8+值顯著降低、CD8+T 細(xì)胞水平升高，這與既往的研究結(jié)果一致[9-11]。而參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑給藥干預(yù)后，H22 肝癌荷瘤小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、CD4+T細(xì)胞水平以及CD4+/CD8+值不同程度升高、CD8+T細(xì)胞水平降低，表明參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑顯著改善了H22肝癌荷瘤小鼠機(jī)體免疫狀態(tài)。

高遷移率族蛋白B1（High mobility group protein，HMGB1）是一種高度保守的核蛋白，廣泛存在并參與許多疾病的發(fā)展，尤其在惡性腫瘤中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，且參與炎癥、免疫、增殖、轉(zhuǎn)移和自噬等多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)[23-24]。惡性腫瘤組織中HMGB1的釋放，可能與TLR4/MyD88/NF-κB 通路相關(guān)[25]，其主要作用是誘導(dǎo)機(jī)體免疫抑制。TOLL 樣受體4（Tolllike receptor 4，TLR4）能夠通過髓分化因子88（Recombinant myeloid differentiation factor 88，MyD88）激活核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)及免疫抑制作用[26-27]，而TLR4 作為內(nèi)源性HMGB1 受體[28]，能夠結(jié)合HMGB1 激活NF-κB信號通路，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[29]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)各治療組能有效降低腫瘤組織中HMGB1、TLR4、MyD88 和NF-κB mRNA 和蛋白表達(dá)，且聯(lián)合用藥組效果顯著（P<0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑可能通過抑制HMGB1/TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)而抑制腫瘤生長。

綜上所述，參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑能有效抑制腫瘤的生長，調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群平衡，逆轉(zhuǎn)免疫抑制并增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，改善腫瘤微環(huán)境，提高機(jī)體免疫功能，其機(jī)制可能與抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路活化有關(guān)。