胡欣 徐華 馮娜 丁瑾 李鳳琴(陜西省血液中心，陜西 西安 710000)

2020 年2 月11 日，世界衛(wèi)生組織總干事譚德塞在瑞士日內(nèi)瓦宣布，將新型冠狀病毒感染正式命名為“corona virus disease 2019，COVID-19”[1]。 2020 年2 月22 日，國家衛(wèi)生健康委發(fā)布通知，將“新型冠狀病毒感染”英文名稱修訂為“COVID-19”。 新冠病毒感染根據(jù)臨床癥狀和影像學檢查等分為輕型、普通型、重型、危重型4 類[2]。 沒有明顯的呼吸道癥狀，沒有明顯的發(fā)熱、咳嗽、咳痰、胸悶、氣喘、呼吸困難的癥狀可被定義為無癥狀感染者。 對于這類患者仍然有一定的傳染性，要采取隔離治療的措施，防止疾病傳染給其他人群。 為進一步做好新冠病毒感染重癥患者醫(yī)療救治血漿儲備應用，指導各地規(guī)范開展新冠病毒感染康復者恢復期血漿采集治療工作，保障采漿工作人員和獻血漿者安全，國家衛(wèi)生健康委組織專家在全面總結(jié)恢復期血漿采集治療工作經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，結(jié)合疫情形勢變化及研究進展，對治療方案進行修訂[3-5]。

在2020 年新冠病毒疫情爆發(fā)至今，陜西省血液中心不間斷開展新冠病毒感染康復者恢復期血漿采集工作，所采集的血漿已發(fā)往全國，用于新冠病毒感染重癥、危重癥患者的救治。 2021 年12 月3 日，陜西省遭受新一輪新冠病毒的侵襲，此次新冠病毒屬于德爾塔變異株，傳播力強，日確診病例最高達2 188 例，其中無癥狀感染者、輕型占絕大多數(shù)。 本中心與陜西省第四醫(yī)院，西安秦皇醫(yī)院，長安區(qū)醫(yī)院等康復醫(yī)院及多個集中隔離點密切配合，共同開展恢復期血漿捐獻者的宣傳、招募與采集工作。 自2022 年1 月24 日—2 月21日，本站共采集新冠病毒感染康復者恢復期血漿183 人次，69 800 mL，其中30 人于2022 年4 月22—28 日再次捐獻，同時對恢復期患者的血漿病毒抗體效價做一檢測，本研究結(jié)合患者的年齡、性別等與其效價之間的關(guān)系做一初步探索。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇西安市中心血站2022 年1 月24 日—2 月21 日采集的183 份新冠病毒感染康復者恢復期血漿標本為研究對象。 捐獻者均已簽署《獻血者知情同意及健康狀況征詢表》，同意血液中心按規(guī)定對血液標本進行科學相關(guān)檢測及使用。 捐獻者中145 名男性，38 名女性，年齡18 ～52 歲，平均年齡30 歲，95%籍貫源自陜西，見表1。

表1 采集時間及重復采集間隔

1.2 試劑及儀器 新型冠狀病毒IgM 抗體檢測試劑盒(批號:20220103)、IgG 抗體檢測試劑盒(批號:20220102)、中和抗體檢測試劑盒(批號:20220101)； iFlash 3000-C 化學發(fā)光免疫分析儀，以上試劑與儀器均為深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 病例診斷及分型 根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會頒布的新冠診療方案[4]中病例診斷標準及臨床分型標準，開展病例診斷及臨床分型。 183 名康復者中根據(jù)臨床分型可分為:輕型94 名(51.37%)、普通型56 名(30.60%)、重型2 名(0.11%)、無癥狀感染者31 名(16.9%)。

1.3.2 標本來源、采集與處理 按照采漿時間順序，選取38名女性38 名男性獻血志愿者作為研究對象。 從連接單采新冠病毒感染患者恢復期血漿成品袋的導管中留取10 mL 標本并在－20℃冰凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 檢測方法 采用直接化學發(fā)光技術(shù)的一步競爭免疫法對IgG、IgM 和中和抗體進行體外定性檢測。 抗體效價表示單位:AU/mL。

1.3.4 IgG 抗體滴度與抗體效價關(guān)系評估方法 參照文獻[7]，用于臨床治療新冠病毒血清/血漿IgG 抗體定性檢測呈陽性，且160 倍稀釋后檢測仍為陽性。 采用本文試劑盒對不同IgG 抗體濃度標本稀釋后測定，結(jié)果表明原倍抗體效價＞300 AU/mL 時，160 倍稀釋后檢測仍為陽性，即IgG 抗體效價＞300 AU/mL 時滿足血漿治療要求。

1.4 統(tǒng)計學分析 使用SPSS 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。 對計量資料進行采用Kolmogrov-Smirnov 和Shapiro-Wilk 正態(tài)性檢驗，3 種指標IgG、IgM 和中和抗體均不符合正態(tài)性分布?？刹捎弥形粩?shù)及四分位數(shù)表示M(P25、P75)進行描述，分類變量2 組間差異比較采用非參數(shù)秩和檢驗(Mann-Witney U)，相關(guān)標本組間差異采用非參數(shù)檢驗的Wilcoxon 秩和檢驗。 IgG、IgM 和中和抗體與性別年齡相關(guān)性分析采用Spearman 秩相關(guān)分析法。 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別康復者血漿3 種抗體效價比較 按照采漿時間順序，選取38 名女性、38 名男性獻血志愿者作為研究對象。 正態(tài)性檢驗表明，IgG、IgM 和中和抗體不符合正態(tài)分布，采用非參數(shù)秩和檢驗(Mann-Witney U)進行組間比較。 結(jié)果顯示不同性別康復者血漿IgG、IgM 和中和抗體效價比較無差異(P＞0.05)，見表2。

表2 不同性別康復者血漿IgG、IgM 與中和抗體效價比較

2.2 年齡、感染間隔與3 種抗體效價的相關(guān)性 采用非參數(shù)檢驗的Spearman 相關(guān)系數(shù)檢驗年齡、感染間隔(感染時間距離采集時間的天數(shù))與3 種抗體效價的相關(guān)性。 其中感染間隔是指感染時間距離采樣時間的天數(shù)。 年齡與感染間隔均和3 種抗體效價之間無顯著相關(guān)性。 中和抗體與IgG 具有弱的正相關(guān)(P＜0.05)，見表3、表4。

表3 年齡與IgG、IgM 及中和抗體之間的相關(guān)性

表4 感染間隔與IgG、IgM 及中和抗體之間的相關(guān)性

2.3 重復捐獻者3 種抗體捐獻前后差異 采用非參數(shù)檢驗的Wilcoxon 秩和檢驗。 3 種抗體效價水平再次捐獻均低于首次捐獻(P＜0.05)。 單從IgG 效價看，再次捐獻抗體效價中位數(shù)仍＞300 AU/mL，滿足臨床治療要求，見表5。

表5 重復捐獻前后3 種抗體效價比較

3 討論

本研究結(jié)果顯示不同性別、年齡的新冠病毒感染康復者恢復期3 種抗體效價水平無差異(P＞0.05)，且IgG 抗體中位數(shù)＞300 AU/mL。 因而在選擇新冠病毒感染康復者恢復期血漿捐獻者時可不對其性別、年齡進行限制，捐獻的血漿均可用于急、危重癥患者的臨床救治。 康復者恢復期血漿3 種抗體水平與感染間隔不相關(guān)。 按照感染時間段，在183 名捐獻者中，2021 年12 月7 日—12 月30 日期間感染93 人，占50.82%，在2022 年1 月1—5 日感染36 人(19.67%)，2022年1 月6 日以后有9 人(4.92%)。 本次患者感染時間集中在2021 年12 月下旬，采集時間在2022 年1 月24 日—2022 年2月21 日。 在183 份標本中感染時間距離采集時間最長的是63 d，最短的是25 d。 183 份血漿效價水平均滿足臨床應用要求，表明在距離感染時間最長63 d 的范圍內(nèi)，3 種抗體水平相對穩(wěn)定，充分利用該時間段進行血漿采集工作對于保證血漿抗體水平具有重要意義。 再次捐獻者與首次捐獻者抗體效價有差異性(P＜0.05)，抗體水平明顯下降約占30%左右，但IgG 水平仍滿足臨床應用要求。 本中心再次采集的時間是在2022 年4 月25 日，重復捐獻者2 次采集時間間隔最短為62 d，最長為91 d，根據(jù)時間周期康復者體內(nèi)的病毒抗體效價隨時間推移在逐漸減少，但衰減的速度慢，周期長，表明在3 個月內(nèi)重復捐獻血漿都具有臨床價值。 所以當出現(xiàn)急重癥患者增多的情況下，可動員更多符合條件的志愿者進行血漿捐獻。

恢復期血漿療法用于傳染病的治療已經(jīng)有100 多年的歷史。 近20 年來，這一經(jīng)典療法又被用于嚴重急性呼吸綜合征(SARS)、H1N1、H5N1、H7N9 禽流感、中東呼吸綜合征(MERS)等新發(fā)突發(fā)傳染病，取得了一定的療效。 當缺乏有效的特異性抗病原體藥物時，尤其是新發(fā)傳染病暴發(fā)流行時，恢復期血漿療法可能是搶救危重癥患者的唯一選擇。 國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的新型冠狀病毒感染診療方案明確提出康復者血漿治療適用于病情進展較快、重型和危重型患者[7]。 同時，新冠病毒感染康復者血漿中已檢測出高效價病毒中和抗體，實驗證明能有效殺死新冠病毒，目前臨床用康復者血漿治療的中型和危重型患者，效果顯著。 因采集時間有限，且臨床分型中輕型患者占多數(shù)，可能會對結(jié)果產(chǎn)生一些影響，未來將在采集時間間隔與3 種病毒抗體相關(guān)性做一研究，也可為最佳采集時間提供數(shù)據(jù)支持，為急、重癥新冠病毒感染患者的治療尋找新突破。 另外因標本的局限性，不能對不同變異株的情況進行比較分析，后續(xù)也會對此進一步開展相關(guān)研究。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。