陳 明，葉小敏

（湖北省武漢藥品醫(yī)療器械檢驗所·國家藥品監(jiān)督管理局藥物制劑質(zhì)量研究與控制重點實驗室，湖北 武漢 430073）

復(fù)方甘草片的成分包括甘草浸膏粉、阿片粉或罌粟殼提取物粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉，收載于2020 年版《中國藥典（二部）》［1-2］，為臨床常用鎮(zhèn)咳祛痰藥，價格便宜，療效確切，臨床使用量大。2005 年，我國將復(fù)方甘草片升級為處方藥管理，且在2009年、2013年和2014 年先后3 次發(fā)文，以加強(qiáng)復(fù)方甘草片的購銷管理［3-5］。其主要不良反應(yīng)為輕微的惡心嘔吐，亦可引起過敏性休克、藥物依賴等。為此，國家藥品監(jiān)督管理局于2020 年3 月發(fā)布了修訂復(fù)方甘草片藥品說明書的公告［6］。藥品中殘留的重金屬及有害元素嚴(yán)重威脅人類的健康，可誘發(fā)人體肺、肝、腎、神經(jīng)系統(tǒng)損害等嚴(yán)重不良反應(yīng)［7-10］。復(fù)方甘草片中的甘草浸膏粉由中藥材甘草制得，其含量約占處方總量的91.84%，2020 年版《中國藥典（一部）》甘草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對鉛（Pb）、鎘（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、銅（Cu）的含量進(jìn)行了控制。有文獻(xiàn)報道，國內(nèi)外不同產(chǎn)地共20 批甘草中，Pb 含量超出限度（5 mg/ kg）的樣品有15 批［11］。故有必要對復(fù)方甘草片中的重金屬及有害元素進(jìn)行含量測定，并進(jìn)行風(fēng)險分析，探討重金屬及有害元素與藥品不良反應(yīng)間的相關(guān)性。電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法為測定藥物中重金屬及有害元素的主要方法，具有靈敏度高、分析速度快、抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點［12］。本研究中建立了采用微波消解法對樣品進(jìn)行前處理，測定復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu含量的ICP-MS法，并結(jié)合2020年版《中國藥典（四部）》通則9302 中藥有害殘留物限量制定指導(dǎo)原則［13］，擬訂了復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu的參考限度，為復(fù)方甘草片中重金屬及有害元素的風(fēng)險評估、安全用藥及藥品質(zhì)量控制提供了參考?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Multiwave 3000 型微波消解儀（奧地利Anton Paar公司）；XSERIE2 型ICP - MS 儀（美國Thermo 公司）；Purelab classic 型超純水機(jī)（英國ELGA LabWater 公司）；XS204 型電子天平（瑞士Mettler - Toledo 公司，精度為0.000 1 g）。

1.2 試藥

Pb 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號為GBW08619 - 19061，質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL），Cd 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液［編號為GBW（E）080119- 19021，質(zhì)量濃度為100 μg/mL］，As 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號為GBW08611 - 18021，質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL），Hg 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號為GBW08617 - 19041，質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL），Cu 元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號為GBW08615 - 19041，質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL），均購自中國計量科學(xué)研究院；鉍（Bi）、鍺（Ge）、銦（In）標(biāo)準(zhǔn)溶液（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，編號為GNM - M06097 - 2013，質(zhì)量濃度為100 μg/mL）；69%硝酸（色譜純，JT Baker試劑公司）；30%過氧化氫溶液（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；復(fù)方甘草片源自2021年國家藥品抽檢中全部32 家企業(yè)共92批（各3批樣品，廠家批次不足的全部選擇）。

2 方法與結(jié)果

2.1 ICP-MS 條件

霧化器壓力：1.5 bar；霧化氣流量：0.80 L/min；蠕動泵轉(zhuǎn)速：30 r / min；反射功率：1 200 W；數(shù)字電壓：3 200 V；模擬電壓：1 800 V；等離子體氣流速：13.1 L/min；掃描模式：跳峰掃描，掃描20次，采樣點數(shù)3個。

2.2 溶液制備

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密量取Pb，Cd，As，Hg，Cu 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，加2%硝酸溶液稀釋成每1 mL含Pb，As，Hg 0，0.5，1，2，5，10，20 ng，含Cd 0，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2 ng，含Cu 0，5，10，20，50，100，200 ng 的系列質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

內(nèi)標(biāo)溶液：精密量取Bi，Ge，In混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸溶液稀釋成每1 mL含Bi，Ge，In均為0.01 μg的內(nèi)標(biāo)溶液。

供試品溶液：取樣品，研細(xì)，混勻，取0.15 g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸5 mL和30%過氧化氫溶液0.5 mL，混勻，浸泡過夜，置微波消解儀內(nèi)，消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩慢加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)緩慢濃縮至3 mL，用少量水洗滌消解罐3 次，將消解液轉(zhuǎn)入25 mL 容量瓶中，用水定容，搖勻，即得。

空白溶液：按供試品溶液制備方法自“置聚四氟乙烯消解罐中”起制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察與檢測限確定：取2.2項下系列質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按2.1 項下ICP - MS 條件進(jìn)樣測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程和相關(guān)系數(shù)；取2.2項下空白溶液，按2.1項下ICP-MS條件連續(xù)進(jìn)樣測定13次，測定儀器檢測限，根據(jù)樣品取樣量和稀釋倍數(shù)計算方法檢測限。結(jié)果見表1。

精密度試驗：取2.2 項下混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（Pb，Cd，As，Hg，Cu 質(zhì)量濃度分別為2，0.2，2，2，20 ng/mL），按2.1 項下ICP - MS 條件，連續(xù)進(jìn)樣測定6 次，計算各元素的RSD。結(jié)果見表1，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取樣品（批號為19091701）9 份，按高、中、低質(zhì)量濃度分別精密加入各元素對照品溶液適量，各3 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下ICP-MS條件進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品中Pb，Cd，As，Hg，Cu 含量測定

取32 個廠家的92 批樣品，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1項下ICP-MS條件進(jìn)樣測定。結(jié)果復(fù)方甘草片中Cu，As，Cd，Pb的含量分別為1.07～8.68 mg/ kg、0.56～1.26 mg / kg、1.94～19.29 μg / kg、0.13～0.62 mg/kg，均未檢出Hg元素。詳見表2。

表2 復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu含量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of Pb，Cd，As，Hg，Cu in Compound Liquorice Tablets

2.5 風(fēng)險評估

參照2020年版《中國藥典（四部）》通則9302 中藥有害殘留物限量制定指導(dǎo)原則建立重金屬及有害元素的限量標(biāo)準(zhǔn)，按公式（1）計算最大限量理論值。

式中，L為最大限量理論值（mg/kg）；A為每日允許攝入量（mg / kg bw）；W為人體平均體質(zhì)量，一般按63 kg計；M為每日人均可服用的最大劑量（kg）；AT為平均壽命天數(shù)，一般為365×70；EF為服用頻率（天/年）；ED為一生中服用的暴露年限；t為重金屬元素的轉(zhuǎn)移率（%）。

健康指導(dǎo)值（HBGV）指人類在一定時期內(nèi)攝入重金屬及有害元素且不產(chǎn)生可檢測到健康危害的安全限值，以每千克體質(zhì)量的攝入量表示。Pb，Cd，As，Hg，Cu采用聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織/ 世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）食品添加劑聯(lián)合專家委員會（JECFA）最新的評估數(shù)據(jù)［14］，統(tǒng)一折算為每日允許攝入量（ADI）分別為50，2.1，0.83，0.57，3.6 μg/kg。

參考文獻(xiàn)［15］，制劑中元素的轉(zhuǎn)移率取100%。根據(jù)藥品說明書，復(fù)方甘草片每日最大服用劑量為每日3次，每次4 片，7 d 為1 個療程；本研究中的服用頻率取每年服用90 d，一生服用時間取20 年。根據(jù)公式（1），擬訂復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu 不得過134，31，78，21，1 863 mg/kg。結(jié)果表明，復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu含量均低于評估限度，危害風(fēng)險較低。

3 討論

本研究中建立了同時測定復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu 含量的ICP - MS 法，經(jīng)方法學(xué)驗證，該方法操作簡單、精密度高、準(zhǔn)確度好、靈敏度高。對92批樣品進(jìn)行重金屬及有害元素Pb，Cd，As，Hg，Cu殘留量測定，參照2020年版《中國藥典（四部）》通則9302 中藥有害殘留物限量制定指導(dǎo)原則，擬訂復(fù)方甘草片中Pb，Cd，As，Hg，Cu的限度值。

本研究中涉及生產(chǎn)企業(yè)共32 家，占全國復(fù)方甘草片生產(chǎn)企業(yè)的88.89%，樣品能代表全國復(fù)方甘草片的整體情況。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的復(fù)方甘草片元素雜質(zhì)含量基本相當(dāng)且風(fēng)險均較低。目前，我國生產(chǎn)的復(fù)方甘草片中5種重金屬及有害元素含量均較低，可保障公眾用藥安全。此外，本研究中為復(fù)方甘草片的質(zhì)量控制和品質(zhì)評價提供了基礎(chǔ)資料和理論依據(jù)，有利于進(jìn)一步完善復(fù)方甘草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。