鄧 飛,陳 斌,邵 靚,邱明雙,裴超信,陳弟詩(shī),李 麗,周莉媛

(四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,成都 武侯 610041)

獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的有效建設(shè),能為我國(guó)動(dòng)物疫情防控工作提供重要的技術(shù)支持[1]。為保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,需對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力進(jìn)行評(píng)估,即能力驗(yàn)證。開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)能力比對(duì)試驗(yàn)是當(dāng)前獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室常用的能力驗(yàn)證方法之一[2],通過(guò)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì),可以發(fā)現(xiàn)檢測(cè)過(guò)程中存在的隱患,促進(jìn)檢測(cè)能力提升。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局和四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳對(duì)該項(xiàng)工作的要求[3,4],四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心于2020年9月組織開(kāi)展了全省市、縣兩級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作。通過(guò)比對(duì),對(duì)我省市、縣兩級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力進(jìn)行了評(píng)估,比對(duì)結(jié)果真實(shí)客觀地反映出部分實(shí)驗(yàn)室存在的問(wèn)題,對(duì)存在問(wèn)題的實(shí)驗(yàn)室,四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心指導(dǎo)其及時(shí)進(jìn)行整改,保證了獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量的提高,達(dá)到了預(yù)期的比對(duì)效果和目的。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目設(shè)計(jì) 市級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室共設(shè)置3個(gè)檢測(cè)比對(duì)項(xiàng)目,包括非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)、口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)、禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)。縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)項(xiàng)目包括非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)、口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)、禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)、禽流感病毒H7亞型核酸檢測(cè)、豬瘟抗體檢測(cè)、布魯氏菌病抗體檢測(cè)、包蟲(chóng)病抗原檢測(cè),由各市動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)自行確定不少于3個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目,對(duì)轄區(qū)內(nèi)縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展比對(duì)。

1.2 比對(duì)盲樣和試劑 市級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)項(xiàng)目中非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)盲樣和試劑由青島立見(jiàn)生物科技有限公司提供;口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)盲樣和試劑由蘭州獸研生物科技有限公司提供;禽流感病毒 H5亞型抗體檢測(cè)盲樣由四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心制備,試劑由哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司提供。各項(xiàng)目針對(duì)每個(gè)比對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置6份盲樣,各項(xiàng)目提供的檢測(cè)試劑為同一批次,盲樣和試劑經(jīng)四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心測(cè)試后統(tǒng)一發(fā)放。

縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)盲樣和試劑由各市動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)自行準(zhǔn)備和發(fā)放,各比對(duì)項(xiàng)目針對(duì)每個(gè)比對(duì)實(shí)驗(yàn)室盲樣設(shè)置不少于5份,各項(xiàng)目試劑為同一批次。

1.3 比對(duì)方法 所有比對(duì)項(xiàng)目均采用相應(yīng)的國(guó)家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測(cè)方法進(jìn)行,包括實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、血凝和血凝抑制試驗(yàn)(Hemagglutination test/Hemagglutination inhibition test,HA/HI)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)(表1)。

表1 2021年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目

1.4 比對(duì)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)、禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)項(xiàng)目的判定標(biāo)準(zhǔn)為:盲樣檢測(cè)結(jié)果與參考值相差不超過(guò)1個(gè)滴度,判為正確,否則判為錯(cuò)誤;其余項(xiàng)目判定標(biāo)準(zhǔn)為:盲樣檢測(cè)結(jié)果與參考值完全相同判為正確,否則判為錯(cuò)誤。

2 結(jié)果

2.1 市級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果 全省21個(gè)市級(jí)系統(tǒng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參與了檢測(cè)能力比對(duì),結(jié)果顯示,非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目、口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)項(xiàng)目和禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果正確率分別為100%、92.06%和93.65%;其中,口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室有4份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,1個(gè)實(shí)驗(yàn)室6份盲樣檢測(cè)結(jié)果均錯(cuò)誤;禽流感病毒H5 亞型抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,有2個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有2份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,另有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室有4份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤(表2)。

表2 市級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

2.2 縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果 全省共148個(gè)縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室參與比對(duì),各實(shí)驗(yàn)室比對(duì)項(xiàng)目不完全相同。禽流感病毒H7亞型核酸檢測(cè)和布魯氏菌抗體檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果正確率均為100%,非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)、口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)、包蟲(chóng)病抗原檢測(cè)、豬瘟抗體檢測(cè)、禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果正確率依次為99.19%、98.11%、97.50%、96.99%、96.68%;其中,非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室2份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,4個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有1份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤;口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室2份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,8個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有1份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤;包蟲(chóng)病抗原檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室1份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤;豬瘟抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室2份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,8個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有1份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤;禽流感病毒H5 亞型抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室3份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,6個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有2份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,10個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有1份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤(表3)。

表3 縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

3 分析

盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤最多的項(xiàng)目為禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè),市級(jí)有3個(gè)實(shí)驗(yàn)室共8份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,縣級(jí)有17個(gè)實(shí)驗(yàn)室共25份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,可能原因有:個(gè)別實(shí)驗(yàn)室未嚴(yán)格按照國(guó)家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢測(cè),使用生理鹽水代替PBS緩沖液;1%紅細(xì)胞配置過(guò)程中紅細(xì)胞破裂,未嚴(yán)格量取沉積紅細(xì)胞體積等導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液配置不準(zhǔn)確;4單位抗原配置后未進(jìn)行抗原回溯,抗原效價(jià)測(cè)定不準(zhǔn)確,影響HI結(jié)果;結(jié)果判定中主觀因素影響。

口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)項(xiàng)目中,市級(jí)有2個(gè)實(shí)驗(yàn)室共10份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,縣級(jí)有9個(gè)實(shí)驗(yàn)室共10份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤;豬瘟抗體檢測(cè)項(xiàng)目也有9個(gè)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室共10份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,原因可能有:口蹄疫病毒O型抗體使用固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA進(jìn)行檢測(cè),部分實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員對(duì)該方法不熟悉,操作失誤或結(jié)果判定錯(cuò)誤;酶標(biāo)儀未定期檢定,影響檢測(cè)結(jié)果的讀取和判定。

非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目市級(jí)實(shí)驗(yàn)室正確率均為100%,這與近幾年各地對(duì)非洲豬瘟的重視和檢測(cè)強(qiáng)度增加分不開(kāi);縣級(jí)有5個(gè)實(shí)驗(yàn)室共6份盲樣檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,可能原因有:縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室中部分實(shí)驗(yàn)室無(wú)自動(dòng)核酸提取設(shè)備,手動(dòng)提取影響結(jié)果穩(wěn)定性;部分實(shí)驗(yàn)室的分子生物學(xué)檢測(cè)室為新建,檢測(cè)人員操作不夠熟練;檢測(cè)過(guò)程中存在污染等,導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差。

4 討論

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)就像是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系的“體檢醫(yī)師”,通過(guò)比對(duì)能檢查出實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系在運(yùn)行中存在的問(wèn)題,加以整改并制定改進(jìn)和預(yù)防措施,可顯著降低實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的偏離率。本次四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果,真實(shí)客觀地反映出一些實(shí)驗(yàn)室存在的問(wèn)題:一是人員方面,部分實(shí)驗(yàn)室專職人員不足,尤其是縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室人員崗位調(diào)動(dòng)頻繁,新進(jìn)人員未得到有效的培訓(xùn),操作不熟練,大大增加檢測(cè)錯(cuò)誤的概率;二是設(shè)施設(shè)備方面,個(gè)別實(shí)驗(yàn)室設(shè)施達(dá)不到生物安全要求,缺少設(shè)備或部分設(shè)備陳舊老化,未定期檢定或校準(zhǔn),影響檢測(cè)結(jié)果。

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是動(dòng)物疫病防控體系的重要組成部分,獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的提升,對(duì)于充分發(fā)揮其在動(dòng)物疫病防控工作中的技術(shù)支撐作用具有重要意義。各級(jí)獸醫(yī)主管部門應(yīng)高度重視實(shí)驗(yàn)室建設(shè)工作,穩(wěn)定獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室人員隊(duì)伍,強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè),加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室在基礎(chǔ)設(shè)施設(shè)備、質(zhì)量管理體系、生物安全管理體系方面的建設(shè),強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)資金保障力度,保證獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室有序、有效運(yùn)行。