鐘曉鳴 張蕾 姚新亮 劉洪洋 張媛 萬琪琳 李彥明 程冠昌

摘要：目的 探究微小RNA-22-3p（miR-22-3p）調控Kruppel樣因子6（KLF6）表達對骨髓間充質干細胞（BMSC）心肌樣分化的影響。方法 分離并培養(yǎng)大鼠BMSC，將第3代BMSC分為對照組、5-氮雜胞苷（5-AZA）組、模擬物陰性對照組、miR-22-3p模擬物組、miR-22-3p模擬物+空載質粒組、miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組；實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測細胞中miR-22-3p及KLF6表達；免疫熒光化學染色法檢測細胞結蛋白（Desmin）、肌鈣蛋白T（cTnT）、間隙連接蛋白43（Cx43）表達；Western blot檢測Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表達；流式細胞術檢測BMSC凋亡情況；采用雙熒光素酶報告基因實驗分析miR-22-3p和KLF6的靶向關系。結果 與對照組比較，5-AZA組BMSC中miR-22-3p（q=7.971，P＜0.001）、Desmin（q=7.876，P＜0.001）、cTnT（q=10.272，P＜0.001）、Cx43表達（q=6.256，P＜0.001）以及細胞凋亡率（q=12.708，P＜0.001）顯著增加，而KLF6 mRNA（q=20.850，P＜0.001）及蛋白表達（q=11.080，P＜0.001）顯著降低；與5-AZA組和模擬物陰性對照組比較，miR-22-3p模擬物組BMSC中miR-22-3p（q=3.591，P＜0.001；q=11.650，P＜0.001）、Desmin（q=5.975，P＜0.001；q=13.579，P＜0.001）、cTnT（q=7.133，P＜0.001；q=17.548，P＜0.001）、Cx43表達（q=4.571，P=0.037；q=11.068，P＜0.001）顯著增加，而KLF6 mRNA（q=7.384，P＜0.001；q=28.234，P＜0.001）及蛋白表達（q=4.594，P=0.036；q=15.945，P＜0.001）顯著降低，miR-22-3p模擬物組細胞凋亡率顯著低于5-AZA組（q=8.216，P＜0.001）；與miR-22-3p模擬物+空載質粒組比較，miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組KLF6 mRNA（q=23.891，P＜0.001）及蛋白表達（q=13.378，P＜0.001）顯著增加，Desmin（q=9.505，P＜0.001）、cTnT（q=10.985，P＜0.001）、Cx43表達（q=8.301，P＜0.001）顯著降低，細胞凋亡率增加（q=4.713，P=0.029）。雙熒光素酶報告基因實驗發(fā)現(xiàn)KLF6是miR-22-3p的潛在靶基因。結論 miR-22-3p通過抑制KLF6表達來促進BMSC心肌樣分化。

關鍵詞：微小RNA-22-3p；Kruppel樣因子6；骨髓間充質干細胞；心肌樣分化

中圖分類號： R541.9? 文獻標志碼： A? 文章編號：1000-503X（2023）01-0001-08

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.15052

MicroRNA-22-3p Regulates the Expression of Kruppel-like Factor 6 to Affect the Cardiomyocyte-like Differentiation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell

ZHONG Xiaoming，ZHANG Lei，YAO Xinliang，LIU Hongyang，ZHANG Yuan，WAN Qilin，LI Yanming，CHENG Guanchang

Department of Cardiovascular Medicine，Huaihe Hospital，Henan University，Kaifeng，Henan 475000，China

Corresponding author：LI Yanming Tel：0371-23906832，E-mail：yanminglee@163.com

ABSTRACT：Objective To explore the effect of microRNA-22-3p （miR-22-3p） regulating the expression of Kruppel-like factor 6 （KLF6） on the cardiomyocyte-like differentiation of bone marrow mesenchymal stem cell （BMSC）.Methods Rat BMSC was isolated and cultured，and the third-generation BMSC was divided into a control group，a 5-azacytidine（5-AZA）group，a mimics-NC group，a miR-22-3p mimics group，a miR-22-3p mimics+pcDNA group，and a miR-22-3p mimics+pcDNA-KLF6 group.Real-time fluorescent quantitative PCR （qRT-PCR） was carried out to determine the expression of miR-22-3p and KLF6 in cells.Immunofluorescence staining was employed to detect the expression of Desmin，cardiac troponin T （cTnT），and connexin 43 （Cx43）.Western blotting was employed to determine the protein levels of cTnT，Cx43，Desmin，and KLF6，and flow cytometry to detect the apoptosis of BMSC.The targeting relationship between miR-22-3p and KLF6 was analyzed by dual luciferase reporter gene assay.Results Compared with the control group，5-AZA up-regulated the expression of miR-22-3p （q=7.971，P<0.001），Desmin （q=7.876，P<0.001），cTnT （q=10.272，P<0.001），and Cx43 （q=6.256，P<0.001），increased the apoptosis rate of BMSC （q=12.708，P<0.001），and down-regulated the mRNA （q=20.850，P<0.001） and protein （q=11.080，P<0.001） levels of KLF6.Compared with the 5-AZA group and the mimics-NC group，miR-22-3p mimics up-regulated the expression of miR-22-3p （q=3.591，P<0.001；q=11.650，P<0.001），Desmin （q=5.975，P<0.001；q=13.579，P<0.001），cTnT （q=7.133，P<0.001；q=17.548，P<0.001），and Cx43 （q=4.571，P=0.037；q=11.068，P<0.001），and down-regulated the mRNA （q=7.384，P<0.001；q=28.234，P<0.001） and protein （q=4.594，P=0.036；q=15.945，P<0.001） levels of KLF6.The apoptosis rate of miR-22-3p mimics group was lower than that of 5-AZA group （q=8.216，P<0.001）.Compared with the miR-22-3p mimics+pcDNA group，miR-22-3p mimics+pcDNA-KLF6 up-regulated the mRNA（q=23.891，P<0.001） and protein（q=13.378，P<0.001）levels of KLF6，down-regulated the expression of Desmin （q=9.505，P<0.001），cTnT （q=10.985，P<0.001），and Cx43 （q=8.301，P<0.001），and increased the apoptosis rate （q=4.713，P=0.029）.The dual luciferase reporter gene experiment demonstrated that KLF6 was a potential target gene of miR-22-3p.Conclusion MiR-22-3p promotes cardiomyocyte-like differentiation of BMSC by inhibiting the expression of KLF6.

Key words：microRNA-22-3p；Kruppel-like factor 6；bone marrow mesenchymal stem cell；cardiomyocyte-like differentiation

Acta Acad Med Sin，2023，45（1）：1-8

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是由冠狀動脈閉塞引起的急性缺血缺氧造成不可逆的心肌細胞壞死和心臟功能障礙，是全球人類疾病死亡的主要原因之一［1-2］。挽救瀕死心肌，恢復心臟功能是治療AMI的關鍵，許多研究學者認為骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）分化為心肌樣細胞對修復梗死心肌組織具有重要作用，因此，促進BMSC心肌樣分化對于治療AMI至關重要［3］。微小RNA（microRNA，miRNA）作為內源性的小分子非編碼RNA，可通過結合靶基因信使RNA的3′非翻譯區(qū)，調節(jié)基因表達，其已被證實在細胞生理病理過程中具有重要的調控作用［4］。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-22參與心臟重塑及心肌細胞肥大過程，miR-22-3p在AMI小鼠中表達下調，促進其表達可改善心肌損傷［2，5］。此外，miR-22-3p過表達還可促進BMSC成骨分化［6］，但關于其是否參與BMSC心肌樣分化還未可知。Kruppel樣因子6（Kruppel-like factor 6，KLF6）作為KLF家族成員之一，參與心肌、骨骼肌、平滑肌的發(fā)育及功能調控［7-8］。本研究通過探究miR-22-3p調控KLF6表達對BMSC心肌樣分化的影響，為BMSC向心肌樣細胞分化的分子機制及AMI治療提供參考。

材料和方法

實驗動物 7周齡SPF級健康雄性SD大鼠10只（體重235～270 g）購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）2019-0003。飼養(yǎng)于河南大學淮河醫(yī)院動物房，使用許可證號：SYXK（豫）2020-0002。在溫度22～24 ℃，濕度55%～65%，12 h/12 h晝夜交替環(huán)境中適應1周后進行實驗。本研究通過河南大學淮河醫(yī)院動物倫理委員會批準（倫理審批編號：20201124）。

主要試劑和儀器 DMEM培養(yǎng)基（批號：D5546）購自上海輔澤商貿(mào)有限公司；5-氮雜胞苷（5-azacytidine，5-AZA）（批號：30046554）購自深圳海思安生物技術有限公司；兔抗β-actin、肌鈣蛋白T（cardiac troponin T，cTnT）、間隙連接蛋白43（connexin 43，Cx43）、KLF6抗體、辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG（批號：4970、5593、3512、7074）購自美國Cell Signaling Technology公司；結蛋白（Desmin）抗體（批號：ab15200）購自英國Abcam公司；CD90-PE-CyTM7（批號：555596）、CD29-PE（批號：555443）、CD45-FITC抗體（批號：553088）購自美國BD Biosciences公司；FITC標記的山羊抗小鼠IgG（批號：115-095-003）購自美國Jackson ImmunoResearch公司；蛋白定量試劑盒（批號：E162）購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司；蛋白提取試劑盒（批號：KGP250）購自江蘇凱基生物技術股份有限公司；反轉錄試劑盒（批號：J-SRP1105-50）購自上海研謹生物科技有限公司；實時熒光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）檢測試劑盒（批號：P7640L）購自蘇州螞蟻淘生物科技有限公司；Lipofectamine 2000轉染試劑盒（批號：11668019）購自北京智杰方遠科技有限公司；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（批號：Omt-05）購自北京奧秘佳得醫(yī)藥科技有限公司；EXFLOW流式細胞儀購自北京達科為生物技術有限公司；Axygen凝膠成像系統(tǒng)購自廣州科適特科學儀器有限公司；MA-5000型96孔qRT-PCR購自蘇州雅睿生物技術股份有限公司；模擬物陰性對照（5 CTCAACTGGTGTCGTGGA 3）、miR-22-3p模擬物（5 AAGCTGCCAGTTGAAGAACTG 3）由北京達科為生物技術有限公司合成。

BMSC分離與細胞培養(yǎng) 將SD大鼠頸椎脫臼處死后浸泡于75%乙醇中，10 min后置于超凈工作臺中進行股骨分離，暴露骨髓腔，用含血清培養(yǎng)基沖洗骨髓，收集骨髓細胞混勻，離心棄上清液后使用5 ml含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸，接種于培養(yǎng)瓶中，置入37 ℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48 h后光鏡下觀察細胞貼壁情況，每3 d更換1次培養(yǎng)基，待細胞融合度達80%后，0.25%胰酶消化并進行傳代，培養(yǎng)至第3代后進行后續(xù)實驗，采用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)。大鼠心肌H9c2細胞采用含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、消化和傳代。

BMSC鑒定 取第3代BMSC進行胰酶消化，添加常規(guī)培養(yǎng)基終止消化后離心（1000 r/min，r=8 cm）5 min棄上清液，300 μl PBS重懸細胞并將細胞濃度調整為1×1010/L，取200 μl細胞懸液至EP管中，分別添加CD90-PE-CyTM7、CD29-PE、CD45-FITC抗體（5 μl）和同型對照抗體，混勻后避光孵育0.5 h，流式細胞儀檢測BMSC表面標志分子。

細胞轉染及分組 將第3代BMSC以1×104個/ml密度接種于6孔板中，每孔100 μl，按照Lipofectamine 2000轉染試劑盒說明書將miR-22-3p模擬物及模擬物陰性對照、KLF6過表達質粒及空載質粒轉染至相應細胞中培養(yǎng)48 h。根據(jù)處理情況，將細胞分為6組：（1）對照組：正常培養(yǎng)基培養(yǎng)；（2）5-AZA組：8 μmol/L 5-AZA誘導BMSC心肌樣分化24 h；（3）模擬物陰性對照組：轉染模擬物陰性對照；（4）miR-22-3p模擬物組：轉染miR-22-3p模擬物；（5）miR-22-3p模擬物+空載質粒組：miR-22-3p模擬物與空載質粒共轉染；（6）miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組：miR-22-3p模擬物與KLF6過表達質粒共轉染。

qRT-PCR檢測細胞中miR-22-3p及KLF6表達 采用Trizol法提取各組細胞總RNA后進行反轉錄得到cDNA，再進行qRT-PCR擴增，反應程序：95 ℃ 20 s、95 ℃ 10 s、60 ℃ 20 s和70 ℃ 10 s，40個循環(huán)。KLF6及miR-22-3p分別以GAPDH和U6作為內參，采用2-ΔΔCt方法計算KLF6及miR-22-3p的相對表達水平。qRT-PCR引物序列見表1。

免疫熒光化學染色法檢測細胞Desmin、cTnT、Cx43表達 將各組細胞以1×108個/L密度接種于24孔板中，培養(yǎng)24 h后多聚甲醛固定，PBS洗滌后添加0.05% Triton X-100溶液孵育0.5 h，使用枸櫞酸鹽緩沖液進行抗原修復后山羊血清封閉0.5 h，分別加入Desmin、cTnT、Cx43抗體（1∶1000）4 ℃孵育過夜，洗滌后加入山羊抗兔熒光二抗（1∶300）孵育1 h，DAPI染色劑避光孵育5 min后封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察各組細胞熒光表達情況。

Western blot檢測Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表達 收集各組細胞，使用RIPA裂解液進行裂解提取細胞總蛋白，BCA蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，吸取30 μg蛋白樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳，低溫下轉至PVDF膜上，5%牛血清白蛋白封閉60 min，加入兔抗Desmin、cTnT、Cx43、KLF6、β-actin抗體（1∶1000）4 ℃孵育過夜，然后加入二抗（1∶5000）室溫孵育2 h，使用ECL發(fā)光試劑顯影，于蛋白凝膠電泳成像儀中成像，Image J軟件分析條帶灰度，計算蛋白相對表達量。

流式細胞術檢測BMSC凋亡 收集各組BMSC，PBS洗滌2次，添加500 μl緩沖液重懸細胞，依次加入10 μl AnnexinV-FITC染色液避光孵育15 min及PI染色液避光孵育10 min后，于流式細胞儀中檢測BMSC凋亡情況。

雙熒光素酶報告基因實驗分析miR-22-3p和KLF6的靶向關系 使用TargetScan數(shù)據(jù)庫（https：//www.targetscan.org/vert_72/）進行miR-22-3p和KLF6結合位點分析，經(jīng)qRT-PCR擴增KLF6 3′-UTR片段來構建野生型KLF6表達載體（pGL3-KLF6-wt），并根據(jù)位點定向突變試劑盒說明書構建突變型KLF6表達載體（pGL3-KLF6-mut），分別與miR-22-3p模擬物和模擬物陰性對照共轉染至BMSC中，分為4組：pGL3-KLF6-wt+miR-22-3p模擬物組、pGL3-KLF6-wt+模擬物陰性對照組、pGL3-KLF6-mut+miR-22-3p模擬物組、pGL3-KLF6-mut+模擬物陰性對照組，48 h后棄培養(yǎng)基，使用200 μl細胞裂解液將細胞裂解，離心后取上清液，使用雙熒光素酶試劑盒染色，以螢火蟲熒光素酶活性與海腎熒光素酶活性的比值來表示熒光素酶相對活性。

統(tǒng)計學處理 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，并采用SNK-q檢驗進行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結? 果

BMSC形態(tài)觀察及鑒定 BMSC在培養(yǎng)初期呈圓形、并處于懸浮狀態(tài)；72 h細胞呈短梭形、三角形，突起向外延伸；7 d細胞體積增大、呈扁平狀；第3代BMSC形態(tài)呈較為均一的紡錘形，旋渦狀或平行樣分布。流式細胞術檢測細胞表面抗體CD29（95.97%）、CD90（97.82%）呈高表達，而CD45（2.01%）呈低表達（圖1）。

BMSC和H9c2細胞miR-22-3p的表達水平 qRT-PCR檢測結果顯示，與BMSC比較，H9c2細胞中miR-22-3p表達顯著增加（1.86±0.12比1.00±0.00；t=15.065，P＜0.001）。

不同處理后BMSC中miR-22-3p及KLF6的表達水平 與對照組比較，5-AZA組miR-22-3p表達顯著增加（1.91±0.21比1.00±0.00；q=7.971，P＜0.001），而KLF6 mRNA（0.52±0.03比1.00±0.00；q=20.850，P＜0.001）及蛋白表達（0.59±0.07比1.49±0.09；q=11.080，P＜0.001）顯著降低；與5-AZA組和模擬物陰性對照組比較，miR-22-3p模擬物組miR-22-3p表達顯著增加（2.32±0.34比1.91±0.21；q=3.591，P＜0.001和2.32±0.34比0.99±0.08；q=11.650，P＜0.001），而KLF6 mRNA（0.35±0.03比0.52±0.03；q=7.384，P＜0.001和0.35±0.03比1.00±0.05；q=28.234，P＜0.001）及蛋白表達（0.38±0.07比0.59±0.07；q=4.594，P=0.036和0.38±0.07比1.51±0.28；q=15.945，P＜0.001）顯著降低；與miR-22-3p模擬物+空載質粒組比較，miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組BMSC中KLF6 mRNA（0.89±0.10比0.34±0.04；q=23.891，P＜0.001）及蛋白表達（1.33±0.27比0.39±0.06；q=13.378，P＜0.001）顯著增加（圖2）。

不同處理后BMSC中Desmin、cTnT、Cx43的表達水平 與對照組比較，5-AZA組Desmin（1.42±0.21比0.84±0.10；q=7.876，P＜0.001）、cTnT（1.15±0.18比0.43±0.05；q=10.272，P＜0.001）、Cx43表達（1.55±0.20比1.03±0.12；q=6.256，P＜0.001）顯著增加；與5-AZA組和模擬物陰性對照組比較，miR-22-3p模擬物組Desmin（1.86±0.22比1.42±0.21；q=5.975，P＜0.001和1.86±0.22比0.86±0.09；q=13.579，P＜0.001）、cTnT（1.65±0.20比1.15±0.18；q=7.133，P＜0.001和1.65±0.20比0.42±0.07；q=17.548，P＜0.001）、Cx43表達（1.93±0.18比1.55±0.20；q=4.571，P=0.037和1.93±0.18比1.01±0.18；q=11.068，P＜0.001）顯著增加；與miR-22-3p模擬物+空載質粒組比較，miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組Desmin（1.16±0.11比1.86±0.20；q=9.505，P＜0.001）、cTnT（0.87±0.10比1.64±0.24；q=10.985，P＜0.001）、Cx43表達（1.21±0.16比1.90±0.25；q=8.301，P＜0.001）顯著降低（圖3）。

miR-22-3p及KLF6過表達對BMSC凋亡的影響 與對照組比較，5-AZA組BMSC凋亡率顯著增加［（59.01±10.34）%比（23.39±4.18）%；q=12.708，P＜0.001］；與5-AZA組比較，miR-22-3p模擬物組細胞凋亡率顯著降低［（35.98±5.20）%比（59.01±10.34）%；q=8.216，P＜0.001］；與模擬物陰性對照組比較，miR-22-3p模擬物組細胞凋亡率顯著增加［（35.98±5.20）%比（22.12±5.81）%；q=4.945，P=0.020］；與miR-22-3p模擬物+空載質粒組比較，miR-22-3p模擬物+KLF6過表達質粒組細胞凋亡率顯著增加［（49.22±5.07）%比（36.01±4.98）%；q=4.713，P=0.029］（圖4）。

miR-22-3p靶向KLF6調控其表達 通過TargetScan網(wǎng)站查詢發(fā)現(xiàn)，miR-22-3p和KLF6之間存在結合位點。雙熒光素酶報告基因實驗分析顯示，與pGL3-KLF6-wt+模擬物陰性對照組比較，pGL3-KLF6-wt+miR-22-3p模擬物組熒光素酶相對活性顯著降低（0.45±0.05比0.91±0.09；t=9.991，P＜0.001）；而pGL3-KLF6-mut+miR-22-3p模擬物組和pGL3-KLF6-mut+模擬物陰性對照組之間差異無統(tǒng)計學意義（0.87±0.09比0.88±0.10；t=0.166，P=0.872）。

討? 論

AMI可導致心肌細胞死亡，由于成熟心肌細胞缺乏再生能力，損傷后難以自我修復。而BMSC具有自主分化能力，將其移植到受損心肌組織中，可通過分化為心肌樣細胞來修復受損的心肌組織［4，9-12］。5-AZA是誘導BMSC心肌樣分化的有效制劑，但具有一定的細胞毒性，因此，有必要對BMSC心肌樣分化機制進行探討，以尋找新的更為安全的方法［13］。本研究分離培養(yǎng)大鼠BMSC，經(jīng)鑒定BMSC表面抗體CD29、CD90高表達，而CD45低表達，表明實驗獲得高純度BMSC，可用于后續(xù)實驗。

miRNA是一種小分子非編碼RNA，已被證實與心房顫動、心肌病、心肌梗死、心力衰竭等心臟疾病有關［14］。miR-22-3p廣泛表達于肌肉組織中，可通過調控炎癥反應、氧化應激、細胞凋亡參與多種心血管疾病的發(fā)生［15-16］。有研究顯示，miR-22-3p可通過負向調控肥胖相關基因表達來促進BMSC成骨分化［6］。本研究結果顯示，5-AZA及miR-22-3p過表達可顯著增加BMSC中Desmin、cTnT、Cx43的表達及細胞凋亡率，且與5-AZA相比，miR-22-3p過表達促進Desmin、cTnT、Cx43表達的作用更顯著，但對細胞凋亡的影響相對較小。Desmin、Cx43及cTnT是公認的心肌特異性蛋白，其中，Desmin是肌細胞重要組成成分，在核膜連接及信號傳導中發(fā)揮重要作用［13，17-19］。本研究結果表明，5-AZA及miR-22-3p過表達可促進BMSC心肌樣分化，并且miR-22-3p過表達促BMSC心肌樣分化能力更強，細胞毒性作用更弱，其有作為促BMSC心肌樣分化作用靶點的潛能。

雙熒光素酶報告基因實驗分析發(fā)現(xiàn)KLF6是miR-22-3p的潛在靶基因。KLF是一類能夠結合多種特異性蛋白的轉錄因子，參與動物和人骨骼肌、心肌的發(fā)育及功能調控［8］。KLF6作為鋅指轉錄因子家族成員之一，主要表達于骨髓細胞，參與心臟的發(fā)育［20-21］。此外，KLF6還參與心臟重塑、內外部刺激的響應等病理過程。研究發(fā)現(xiàn)，KLF6低表達可通過促進心肌細胞中細胞外基質因子、血小板反應蛋白4的表達來抑制心臟纖維化［21］。本研究結果顯示，5-AZA及miR-22-3p過表達可顯著降低BMSC中KLF6的表達。因此，miR-22-3p可能通過靶向抑制KLF6的表達來促進BMSC心肌樣分化。為了驗證這一結論，本研究在miR-22-3p過表達的基礎上過表達KLF6，結果發(fā)現(xiàn)KLF6過表達可減弱miR-22-3p過表達的促BMSC心肌樣分化的作用。

綜上，本研究結果表明，miR-22-3p通過抑制KLF6表達來促進BMSC心肌樣分化，其有作為促BMSC心肌樣分化作用靶點的潛能。本研究為BMSC在AMI治療中的應用提供了實驗數(shù)據(jù)支持，后續(xù)還將對miR-22-3p的下游調控機制進行深入探究。

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（收稿日期：2022-04-15）