侯小露，辛桂瑜，何東賢，龐春秀，薛敏芳，李燕紅，徐蘭程★

（1. 廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)，廣西 南寧 530007；2. 玉林師范學(xué)院生物與制藥學(xué)院，廣西 玉林 537000）

清熱解毒類中草藥主要用于清熱解毒、清熱瀉火、清熱涼血等方面。白花蛇舌草（Hedyotis diffusa Willd），別名蛇舌草、蛇利草、蛇總管、二葉，為茜草科植物白花蛇舌草的全草；在我國主要分布在廣西、廣東、云南、湖南、福建、江蘇、浙江等地?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草主要化學(xué)成分有萜類、黃酮類、蒽醌類、甾醇類等；其味苦、性寒，歸心、肺、脾、肝、經(jīng)，主要功能為清熱解毒，利尿消腫，抗癌止痛等。半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）為唇形科植物半枝蓮的全草；現(xiàn)代中藥藥理研究證實半枝蓮主要化學(xué)成分包括黃酮類、二萜類、多糖類等，具有抗癌、護肝、抗氧化、抑菌、抗病毒、解熱等多種作用。目前學(xué)者對兩者的配伍使用研究，多集中在兩者的抗腫瘤作用上，研究發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草- 半枝蓮可抑制人胰腺腫瘤的生長、“半枝蓮- 白花蛇舌草”藥的有效活性成分可抑制胃癌等；本文擬對白花蛇舌草、半枝蓮以及兩者按不同濃度配比的混合液對干酵母致熱小鼠的解熱作用進行比較分析，探討三者的最佳解熱濃度及劑量，為兩者的配伍作用和在臨床上更好的使用這兩種中藥提供一定的參考數(shù)據(jù)。

1 材 料

1.1 試驗動物 SPF 級昆明小鼠，210 只，雌雄各半，體質(zhì)量19～21 g，實驗用昆明小鼠購于廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK 桂2018-0003。

1.2 藥 品 白花蛇舌草和半枝蓮：購自于廣西玉林市中藥港，經(jīng)鑒定白花蛇舌草為Rubiaceae Juss.(1789)科，Hedyotis L.屬；半枝蓮為Labiatae 科，Scutellaria Linn.屬。安琪高活性干酵母（GB/T20886），購于安琪酵母股份有限公司；阿司匹林腸溶片（H20065051），購于沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司；白凡士林（GB1790-2003），購于南昌華鑫醫(yī)藥化工有限公司。

1.3 試驗儀器 電子體溫計，購自廣東天際電器股份有限公司；臺式低速離心機TDZ4-WS（4000 r/min），購自上海五相儀器儀表有限公司；電子天平，購自上海佑科儀器儀表有限公司；電子萬用爐，購自天津市泰斯特儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，購自上海亞榮生化儀器廠。

2 方 法

2.1 阿司匹林藥液的制備 取300 mg 阿司匹林藥片粉碎并溶解于15 mL 無菌水中，制得阿司匹林藥液濃度為20 mg/mL。

2.2 干酵母混懸液的制備 取50.0 g 粉碎后的干酵母粉與適量的無菌生理鹽水配制成20%干酵母混懸液。

2.3 藥液的制備

2.3.1 白花蛇舌草水煎液和半枝蓮水煎液的制備

取白花蛇舌草和半枝蓮各30 g，分別與適量水煎煮、過濾、濃縮，使最后得到供試液分別含生藥1 g/mL（低濃度組）、2 g/mL（中濃度組）、3 g/mL（高濃度組），藥液置于冰箱4 ℃中備用。

2.3.2 白花蛇舌草和半枝蓮不同配比混合水煎液的制備 取白花蛇舌草和半枝蓮各30 g 混合，粉碎后與適量水煎煮、過濾、濃縮，使最后得到供試液分別含生藥1 g/mL（低濃度組）、2 g/mL（中濃度組）、3 g/mL（高濃度組），藥液置于冰箱4 ℃中備用。

2.4 試驗動物分組

試驗1將小鼠于實驗室環(huán)境適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，測量小鼠肛溫早晚各1 次（插入小鼠肛門2 cm），將體溫超過38 ℃的小鼠剔除，符合條件的小鼠隨機分為9 組，每組10 只，分別為白花蛇舌草高濃度組（3 g/mL）、白花蛇舌草中濃度組（2 g/mL）、白花蛇舌草低濃度組（1 g/mL）、半枝蓮高濃度組（3 g/mL）、半枝蓮中濃度組（2 g/mL）、半枝蓮低濃度組（1 g/mL）；藥物對照組（20 mg/mL）；空白組；模型組。

試驗2 如試驗1 方法所示。將符合條件的小鼠隨機分為12 組，每組10 只，分別為白花蛇舌草和半枝蓮混合液（1:2）高濃度組（3 g/mL）、中濃度組（2 g/mL）、低濃度組（1 g/mL）；白花蛇舌草和半枝蓮混合液（2:1） 高濃度組（3 g/mL）、中濃度組（2 g/mL）、低濃度組（1 g/mL）；白花蛇舌草和半枝蓮混合液（1:1）高濃度組（3 g/mL）、中濃度組（2 g/mL）、低濃度組（1 g/mL）；藥物對照組（20 mg/mL）；空白組；模型組。

2.5 建立干酵母混懸液致小鼠發(fā)熱模型 實驗前24 h 小鼠禁食不禁水，取早中晚各測的溫度均值作為基礎(chǔ)溫度。除空白組外，每只小鼠皮下注射20%干酵母混懸液25 mL/kg，每隔2 h 測肛溫1 次。8 h后小鼠體溫上升1 ℃以上，達到最高，空白對照組的小鼠體溫沒有明顯變化，說明造模成功。

2.6 試驗動物給藥 將造模成功后的小鼠以灌胃的方式分次給藥。各藥物組的小鼠分別給藥為0.1 mL，阿司匹林組給藥0.1 mL，模型組給相同濃度體積的生理鹽水0.1 mL。在給藥后2 h、4 h、6 h 分別測量1 次肛溫。在第一次給藥后6 h 小鼠的體溫若仍未恢復(fù)到基礎(chǔ)體溫，則繼續(xù)第二次給藥，給藥后每隔2 h 對小鼠測量一次肛溫，觀察并記錄小鼠體溫的變化情況。

2.7 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗數(shù)據(jù)都采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件，數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用LSD 法分析，P＞0.05 為差異性不顯著，0.01＜P＜0.05 差異性顯著，P＜0.01 差異性極顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)果1

根據(jù)圖1 可知，試驗一造模成功后對各組小鼠給藥，在第一次給藥2 h 后，白花蛇舌草的高劑量組和低劑量組出現(xiàn)先上升后下降的現(xiàn)象，其余各藥物劑量組體溫都逐漸下降；第二次給藥后，各藥物劑量組小鼠的體溫持續(xù)下降，但模型組小鼠的體溫沒有明顯下降，說明白花蛇舌草水煎液和半枝蓮水煎液對致熱小鼠都具有解熱降溫作用。結(jié)合表1 和圖1 發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草的中濃度組小鼠體溫與模型組小鼠體溫在給藥4 h 后具有顯著性差異（P＞0.05），而與藥物組小鼠體溫沒有顯著性差異（P＜0.05），說明了白花蛇舌草的中濃度組在白花蛇舌草和半枝蓮的各試驗組中能使小鼠更快地恢復(fù)到基礎(chǔ)體溫。

表1 試驗1 造模成功后給藥不同時間的小鼠體溫變化

圖1 白花蛇舌草和半枝蓮水煎液給藥小鼠后體溫變化曲線

3.2 結(jié)果2

從表2 和圖2 可知，試驗2 在第一次給藥后2 h、4 h、6 h，白花蛇舌草和半枝蓮不同配比的混合液組和藥物對照組，小鼠體溫均下降，而模型組小鼠的體溫持續(xù)上升，說明白花蛇舌草和半枝蓮混合液在不同配比情況下均的對致熱小鼠具有解熱降溫作用。在第二次給藥后2 h，除空白組外，各組小鼠都與模型組的體溫存在顯著性差異（P＜0.05），而與藥物對照組差異不顯著（P＞0.05），說明白花蛇舌草和半枝蓮不同配比的混合液各濃度組對干酵母致熱小鼠都具有顯著的解熱降溫作用；且在白花蛇舌草和半枝蓮不同濃度配比混合液中，白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液中濃度組（2 g/mL）的小鼠能最快恢復(fù)到基礎(chǔ)體溫，表明其解熱降溫作用與其所有組別比較效果最好。

表2 試驗2 造模成功后給藥不同時間的小鼠體溫變化

圖2 白花蛇舌草和半枝蓮混合水煎液給藥小鼠后體溫變化曲線

在試驗1 對白花蛇舌草與半枝蓮的單獨解熱效果中，可知白花蛇舌草的中濃度組（2 g/mL）解熱效果最佳；在試驗2 對兩種藥物的混合液解熱效果比較中，發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液中濃度組（2 g/mL）效果較好。因此對白花蛇舌草的中濃度組（2 g/mL）與白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液的中濃度組（2 g/mL）進行比較分析，由圖3 可發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液的中濃度組（2 g/mL）小鼠的體溫能夠更快速地恢復(fù)到基礎(chǔ)體溫且在之后數(shù)小時內(nèi)體溫沒有出現(xiàn)反彈現(xiàn)象，表明白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液的中濃度組（2 g/mL）的解熱降溫作用效果最佳。

圖3 白花蛇舌草和半枝蓮（1:2）混合液中濃度組和白花蛇舌草中濃度組給藥小鼠后體溫變化曲線比較

4 討 論

對小鼠皮下注射干酵母混懸液后0～2 h，模型組小鼠的體溫開始出現(xiàn)下降，但在9 h 時小鼠體溫又出現(xiàn)峰值，而后逐漸趨于平穩(wěn)狀態(tài)，這一現(xiàn)象可能是與小鼠對熱的應(yīng)激和機理有關(guān)，這需進一步研究證實。

由結(jié)果可見在第一次給藥2 h 后，小鼠的體溫出現(xiàn)下降趨勢，在第二次給藥后2 h，各組小鼠體溫均值的下降篇幅和速度增大，其原因有可能是由于藥物起效需要一定的時間，藥物中的有效成分尚未對機體起到解熱的作用，且解熱的藥效需在2 h 后才逐漸出現(xiàn)作用；而同時由于造模的基礎(chǔ)因素，導(dǎo)致機體的體溫會不斷的出現(xiàn)上升現(xiàn)象。另外，在實驗的過程中，發(fā)現(xiàn)個別低劑量組的小鼠在第一次給藥4 h 左右出現(xiàn)體溫均值上升的情況，其原因有可能是小鼠的體溫出現(xiàn)反彈，或給藥的劑量偏小，藥效比高劑量組偏弱，因此出現(xiàn)體溫反彈的現(xiàn)象。

在第二次給藥后發(fā)現(xiàn)灌喂的各高濃度組（3 g/mL）的小鼠半數(shù)以上出現(xiàn)腹瀉癥狀，而中藥半枝蓮，味苦、辛、性寒；白花蛇舌草，味甘、微苦、性寒，因而這種現(xiàn)象可能是由于白花蛇舌草和半枝蓮這兩味中藥本身藥物性寒，在灌喂時影響了小鼠的腸胃功能，但這需要后續(xù)實驗進一步探究。

本實驗中，白花蛇舌草、半枝蓮以及兩者不同配比的混合液均有較好的解熱作用，對比發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草和半枝蓮以1:2 混合，其中濃度組（2 g/mL）能使發(fā)熱小鼠最快恢復(fù)到基礎(chǔ)體溫，其解熱降溫效果最好；這一實驗結(jié)果可為在臨床上這兩種中藥的配伍及更好地使用提供參考。