種超杰，吳亞琪，董哲文,2，李婉螢，鐘淑媚，王子?jì)?，周燕園,5*，宋家樂(lè),6,7*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林 541199）（2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110016）（3.桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，廣西桂林 541199）（4.柳州市人民醫(yī)院臨床營(yíng)養(yǎng)科,廣西柳州 545026）（5.廣西糖尿病系統(tǒng)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林 541199）（6.廣西環(huán)境暴露組學(xué)與全生命周期健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林 541101）（7.桂林理工大學(xué)國(guó)家母嬰乳品健康工程技術(shù)研究中心南亞分中心，廣西桂林 541004）

多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovarian Syndrome，PCOS）是育齡婦女期最常見(jiàn)的內(nèi)分泌性疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界育齡期婦女PCOS的發(fā)病率高達(dá)5%～10%[1]。在中國(guó)，19～45歲的漢族女性人群中PCOS的發(fā)病率為5.6%[2]。臨床上，PCOS的主要特征為高雄激素血癥，排卵功能障礙，以及超聲下卵巢呈現(xiàn)多囊形態(tài)[3]。肥胖（尤其是腹部肥胖）、胰島素抵抗、高胰島素血癥、心血管疾病均與PCOS的發(fā)生有較強(qiáng)的相關(guān)性[4]。研究表明，PCOS患者體內(nèi)存在異常的氧化應(yīng)激水平，而這一生理事件被認(rèn)為是促進(jìn)PCOS病理發(fā)展的潛在誘因之一[5]。

二甲雙胍（Metformin，Met）是一種噻唑烷二酮衍生物，是臨床PCOS治療的常用藥物之一。Met可以提高PCOS患者對(duì)胰島素的敏感性，改善卵巢排卵功能[6]、抑制卵巢雄激素的合成[7]，但長(zhǎng)期服用Met會(huì)造成惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等胃腸道反應(yīng)以及乳酸中毒和肝腎損害[8]等不良反應(yīng)。

灰樹(shù)花（Grifola frondosa），又稱(chēng)為“舞茸”，屬于擔(dān)子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，樹(shù)花屬，是一種我國(guó)傳統(tǒng)食藥兩用真菌[9]。目前，對(duì)灰樹(shù)花有效成分的研究主要集中于其多糖成分。已有的研究報(bào)道指出，灰樹(shù)花多糖（Grifola frondosaPolysaccharide，GFPS）具有降血脂、降血糖、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和調(diào)節(jié)腸道菌群等多方面的活性[10]。GFPS不僅可以改善高脂飼料（45%脂肪供能）誘發(fā)高脂血癥大鼠的脂代謝紊亂[11]，還可以降低高脂肪與高膽固醇混合飲食倉(cāng)鼠血清中甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、谷胱甘肽水平，并升高過(guò)氧化氫酶水平[12]。本文擬采用來(lái)曲唑建立PCOS大鼠模型，通過(guò)觀(guān)察GFPS對(duì)PCOS大鼠動(dòng)情周期、性激素水平、脂質(zhì)代謝及氧化應(yīng)激水平的改善作用，為GFPS用于臨床治療PCOS藥物的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

GFPS多糖購(gòu)自西安瑞迪生物科技有限公司（主要由葡萄糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，其摩爾比依次為3.30:0.12:0.038:0.030:0.018:0.008:0.011）；來(lái)曲唑（Letrozole，B25470）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；Met（M2009）購(gòu)自梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；羧甲基纖維素（Carboxymethyl Cellulose，CMC，S14015）購(gòu)自西隴科學(xué)股份有限公司；巴氏染液（G1612）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；蘇木素-伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色試劑盒（C01055）和cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（D7178M）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Trazol試劑（DP424）和SuperReal熒光定量試劑盒（FP205-2）購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；雌二醇（Estradiol，E2，MM-0575R1）、睪酮（Testosterone，T，MM-0577R1）、黃體生成素（Luteinizing Hormone，LH，MM-0624R1）、卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH，MM-70867R1）ELISA試劑盒購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；TC（A111-1-1）、TG（A110-1-1）、低密度脂蛋白膽固醇（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C，A113-1-1）和高密度脂蛋白膽固醇（High-Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C，A112-1-1）試劑盒購(gòu)自江蘇愛(ài)迪生生物科技有限公司；丙二醛（Malonaldehyde，MDA，A003-1-2）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD，A001-3-2）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

Allegra 64R高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)Beckman Coulter有限公司；Eppendorf 5424R型冷凍離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；Leica DM4B顯微鏡，德國(guó)徠卡儀器有限公司；ELx808酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTek公司；KZ-II高速組織研磨儀，武漢塞維爾生物科技有限公司；ProFlex梯度PCR儀和Quant StudioTM 6 Flex PCR儀，美國(guó)Thermo Fisher科技公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

總6周齡SPF級(jí)雌性SD大鼠32只（190～220 g）購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（生產(chǎn)許可證號(hào)SYXK（桂）2019-0004）。所有大鼠飼養(yǎng)于桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物房（單位許可證號(hào)：SCKY（桂）2020-0005），標(biāo)準(zhǔn)光照/黑暗（12 h/12 h）循環(huán)條件下飼養(yǎng)，自由采食并提供清潔飲水。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 造模與分組

將大鼠隨機(jī)分為正常組（n=8）、PCOS組（n=8）、Met組（n=8）、GFPS組（n=8）。正常組每日灌胃生理鹽水，PCOS組每日灌胃1 wt% CMC混懸液（含來(lái)曲唑1 mg/kg），Met組每日分別灌胃1 wt% CMC混懸液（含來(lái)曲唑1 mg/kg）和Met （265 mg/(kg·d)）[13,14]，GFPS組每日分別灌胃1 wt% CMC混懸液（含來(lái)曲唑1 mg/kg）和GFPS （600 mg/(kg·d)）[15]，每只大鼠每日灌胃1 mL，連續(xù)灌胃21 d后取材用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案已通過(guò)桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批（GLMC201813009）。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)情周期的觀(guān)察

以陰道上皮細(xì)胞分類(lèi)染色法觀(guān)察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的動(dòng)情周期[13,14]。無(wú)菌棉簽沾取少量生理鹽水于大鼠陰道內(nèi)壁順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，將采集的細(xì)胞均勻涂抹于載玻片上晾干，95vol%乙醇固定30 min。根據(jù)染色試劑盒說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行巴氏染色觀(guān)察與記錄。

1.4.3 大鼠臟器質(zhì)量測(cè)定和卵巢組織形態(tài)學(xué)觀(guān)察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，CO2麻醉處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血。使用高速冷凍離心機(jī)在4 ℃和3 000 r/min條件下離心10 min制備血清。冰上快速分離卵巢、子宮和內(nèi)臟脂肪（腹部脂肪、腎周脂肪、子宮周脂肪），并算內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量。一側(cè)卵巢經(jīng)10%（V/V）福爾馬林溶液固定行石蠟包埋切片（4 μm）并進(jìn)行HE染色，顯微鏡下觀(guān)察各組大鼠卵巢組織病理學(xué)變化。

式中：

A——內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量；

m1——內(nèi)臟脂肪質(zhì)量，g；

m0——大鼠體質(zhì)量，g。

1.4.4 血清生化指標(biāo)的檢測(cè)

取1.4.3中制備的血清，按照對(duì)應(yīng)ELISA試劑盒說(shuō)明操作，檢測(cè)大鼠血清中FSH、LH、E2、T水平，并計(jì)算LH/FSH比值；檢測(cè)血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、MDA及SOD水平。

1.4.5 qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)PCOS大鼠卵巢組織中抗氧化基因酶的mRNA表達(dá)

卵巢組織（20 mg）用生理鹽水清洗血污后，Trazol試劑提取總RNA。定量RNA純度后使用SYBR Green定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒檢測(cè)抗氧化基因酶Sod1（5′-3′：CGGATAAGAGAGGATGTT，3′-5′：TAGTA CGGCCAATGATGGAATG），Sod2（5′-3′：AGCGTG ACTTTGGGTCTTT，3′-5′：AGCGACCTTGCTCCTT ATTG），Cat（5′-3′：CAGAGGAAAGCGGTCAAGAA，3′-5′：CATTCTTAGGCTTCTGGGAGTT）和Gpx3（5′-3′：GACATCCGCTGGAACTTTGA，3′-5′：CCATCTTGACGTTGCTGACT）的表達(dá)水平，以Gapdh（5′-3′：GACATGCCGCCTGGAGAAAC，3′-5′：AGCCCAGGATGCCCTTTAGT）為內(nèi)參。在總反應(yīng)體系加入cDNA模板（1 μL），2×superReall PeMiK Pus（10 μL），50×ROX Rltene Dye（0.4 μL），上、下游引物各0.6 μL，最后添加無(wú)酶水（7.4 μL）至總體積20 μL，PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)反應(yīng)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，采用2-△△Ct法計(jì)算樣品中各基因的相對(duì)表達(dá)量[16]。

1.4.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以結(jié)果以均值（Means）±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法使用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行兩兩比較，組間比較采用最小顯著性差異法（Least Significant Difference，LSD）進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)，方差不齊采用Tamhane T2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Graphpad Prism9進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 GFPS對(duì)PCOS大鼠動(dòng)情周期的影響

雌性SD大鼠的動(dòng)情周期一般為4～5天[17]，其陰道上皮細(xì)胞的類(lèi)型可分為存在大量橢圓形有核上皮細(xì)胞的動(dòng)情前期，存在大多數(shù)不規(guī)則角化上皮細(xì)胞的動(dòng)情期，存在不規(guī)則角化上皮細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞的動(dòng)情后期和以白細(xì)胞為主的動(dòng)情間期等4個(gè)典型階段[18]。在用來(lái)曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠經(jīng)典模型中，可以觀(guān)察到模型大鼠伴有激素水平的異常及動(dòng)情周期紊亂等與人PCOS類(lèi)似的臨床癥狀[19]。

如圖1a所示，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間正常組大鼠呈現(xiàn)規(guī)律的動(dòng)情周期，而PCOS大鼠的動(dòng)情周期多處于后期和間期，出現(xiàn)典型動(dòng)情周期紊亂情況（圖1b～e）。本次研究中所觀(guān)察到的PCOS大鼠動(dòng)情周期長(zhǎng)時(shí)間處于間期的現(xiàn)象與Wang等[20]所報(bào)道的PCOS大鼠動(dòng)情周期紊亂較為一致。GFPS和Met分別處理后，PCOS大鼠動(dòng)情周期逐漸趨于正常，提示GFPS能夠有效改善PCOS大鼠所出現(xiàn)的動(dòng)情周期紊亂。PCOS大鼠動(dòng)情周期紊亂的原因與下丘腦-垂體-性腺軸（Hypothalamic-Pituitary-Ovarianaxis，HPOA）的失衡相關(guān)，HPOA的失衡，抑制卵巢E2、FSH水平的產(chǎn)生，導(dǎo)致PCOS大鼠失去規(guī)律的動(dòng)情周期，影響卵泡發(fā)育的成熟[21]。GFPS通過(guò)改善PCOS大鼠的性激素水平有效的改善了PCOS大鼠動(dòng)情周期紊亂。Li等[22]的研究表明從灰樹(shù)花子實(shí)體提取的多糖主要單糖組成為葡萄糖（Glc）、少量的甘露糖（Man）和半乳糖（Gal），三者間的摩爾比為15.2:2.8:1.0，這與本次實(shí)驗(yàn)中我們所使用GFPS的單糖構(gòu)成較為接近。此外，傳統(tǒng)藥食兩用植物石斛多糖（主要單糖構(gòu)成為Glc、Man和Gal，其中Glc占比66.2%）也能夠糾正來(lái)曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠紊亂的動(dòng)情周期[23]。

圖1 GFPS對(duì)PCOS大鼠陰道上皮細(xì)胞（a）及動(dòng)情周期（b～e）的影響Fig.1 Effect of GFPS on vaginal epithelial cells (a) and estrous cycle (b~e) in PCOS rats

2.2 GFPS對(duì)PCOS大鼠子宮、卵巢形態(tài)和卵巢病理學(xué)變化的影響

PCOS患者因體內(nèi)存在過(guò)高的雄激素水平，造成卵巢形態(tài)異常[24]，同時(shí)引發(fā)子宮炎癥和血管分布異常等病理現(xiàn)象[25]。與正常組相比，PCOS大鼠卵巢組織和子宮普遍蒼白、供血減少，卵巢包膜增厚且體積增大這一結(jié)果與我們前期研究一致[13,14]。GFPS和Met分別干預(yù)后上述癥狀明顯改善（圖2a）。HE染色結(jié)果顯示，正常組大鼠卵巢中可見(jiàn)多個(gè)黃體和不同階段發(fā)育的卵泡，少見(jiàn)囊性擴(kuò)張的卵泡（圖2b）。與正常組相比，PCOS大鼠多個(gè)卵泡呈囊性擴(kuò)張，黃體明顯減少、顆粒細(xì)胞層變薄，提示無(wú)排卵，這與Rajan等[26]所報(bào)道的對(duì)卵巢的研究結(jié)果一致。經(jīng)GFPS和Met分別干預(yù)后，PCOS大鼠卵巢組織內(nèi)囊泡減少，黃體增多、顆粒細(xì)胞層增厚，部分可恢復(fù)至正常卵泡形態(tài)。研究顯示鐵皮石斛多糖也可減少PCOS大鼠囊性卵泡、增加黃體數(shù)量，增厚卵巢顆粒層[27]，而石斛多糖主要由Glc和Man構(gòu)成[28]。這一研究也佐證了富含Glc的GFPS能顯著改善PCOS大鼠的卵巢病理癥狀。

圖2 GFPS對(duì)PCOS大鼠子宮和卵巢形態(tài)（a）及卵巢病理學(xué)變化（b）的影響Fig.2 Effect of GFPS on uterine and ovarian morphology (a) and ovarian pathological changes (b) in PCOS rats

2.3 GFPS對(duì)PCOS大鼠體重、內(nèi)臟脂肪及脂質(zhì)水平的影響

PCOS患者多伴有肥胖，這不僅會(huì)加重IR和代償性高胰島素血癥，增加脂肪的生成，同時(shí)肥胖使卵泡膜細(xì)胞對(duì)黃體生成素的刺激敏感，造成高雄激素血癥[29,30]，這些都會(huì)阻礙PCOS患者卵泡發(fā)育[31]。內(nèi)臟脂肪的堆積與代謝綜合征、2型糖尿病和心血管疾病的發(fā)生相關(guān)，它是反映疾病嚴(yán)重程度的指標(biāo)[32,33]。本研究對(duì)比各組大鼠體質(zhì)量和內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量發(fā)現(xiàn)（圖3），各組大鼠初始體重?zé)o顯著性差異，至21 d實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，PCOS大鼠體重和內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量較正常組顯著升高了21.79%和62.22%（P＜0.01）。Met組大鼠體重和脂肪相對(duì)質(zhì)量較PCOS組分別下降了12.20%和23.67%（P＜0.01），GFPS組大鼠的體重和脂肪相對(duì)質(zhì)量較PCOS組分別下降了9.20%和24.08%（P＜0.01）。研究發(fā)現(xiàn)，主要構(gòu)成為Glc的烏龍茶多糖[34]，能顯著降低高脂飲食大鼠體重并減少其內(nèi)臟脂肪堆積[35]。鐵皮石斛多糖也能降低高脂飲食所造成的小鼠內(nèi)臟脂肪組織中的炎癥水平[36]，這有力的佐證了GFPS對(duì)PCOS大鼠體重和內(nèi)臟脂肪具有改善作用。

圖3 GFPS對(duì)PCOS大鼠體重及內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量的影響Fig.3 Effect of GFPS on body weight and relative mass of visceral fat in PCOS rats

進(jìn)一步檢測(cè)大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C的水平發(fā)現(xiàn)（圖4），PCOS大鼠血清TC、TG、LDL-C水平較正常組分別升高了2.48倍、1.87倍和4.97倍（P＜0.01），HDL-C下降了50.00%（P＜0.01）。Met組大鼠血清中TG、LDL-C降低了33.94%、36.81%（P＜0.01），HDL-C升高了2.04倍（P＜0.01）；GFPS組大鼠血清中TC、TG、LDL-C分別降低了82.46%、66.94%、83.71%（P＜0.01）。這與Pan等[37]所研究GFPS降低高糖高脂飼料飲食大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平降低的研究結(jié)果一致。但值得注意的是，我們的研究結(jié)果顯示GFPS對(duì)PCOS大鼠血清HDL-C水平無(wú)顯著改善作用（P＞0.05），且Guo等[38]研究結(jié)果也提示GFPS對(duì)糖尿病小鼠血清中HDL-C水平無(wú)顯著性影響。這表明GFPS通過(guò)降低PCOS大鼠血清中TC、TG和LDL-C的水平從而發(fā)揮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂的作用。

圖4 GFPS對(duì)PCOS大鼠血清中（TC，TG，LDL-C和HDL-C）水平的影響Fig.4 Effect of GFPS on serum levels of (TC, TG, LDL-C and HDL-C) in PCOS rats

2.4 GFPS對(duì)PCOS大鼠性激素水平的影響

性激素紊亂作為PCOS患者的典型癥狀其具體的機(jī)制可能與HPOA軸失衡和芳香化酶功能失調(diào)有關(guān)。正常生理情況下，促性腺激素釋放激素刺激垂體前葉分泌LH和FSH。下丘腦的促性腺激素釋放激素脈沖頻率增加會(huì)刺激LH的合成，導(dǎo)致LH/FSH比率升高[39]。LH進(jìn)一步刺激卵泡膜細(xì)胞合成雄烯二酮，F(xiàn)SH通過(guò)芳香化酶活性影響雄烯二酮向雌二醇的轉(zhuǎn)化，而來(lái)曲唑抑制了芳香化酶活性，導(dǎo)致卵巢中雄激素升高，雌激素下降[40]。卵巢激素水平的紊亂會(huì)導(dǎo)致排卵障礙，進(jìn)一步引發(fā)月經(jīng)生理周期的紊亂并造成不孕癥[41]。

如圖5示，PCOS大鼠血清中激素T、LH和LH/FSH比值較正常組升高了20.59%、23.56%和69.39%（P＜0.01），E2和FSH水平則分別下降了26.25%、37.18%（P＜0.01），這些激素水平的變化與Ndeingang等[42]采用相同造模方法的PCOS大鼠T、LH水平升高、E2降低的研究結(jié)果一致。相比PCOS模型組，Met組大鼠的T、LH水平下降了17.69%和22.87%，E2升高了31.30%（P＜0.01）；GFPS組大鼠血清T、LH及LH/FSH比值分別下降20.48%、14.57%和23.63%（P＜0.01），E2和FSH水平則分別升高50.23%和15.00%（P＜0.05）。此外，藥食同源類(lèi)石斛多糖、黃芪多糖也降低了PCOS大鼠血清T水平、升高了PCOS大鼠血清E2水平[24,43]，而多項(xiàng)關(guān)于黃芪多糖的結(jié)構(gòu)研究表明其主要由Glc構(gòu)成[44]，這為GFPS能夠改善PCOS大鼠異常的性激素水平提供了有力支撐。

圖5 GFPS對(duì)PCOS大鼠血清激素（T、LH、FSH和E2）及LH/FSH比值的影響Fig.5 Effect of GFPS on serum hormones (T, LH, FSH and E2)and LH/FSH ratio in PCOS rats

2.5 GFPS對(duì)PCOS大鼠血清中MDA及SOD水平的影響

氧化應(yīng)激在PCOS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[45]。MDA、SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等是評(píng)估氧化應(yīng)激損傷重要的生物標(biāo)志物[46]，PCOS患者中的高雄激素血癥、肥胖、胰島素抵抗會(huì)引起卵巢中氧化應(yīng)激水平的異常[47]，主要表現(xiàn)為抗氧化酶水平下降，MDA水平升高[48]。本研究中，PCOS組大鼠血清中MDA水平較正常組升高了2.57倍，血清中SOD水平較正常組降低了5.85%（P＜0.05，圖6）。這與Haslan等[49]所報(bào)告的來(lái)曲唑誘導(dǎo)PCOS大鼠血清中MDA及SOD水平變化趨勢(shì)較為一致。而GFPS和Met干預(yù)后，MDA水平較PCOS組分降低了43.52%和38.87%（P＜0.01），SOD水平分別升高了9.90%和6.10%（P＜0.01）。Kou等[50]發(fā)現(xiàn)GFPS能降低糖尿病大鼠血清中MDA，升高SOD水平，從而改善氧化應(yīng)激水平。上述結(jié)果支持了GFPS能夠改善PCOS大鼠血清中氧化應(yīng)激水平這一結(jié)論。

圖6 GFPS對(duì)PCOS大鼠血清中MDA與SOD水平的影響Fig.6 Effect of GFPS on the serum levels of MDA and SOD in PCOS rats

2.6 GFPS對(duì)PCOS大鼠卵巢組織中抗氧化基因酶（Sod1、Sod2、Cat和Gpx3）表達(dá)的影響

研究顯示PCOS患者血清中SOD、GPx、CAT等抗氧化酶水平是顯著下降的[51]。多糖具有提高抗氧化酶活性、消除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用，可以減少組織或器官中氧化應(yīng)激損傷[52,53]。為了進(jìn)一步探索GFPS對(duì)PCOS大鼠氧化應(yīng)激的影響，我們檢測(cè)了PCOS大鼠卵巢組織中Sod1、Sod2、Cat和Gpx3抗氧化基因酶的mRNA表達(dá)。如圖7所示，PCOS組織中Sod1和Cat的mRNA表達(dá)水平較正常組降低了26.91%、35.06%（P＜0.05），Sod2、Gpx3的mRNA表達(dá)水平較正常組降低了72.09%、72.72%（P＜0.01）。Met干預(yù)后的PCOS大鼠卵巢組織中Sod1、Cat、Gpx3的mRNA表達(dá)水平較PCOS組顯著提高3.90、1.93、3.19倍（P＜0.01），Sod2的mRNA表達(dá)水平提高了63.90%（P＜0.05）。GFPS組大鼠卵巢組織中Sod1、Sod2、Gpx3的mRNA表達(dá)水平分別較PCOS組提高了3.86、3.16和2.75倍（P＜0.01），Cat的mRNA表達(dá)水平提高了1.57倍（P＜0.05）。研究提示經(jīng)酶解處理提取的灰樹(shù)花多糖具有α糖苷鍵構(gòu)型，主要單糖由Man、Glc和Gal構(gòu)成，摩爾比為1.00:16.36:5.25，其具有的三螺旋立體構(gòu)型，會(huì)使抗氧化活性更高[54]，這也提示了GFPS對(duì)PCOS大鼠機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)具有改善作用。

圖7 GFPS對(duì)PCOS大鼠卵巢中抗氧化基因酶(Sod1、Sod2、Cat和Gpx3)mRNA水平的影響Fig.7 Effect of GFPS on the mRNA levels of antioxidant gene enzymes (Sod1, Sod2, Cat and Gpx3) in the ovaries of PCOS rats

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，GFPS能夠通過(guò)改善PCOS大鼠血清中性激素水平，改善PCOS大鼠動(dòng)情周期的紊亂并促進(jìn)PCOS大鼠卵泡的成熟和發(fā)育。同時(shí)，GFPS處理還能降低PCOS大鼠體重的增長(zhǎng)，減少其內(nèi)臟脂肪相對(duì)質(zhì)量，改善PCOS大鼠血清脂質(zhì)代謝水平。此外，GFPS也通過(guò)上調(diào)PCOS大鼠卵巢組織中抗氧化基因酶（Sod1、Sod2、Cat和Gpx3）的基因表達(dá)水平來(lái)改善PCOS大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)（即升高了血清中的SOD水平，并降低了血清MDA水平）。上述結(jié)果充分證明了GFPS對(duì)PCOS大鼠的癥狀具有較好的改善效果，具體的作用機(jī)制可能與其參與調(diào)控PCOS大鼠的脂質(zhì)代謝以及參與對(duì)抗氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的機(jī)體損傷有一定的關(guān)系。本研究同時(shí)也為GFPS用于臨床輔助治療PCOS提供了較為有力的研究證據(jù)。