◎ 尹融昕，游 燕，李樺軍，羅 玉，于雅靜，余汪平

（1.云南省藥物研究所，云南 昆明 650111；2.云南白藥集團創(chuàng)新研發(fā)中心，云南 昆明 650111；3.云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點實驗室，云南 昆明 650111）

角結膜干燥癥，又稱干眼癥，是生活中比較常見的一類眼表疾病，影響人們的視覺，降低生活質量[1]。引發(fā)干眼癥的因素大不相同，如上班族長期使用電子用品、近視者長期佩戴隱形眼鏡、受過眼部損傷和做過眼部手術等[2-4]。全球干眼癥發(fā)病率為13%～33%，我國發(fā)病率為21%～30%，其中糖尿病患者患干眼癥的概率遠高于正常人，一般發(fā)病率為47%～64%[5-7]。

眼部護理功能食品開發(fā)中主要添加的天然成分有葉黃素、胡蘿卜素、玉米黃質以及藥食同源原料，如枸杞子、菊花[8-10]，部分產(chǎn)品添加具有抗氧化作用的天然提取物，如沙棘、越橘等[11-12]。藥智網(wǎng)查詢結果顯示，有319 條具有緩解視疲勞功能的保健食品的注冊信息，主要由植物提取物、保健食品原料、維生素等組成，如越橘提取物、藍莓提取物、葡萄籽提取物、枸杞子、菊花、決明子、葉黃素、β-胡蘿卜素、維生素A、牛磺酸和魚油等。

根據(jù)中醫(yī)藥材功能和辨證施治原則，干眼癥固體飲料主要功效為養(yǎng)陰生津、滋補肝腎，以解決干眼問題[13-15]。治療干眼癥的藥物可劃歸為補陰藥類，此類藥物藥性甘、寒，歸肝、腎經(jīng)[16-17]。按中醫(yī)理論組方，通過調(diào)節(jié)陰虛、肝腎不足的體質，達到緩解視疲勞和干眼癥、潤養(yǎng)與保護眼睛的作用，適用于長時間使用電子產(chǎn)品的人群[18-19]。本產(chǎn)品配方為覆盆子、枸杞子、決明子、菊花、石斛、茯苓、山藥和玫瑰花，此方由古方石斛夜光丸化裁而來，配方中藥均為藥食同源藥材，安全有效[20-21]。根據(jù)石斛夜光丸各組分的功效作用，化裁本方組方及用量，詳見表1[22]。人們對美好生活的需要日益增長，對眼健康的關注度也在加速增長，研發(fā)針對干眼癥的功能食品意義重大，產(chǎn)品具有較廣闊的市場前景[23]。

表1 方解及各藥味歸經(jīng)功能、用量表

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

覆盆子，亳州市肥貓藥業(yè)有限公司；枸杞子、決明子、山藥、石斛（干）、茯苓、菊花和玫瑰花，云南白藥集團中藥資源有限公司；赤蘚糖醇，保齡寶生物股份有限公司；羅漢果甜苷、甜菊糖苷，諸城市浩天藥業(yè)有限公司；維生素C，浙江一諾生物科技有限公司；果粉（百香果果粉、獼猴桃果粉、芒果果粉、菠蘿果粉、葡萄果粉、草莓果粉、藍莓果粉和蔓越莓果粉），拓豐粉體技術（昆山）有限公司；純化水。

1.2 儀器與設備

JJ1000 雙杰電子稱，常熟市雙杰測試儀器廠；藥材提取鍋，潮汕市湖安區(qū)金石鎮(zhèn)鋼龍五金制品廠；JY-009-C 低速大容量多管離心機，上海安亭科學儀器廠；JY-027-C 旋轉蒸發(fā)儀，上海愛郎儀器有限公司；JY-008-B 真空干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；JY-048-C 電磁爐，中山市真捷電器有限公司；MB-FD30H 電飯煲，廣東美的生活電器制造有限公司；JY-006-B 電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；電DM-300S 子密度計，廈門市弗布斯檢測設備有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 提取方法的優(yōu)化和提取液固含量測定

（1）不同提取條件對藥材提取率的影響。使用控制變量法探究不同提取時間、提取次數(shù)、液料比對提取率的影響，選取提取時間為1 h、2 h、3 h、4 h 和5 h，液料比（v∶m）選取4 倍、6 倍、8 倍、10 倍、12 倍5 個梯度，提取次數(shù)為1 次、2 次、3 次，分別考察不同條件下配方藥材的提取率，得到最佳提取方法。

（2）干眼癥提取液固含量的測定。在1.3.1（1）的最佳提取條件下，采用煎煮法提取，按照基礎配方的10 倍量稱取原料，將原料置于容器中，加入原料總重8 倍的純化水浸泡20 ～30 min，加蓋放電磁爐上加熱煎煮，沸騰后計時2 h，重復以上操作，二次操作煮沸1 h，合并濾液。將濾液濃縮至比重為1.20 g·g-1，加入95%乙醇，醇沉時長＞8 h，離心、除醇，將濾液濃縮至比重為1.20 g·g-1，得到干眼癥提取液。使用干燥法計算干燥物固含量，取平行測定的算數(shù)平均值為測定結果，兩次平行測定結果的絕對值差不大于0.30%。

1.3.2 口感優(yōu)化

（1）甜味劑、提取物使用量、矯味劑的選擇。選取赤蘚糖醇、羅漢果糖苷、甜菊糖苷、木糖醇、三氯蔗糖以及復配甜味劑（赤蘚糖醇、羅漢果糖苷、甜菊糖苷）作為本產(chǎn)品的甜味劑，產(chǎn)品單個包裝凈含量為6 g，以白砂糖為100%甜度，按照各原料的甜度添加赤蘚糖醇3 g、羅漢果甜苷0.02 g、甜菊糖苷0.02 g、木糖醇2 g、三氯蔗糖0.01 g 和復配甜味劑（赤蘚糖醇1.28 g、羅漢果甜苷0.01 g、甜菊糖苷0.01 g），200 mL 溫水沖泡，考慮到甜度及口感1 ～10 分盲評打分。優(yōu)化藥方提取物使用量，分別稱取0.5 g、1.0 g、1.5 g 和2.0 g 的提取物，配制樣品，200 mL 溫水沖泡，對口感1 ～10 分評分。提取物具有明顯的中藥味，為改善口味，用水果粉作為矯味劑調(diào)整口感，在最優(yōu)甜味劑的基礎上，稱取百香果果粉、獼猴桃果粉、芒果果粉、菠蘿果粉、葡萄果粉、草莓果粉、藍莓果粉和蔓越莓果粉各3.5 g，制成小樣，200 mL 溫水沖泡，志愿者對口感1 ～10 分評分。評分標準見表2。

表2 有助于緩解干眼癥固體飲料口感及甜度評價表

（2）沖泡方式的選擇。在單因素優(yōu)化完成后，優(yōu)化最優(yōu)配方?jīng)_泡方式，分別取50 mL、100 mL、200 mL、300 mL 和400 mL 溫水沖泡，對口感評分。

1.3.3 藥效實驗

通過人體試吃測試干眼癥食品的藥效。從本單位各部門成員中選取自愿試吃者作為志愿者，共93 例。篩選項目為佩戴隱形眼鏡時長或已行角膜屈光手術時長；每天平均用眼藥次數(shù)及時間；晚上睡眠質量情況；鼻子、嘴巴、喉嚨、皮膚和生殖器等部位是否覺得干燥；在抽煙環(huán)境、油煙環(huán)境、空氣污染環(huán)境、粉塵環(huán)境、空調(diào)環(huán)境和暖氣下眼睛是否敏感；是否長期服用抗過敏藥、利尿藥、降壓藥、安眠藥、精神病類用藥、避孕藥和更年期治療用藥。

入組90 例干眼癥受試者，男性41 人，女性49 人，平均年齡34.8 歲，隨機分成實驗組低劑量組（30 人）、實驗組高劑量組（30 人）、陽性對照組（30 人），實驗組為干眼癥食品，對照組為仁和藍莓葉黃素壓片糖果。低劑量組受試者一次1 袋，一天1 次，熱水沖泡，服用14 d；高劑量組受試者一次2 袋，一天1 次，熱水沖泡，服用14 d；陽性對照組受試者一次2 片，一天1 次，咀嚼或含服，服用14 d。對眼部癥狀、全身癥狀、中醫(yī)癥狀進行功效評價。

2 結果與分析

2.1 提取方法的優(yōu)化和提取液固含量測定

隨著提取時間、提取次數(shù)、液料比的增加，提取率逐漸增加。在不考慮生產(chǎn)成本、能源損耗的情況下，提取次數(shù)越多、液料比越大、提取時間越久，提取效果越好。根據(jù)實際生產(chǎn)需要，對比不同條件下的提取率，最大提取率偏差小于1%。考慮到減少工藝復雜程度和減少能源、物料損耗等實際生產(chǎn)成本，綜合3 項參數(shù)，維持提取率18%～20%，工藝條件確定為提取次數(shù)為2次，總提取時間為3 h，提取液料比為8倍，結果見圖1。

圖1 不同提取時間、提取次數(shù)、液料比對提取率的影響圖

2.2 口感的優(yōu)化

2.2.1 甜味劑、提取物使用量、矯味劑的選擇。

由圖2（a）可知，中藥材配方提取物在較低添加量時，口感較好。隨著提取物添加量的增加，超過1.0 g/袋時，口感評分呈快速降低趨勢，提取物添加量的增加會使其在產(chǎn)品配方體系中占比越來越大，在沖泡過程中會出現(xiàn)提取物口感遮蔽其他原料口味的現(xiàn)象，導致整體口感層次感降低。因此，選取1.0 g作為最佳提取物添加量。

圖2 不同配比提取物比例、甜味劑、矯味劑的優(yōu)化圖

由圖2（b）可知，在甜味劑的實驗中，三氯蔗糖甜度最高，其次是復配甜味劑，木糖醇排第3。在口感評分中，最佳甜味劑為復配甜味劑，其次為三氯蔗糖。復配甜味劑和三氯蔗糖甜度高，口味更接近白砂糖，因此口感和甜度的評分更高。在實驗中木糖醇和赤蘚糖醇的甜度低導致酸甜失調(diào)，因此口感和甜度評分不高，赤蘚糖醇和木糖醇甜度分別為蔗糖的60%～80%、90%～110%，在6 g/袋的產(chǎn)品中，中藥提取物味道過于濃郁，赤蘚糖醇和木糖醇不能遮蔽提取物帶入的味道，且整體用量約是其他代糖的200 倍，用量過大，影響其他成分的添加。甜菊糖苷和羅漢果糖苷天然風味較大，有后苦味和特殊腥味等異味，不被接受，導致評分較低。綜合口感和甜度評分，最終選取復配甜味劑作為最佳甜味劑。

由圖2（c）可知，在添加果粉調(diào)整口味的實驗中，芒果果粉、菠蘿果粉評價較差，這2 種果粉在本實驗條件下沖泡后出現(xiàn)渾濁的現(xiàn)象，口感的層次感不明顯，可能是果粉制備工藝與其他果粉差異較大。百香果、獼猴桃、葡萄、藍莓、草莓和蔓越莓果粉，整體口感相差不大，果味濃郁，沖泡后液體澄清，均可作為本產(chǎn)品的調(diào)味劑使用?？紤]到本產(chǎn)品的適應人群和其工作場景，選定百香果果粉作為矯味劑，能緩解眼干、眼澀，風味獨特，口感刺激，香氣突出，有提神醒腦功效。

2.2.2 不同沖泡方式對口感的影響

由圖3 可知，隨著沖泡體積的增大，產(chǎn)品口感評分先增加后降低，200 mL 達到最佳。低沖泡體積的產(chǎn)品濃度較大，百香果果粉在低溶劑條件下酸度呈幾何倍數(shù)增加，消費者很難接受。沖泡體積超過200 mL 后，體系增大，酸度降低，甜味、果汁風味同步降低，沖泡后口感寡淡。綜合實驗數(shù)據(jù)，沖泡體積選取200 mL。

圖3 不同沖泡方式對口感的影響圖

2.3 藥效實驗結果

2.3.1 人體試吃實驗統(tǒng)計學分析

通過人體試吃實驗，對志愿者眼部癥狀、全身癥狀、中醫(yī)癥狀進行打分評價，運用統(tǒng)計學方法進行分析。

（1）全身癥狀改善情況分析結果。表3 顯示全身癥狀改善情況組內(nèi)對照中，高劑量組顯著改善了全身癥狀；表4 顯示組間改善情況對比無差異，但與對照組和低劑量組相比，高劑量組對全身癥狀具有一定的改善作用。

表4 全身癥狀改善情況組間對照表

（2）眼部癥狀改善情況分析結果。表5 顯示眼部癥狀改善情況組內(nèi)對照中，3 個組均對眼部癥狀具有顯著改善效果；表6 顯示組間改善情況對比均無顯著差異，但與對照組和低劑量組相比，高劑量組對眼部癥狀具有一定的改善作用。

表5 眼部癥狀改善情況組內(nèi)對照表

表6 眼部癥狀改善情況組間對照表

（3）中醫(yī)癥狀改善情況分析結果。表7 顯示中醫(yī)癥狀改善情況組內(nèi)對照中，3 個組均對中醫(yī)癥狀具有顯著改善效果；表8 顯示組間改善情況對比均無顯著差異，但與低劑量組相比，高劑量組對中醫(yī)癥狀具有一定的改善作用。

表7 中醫(yī)癥狀改善情況組內(nèi)對照表

表8 中醫(yī)癥狀改善情況組間對照表

2.3.2 志愿者對產(chǎn)品功效的評價

由表9 可知，受試者對干眼癥食品的功效評價整體有效率為40%，低劑量比高劑量效果較好。對照組緩解干眼癥有療效的反饋例數(shù)為6 例；低劑量組對緩解干眼癥有療效的反饋例數(shù)為14 例；高劑量組對緩解干眼癥有療效的反饋例數(shù)為10 例。

表9 本產(chǎn)品功效評價表

3 結論與討論

綜上所述，全身癥狀、眼部癥狀、中醫(yī)癥狀組內(nèi)對照3 個組均具有顯著改善效果，組間改善情況對比均無顯著差異，但與低劑量組相比，高劑量組具有一定的改善作用。40%的志愿者受試結果顯示本產(chǎn)品對干眼癥具有較好的緩解作用。

人體試吃實驗中受試者對干眼癥食品的功效評價整體有效率為40%，本品的藥食同源提取物使用量為1 g，提取率約為18%，服用量未滿足整體人群的需求，存在人體差異，導致功效評價整體上有效率為40%。其他研究[24-25]表明中藥制劑對干眼癥有較好的治療作用；魏界城[26]的研究表明使用滋陰補腎湯治療干眼癥，可有效改善患者的臨床狀態(tài)，口服組的有效率為54.84%；馬芬俞等[27]的研究表明滋陰補腎方可有效治療干眼癥；趙衛(wèi)娜[28]研究表明玻璃酸鈉滴眼液輔以加味沙參麥冬湯治療干眼癥，治療有效率為89.06%；羅丹等[29]在采用人工淚液治療的基礎上，根據(jù)情況施以養(yǎng)陰清肺湯、丹梔逍遙散、杞菊地黃丸和生脈散合杞菊地黃丸等中藥制劑治療干眼癥，有效率為71.43%，遠高于僅用人工淚液組；武丹蕾等[30]以滋陰養(yǎng)血法治療血虛型干眼癥，有效率達89.4%。雖然本研究的有效率僅為40%，但考慮到其為食品干預，需要兼顧口感，該有效率可接受。在本研究中，低劑量相對于高劑量效果較好，可能因為計量梯度差較大，未能有效體現(xiàn)有效劑量，其次因為本品的口味為百香果味，酸味較高，高劑量組服用濃度較大，受試者難以接受，從而影響整體評價。此外，考慮到該產(chǎn)品為普通食品，需要按工廠實際情況落地，不需要精細的數(shù)據(jù)，故該實驗沒有進行正交實驗或響應面實驗。

隨著社會的發(fā)展，干眼癥已經(jīng)成為困擾人們生活的重要不良因素。本品對古方石斛夜光丸進行創(chuàng)新性改良，使用其中的藥食同源藥材重新組方，可調(diào)節(jié)陰虛、肝腎不足的體質，具有緩解視疲勞和干眼癥、潤養(yǎng)和保護眼睛的作用，適用于長時間接觸電子產(chǎn)品的人群，屬于中醫(yī)藥的創(chuàng)新性使用。