李明偉 肖慧芳 馮玉龍

1河南省職工醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 450002；2河南省職工醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)二科，鄭州 450002

肺炎是由支原體、細(xì)菌、病毒等感染引起的肺實質(zhì)炎癥，臨床表現(xiàn)為胸悶、鼻塞、咳嗽。機(jī)體細(xì)胞因子、凝血功能淋巴細(xì)胞亞群與肺炎的發(fā)病和發(fā)展密切相關(guān)，但是其中的關(guān)系尚不清楚［1-2］。因此，明確肺炎與機(jī)體炎性反應(yīng)、凝血纖溶功能、淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系具有重要的臨床意義。本文利用流式細(xì)胞儀與血栓彈力圖測定不同感染程度的肺炎患者凝血功能、細(xì)胞因子、淋巴細(xì)胞亞群的指標(biāo)變化情況，探討凝血功能、細(xì)胞因子、淋巴細(xì)胞亞群與肺炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性，為臨床診療肺炎提供參考。

資料與方法

1.一般資料

本文為試驗研究。選取2021年1月至2022年12月于河南省職工醫(yī)院就診的肺炎患者80例，根據(jù)急性生理學(xué)和慢性健康狀況評價Ⅱ（APACHEⅡ）評分［3］，其中危重型及以上（APACHEⅡ評分≥12分）36例，非危重型（APACHEⅡ評分＜12分）44例，男42例、女38例，年齡30～70（52.65±7.32）歲，病程2～14（5.58±1.32）d；另選擇健康中心體檢者50例作為對照組，男27例、女23例，年齡（55.21±5.53）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡≥18歲；（2）符合肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；（3）所有患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心腦血管、肝、腎功能嚴(yán)重障礙患者；（2）患有造血功能障礙、出血性疾病、腫瘤患者；（3）2周內(nèi)使用抗凝藥物［4］。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)河南省職工醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。

2.方法

（1）患者入院確診肺炎后，收集受試者清晨空腹靜脈血，進(jìn)行凝血功能、細(xì)胞因子檢測及淋巴細(xì)胞亞群檢測，并比較相關(guān)變化，包括白細(xì)胞介素（IL）-4、IL-6、IL-10、IL-1β、干擾素-γ（IFN-γ）、凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間、纖維蛋白原水平α角、血小板功能最大振幅（maximum amplitude，MA）、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+［5-6］；通過q-PCR檢測口咽拭子，下呼吸道7項，確定肺炎感染菌株。對照組于清晨空腹收集靜脈血做對照。（2）標(biāo)本采集和處理。選用促凝管抽取靜脈血用于機(jī)體細(xì)胞因子的檢測［7］，選用枸櫞酸抗凝管抽取2 ml靜脈血用于血凝功能的檢測，選用EDTA抗凝管用于淋巴細(xì)胞亞群的檢測［8］。細(xì)胞因子檢測：利用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞因子的變化情況，將促凝管血離心3 000 r/min，5 min，離心機(jī)半徑85 mm。取50 μl上清于流式管后加入50 μl捕獲微球，室溫避光孵育1 h后加入100 μl熒光標(biāo)記抗體，再次室溫避光孵育1 h，磁分離1～2 min后加入200 μl磁珠稀釋液洗滌，重復(fù)1次，加入200 μl磁珠分離液，上機(jī)檢測細(xì)胞因子的數(shù)據(jù)變化；凝血功能檢測：取1 ml全血予以20 μl高嶺土試劑靜置激活4 min，利用血栓彈力圖儀觀察機(jī)體血小板計數(shù)、纖維蛋白原、凝血因子等血凝指標(biāo)［9］；淋巴細(xì)胞亞群檢測：取30 μl的CD3+/CD4+/CD8+/CD45預(yù)混抗體分別加到T和BNK流式管中，然后加入50 μl充分混勻的抗凝全血，渦旋混勻，室溫避光孵育15 min，加入450 μl的1×溶血素，渦旋混勻，避光孵育15 min，上機(jī)檢測。儀器：流式細(xì)胞儀（型號：EasyCell 206A1），血栓彈力圖（型號：LEPU-8800）。

3.觀察指標(biāo)

觀察并記錄受試者IL-1β、L-4、IL-6、IL-8、IL-10和IFN-γ等炎性因子的變化；觀察并記錄受試者的血凝情況，包括凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間、纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA；觀察并記錄CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的變化情況，并將其數(shù)據(jù)進(jìn)行對比與分析。

4.統(tǒng)計學(xué)方法

采用GraphPad Prim 8.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，3組間比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)采用獨立樣本t檢驗，凝血功能、細(xì)胞因子、淋巴細(xì)胞亞群與肺炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.80例患者肺炎感染類型分布

由下呼吸道7項結(jié)果可知，本研究80例肺炎患者的感染種類大致分布在肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌。肺炎鏈球菌51例，占比63.75%，肺炎克雷伯菌24例，占比30.00%，二者同時感染患者有5例，占比6.25%。由此可見，本研究肺炎患者大多是由肺炎鏈球菌所致。

2.細(xì)胞因子（表1）

表1 肺炎患者與健康體檢者的細(xì)胞因子對比（ng/L,±s）

表1 肺炎患者與健康體檢者的細(xì)胞因子對比（ng/L,±s）

注：根據(jù)急性生理學(xué)和慢性健康狀況評價Ⅱ（APACHEⅡ）評分，其中危重型及以上APACHEⅡ評分≥12分，非危重型APACHEⅡ評分＜12分；對照組為健康體檢者。IFN-γ為干擾素-γ，IL為白細(xì)胞介素；與非危重組、對照組比較，aP＜0.05

組別對照組非危重組危重組F值P值例數(shù)50 44 36 IFN-γ 5.22±1.77 13.61±2.44 26.28±4.63a 4.52 0.044 IL-4 6.32±1.50 15.55±3.76 41.43±4.33a 4.99 0.019 IL-10 5.26±1.23 12.44±2.57 30.35±7.96a 4.22 0.026 IL-8 14.42±3.56 27.25±6.91 121.12±30.53a 5.37 0.031 IL-1β 7.44±2.72 14.42±2.95 30.52±3.19a 5.71 0.025 IL-6 7.16±2.23 90.55±22.67 430.47±110.23a 12.42＜0.001

在肺炎的發(fā)生發(fā)展過程中，機(jī)體可產(chǎn)生炎性應(yīng)激反應(yīng)，使部分炎性因子不同于正常水平［10］。本研究發(fā)現(xiàn)，肺炎嚴(yán)重程度與機(jī)體炎性因子水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。危重組患者IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-8、IL-1β、IL-6指標(biāo)均高于非危重組、對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。危重組IL-6水平是非危重組的6.31倍，分析原因為IL-6作為Th2型細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)體內(nèi)的免疫功能，當(dāng)危重型感染患者時IL-6水平會驟然升高，因此，可通過測定細(xì)胞因子判定肺炎的嚴(yán)重程度［11］。當(dāng)IL-4、IL-6、IL-8、IL-10因子迅速升高上百倍，甚至數(shù)千倍時，往往代表病情迅速發(fā)展，需要密切觀察和治療。同時，若IL-6、IL-10均升高10倍，可能提示革蘭陰性菌感染；IL-6升高2倍以上，但I(xiàn)L-10增高值＜10倍，可能提示革蘭陽性菌感染，因此，細(xì)胞因子測定對臨床判斷感染種類及感染程度具有重要的實踐意義。對照組與非危重組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-8、IL-1β、IL-6的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=0.32、0.36、0.31、0.42、0.35、0.54）；非危重組與危重組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-8、IL-1β、IL-6的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=0.27、0.48、0.30、0.59、0.21、0.89）。

3.凝血功能（表2）

表2 肺炎患者與健康體檢者的凝血功能對比（±s）

表2 肺炎患者與健康體檢者的凝血功能對比（±s）

注：根據(jù)急性生理學(xué)和慢性健康狀況評價Ⅱ（APACHEⅡ）評分，其中危重型及以上APACHEⅡ評分≥12分，非危重型APACHEⅡ評分＜12分；對照組為健康體檢者。α角、K時間均代表纖維蛋白原水平，MA為最大振幅，代表血小板功能，R時間代表凝血因子活性；與非危重組、對照組比較，aP＜0.05

組別對照組非危重組危重組F值P值例數(shù)50 44 36 α角（deg）72.44±4.82 55.38±4.44 42.62±3.37a 4.31 0.039 MA（mm）71.62±3.54 51.23±3.76 39.61±2.87a 4.27 0.036 R時間（min）4.22±0.50 7.26±0.64 10.43±0.85a 13.65 0.008 K時間（min）1.28±0.41 2.12±0.29 3.92±0.31a 12.59 0.074

機(jī)體在肺炎的發(fā)生發(fā)展過程中可產(chǎn)生相應(yīng)的炎性反應(yīng)，導(dǎo)致凝血功能發(fā)生異常［12］。利用血栓彈力圖對肺炎患者進(jìn)行凝血功能監(jiān)測，有助于對病情的診斷與預(yù)后。危重組患者纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA均低于非危重組、對照組，凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間均高于非危重組、對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。對照組與非危重組纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA、凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=-0.50、-0.78、0.44、0.79）；非危重組與危重組纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA、凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=-0.33、-0.36、0.24、0.19）。以上結(jié)果表明，肺炎從非危重型到危重型，凝血功能存在相應(yīng)變化，與相關(guān)研究一致［13］。因此，實時監(jiān)測凝血功能對肺炎的診斷及預(yù)后具有重要的臨床意義。

4.淋巴細(xì)胞亞群（表3）

表3 肺炎患者與健康體檢者的淋巴細(xì)胞亞群對比（±s）

表3 肺炎患者與健康體檢者的淋巴細(xì)胞亞群對比（±s）

注：根據(jù)急性生理學(xué)和慢性健康狀況評價Ⅱ（APACHEⅡ）評分，其中危重型及以上APACHEⅡ評分≥12分，非危重型APACHEⅡ評分＜12分；對照組為健康體檢者。與非危重組、對照組比較，aP＜0.05

組別對照組非危重組危重組F值P值例數(shù)50 44 36 CD3+（%）78.15±4.22 62.27±3.21 48.42±3.38a 6.84 0.002 CD4+（%）42.32±1.56 37.22±2.72 29.56±1.15a 7.30 0.010 CD4+/CD8+1.85±0.13 1.46±0.20 1.15±0.16a 5.90 0.020

T淋巴細(xì)胞是評價免疫功能最重要的指標(biāo)，其分子標(biāo)志物為CD3+，可反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)。CD4+/CD8+比值可反映集體的免疫功能程度，比值越低免疫功能越差［14］。對照組、非危重組、危重組的CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞亞群及CD4+/CD8+比值均呈下降趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。由此可見，不同嚴(yán)重程度的肺炎與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。危重組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+指標(biāo)均低于非危重組、對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。對照組與非危重組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+指標(biāo)的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=-0.22、-0.10、-0.11）；非危重組與危重組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+指標(biāo)的Spearman相關(guān)系數(shù)（r=-0.15、-0.19、-0.08）。

討論

據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）調(diào)查顯示，呼吸系統(tǒng)急性感染病死率中，肺炎占75%。因此，肺炎感染程度準(zhǔn)確的判斷對于臨床合理用藥、保障人民身體健康具有重要的臨床意義。機(jī)體經(jīng)病原微生物感染后可分泌炎癥因子和毒素而加重感染程度，甚至引發(fā)更多的并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅人們的生命健康［15］。炎癥因子隨著血流進(jìn)入血液系統(tǒng)可引起機(jī)體血小板功能、凝血因子活性、纖維蛋白原水平發(fā)生顯著變化，導(dǎo)致機(jī)體凝血功能障礙。因此，肺炎患者進(jìn)行細(xì)胞因子及凝血功能測定對判斷患者感染嚴(yán)重程度具有重要意義。

在感染性疾病中，IFN-γ、IL-8、IL-1β、IL-6等促炎細(xì)胞因子可激活全身或局部的炎性反應(yīng)，感染程度不同，其數(shù)值可發(fā)生較大變化［16］。本研究中，危重組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-8、IL-1β、IL-6分別是非危重組肺炎患者的2.46、7.69、3.09、4.22、2.66、6.31倍，且均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。這表明促炎細(xì)胞因子在重癥肺炎發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，因此，可通過測定細(xì)胞因子判斷機(jī)體感染程度及預(yù)后療效。同時，危重組及非危重組肺炎患者的凝血功能顯示，凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間隨著肺炎嚴(yán)重程度數(shù)值會升高，具有一定相關(guān)性，危重組及非危重組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。這是由于R時間代表機(jī)體的凝血狀態(tài)，K時間代表血凝塊形成的速度，當(dāng)患者為重癥肺炎時，機(jī)體血小板和纖維蛋白原較少，形成血凝塊的速度放緩，表現(xiàn)為低凝狀態(tài)，二者數(shù)值水平與炎癥程度密切相關(guān)。纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA分別代表血凝酶形成的速度和血凝塊的硬度及最大強(qiáng)度，危重組肺炎患者的數(shù)值均低于非危重組，二者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。肺炎嚴(yán)重程度的增加，纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA逐漸降低，對毛細(xì)血管的保護(hù)相應(yīng)降低，病死率相應(yīng)增加［17-18］。

本研究采用流式細(xì)胞儀技術(shù)比較正常人及不同嚴(yán)重程度肺炎患者的淋巴細(xì)胞亞群變化。當(dāng)肺炎較為嚴(yán)重時，機(jī)體免疫能力會下降，T淋巴細(xì)胞從而減少，可能會導(dǎo)致疾病進(jìn)一步嚴(yán)重的現(xiàn)象［19］。本研究表明，隨著肺炎嚴(yán)重程度的增加，機(jī)體的免疫功能逐漸降低，危重組CD3+T淋巴細(xì)胞與非危重組、對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。CD4+/CD8+比值與肺炎嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，比值越低，表明肺炎越嚴(yán)重。因此，在疾病早期檢測淋巴細(xì)胞亞群，有助于疾病的治療及預(yù)后［20］。

由本研究可知，當(dāng)機(jī)體正相關(guān)系數(shù)細(xì)胞因子、凝血因子活性R時間、纖維蛋白原水平K時間增加時，肺炎的嚴(yán)重程度相應(yīng)增高，Spearman相關(guān)系數(shù)均r＞0；隨著體內(nèi)負(fù)相關(guān)系數(shù)纖維蛋白原水平α角、血小板功能MA、CD3+、CD4+的降低，肺炎的嚴(yán)重程度相應(yīng)增高，Spearman相關(guān)系數(shù)均r＜0。因此，本研究表明細(xì)胞因子及凝血功能測定對評估肺炎感染程度及預(yù)后具有重要的臨床意義，臨床可廣泛使用。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明李明偉：文章撰寫，試驗設(shè)計和統(tǒng)籌安排；肖慧芳：試驗操作，對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱；馮玉龍：數(shù)據(jù)分析