韓 敏,易 旭

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,貴陽 550025;2．貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)實驗室,貴陽 550003)

研究表明,長期慢性酒精攝入能夠通過異常酒精代謝導(dǎo)致的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH/NAD+)百分比增加、氧化應(yīng)激誘導(dǎo)、脂質(zhì)代謝紊亂、抑制自噬等機制誘發(fā)肝細(xì)胞的脂肪變性[1],從而形成酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)[2]。自噬作為各種生理和疾病條件下細(xì)胞適應(yīng)和生存的一種重要機制,在維持細(xì)胞穩(wěn)定性中有著重要作用[3]。研究發(fā)現(xiàn),慢性酒精攝入能夠激活FK-506結(jié)合蛋白(FKBP)-哺乳動物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1(mTORc1)和抑制腺苷酸激活蛋白激酶表達,通過抑制下游的Unc-51樣激酶1(ULK1)復(fù)合體形成導(dǎo)致自噬的抑制,出現(xiàn)肝細(xì)胞中脂質(zhì)的積累、線粒體穩(wěn)態(tài)失調(diào)和核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(NLIP3)炎癥小體活化增多等從而促進脂肪肝的形成[4-5]。因此,調(diào)節(jié)自噬是AFLD的一種潛在治療策略,這一認(rèn)識已在白藜蘆醇通過增加自噬體數(shù)量,上調(diào)微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin1表達,下調(diào)p62蛋白表達發(fā)揮抗AFLD的治療作用中得到驗證[6]。研究發(fā)現(xiàn),酒精暴露還可以抑制自噬激活的另一重要調(diào)節(jié)分子叉頭框蛋白O1(FOXO1)的表達,導(dǎo)致固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)與脂肪酸合成酶表達水平上調(diào),從而增加脂質(zhì)生成和誘導(dǎo)肝細(xì)胞壞死[7-9]。但酒精如何介導(dǎo)FOXO1表達抑制仍不清楚。LIANG等[10]發(fā)現(xiàn),主要在肝臟合成的絲氨酸蛋白酶抑制劑B1a(SerpinB1a)表達抑制會下調(diào)FOXO1表達水平,減弱FOXO1的抗氧化應(yīng)激作用,從而加重糖尿病性腎病中的氧化應(yīng)激反應(yīng)。這提示SerpinB1a對FOXO1表達水平的正向調(diào)控作用,但SerpinB1a是否參與AFLD的發(fā)生尚缺少文獻報道。已知磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(pSTAT3)可以通過對Bcl-2家族成員、自噬相關(guān)基因BECN1、磷脂酰肌醇3激酶C3(PIK3C3)等與自噬相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)參與自噬的抑制或活化[11]。運用乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因敲除小鼠,發(fā)現(xiàn)激活STAT3可以通過減弱SREBP-1c基因轉(zhuǎn)錄、抑制脂肪酸合成和影響脂肪肝發(fā)展來減輕乙醇攝入引起的脂肪肝[12]。此外,pSTAT3在AFLD中通過上調(diào)自噬相關(guān)基因5(ATG5)的表達促進自噬以發(fā)揮保護作用[13]。XU等[14]通過慢病毒轉(zhuǎn)染抑制豬胰腺細(xì)胞SerpinB1a蛋白表達,引起pSTAT3表達水平下調(diào),相反,過表達SerpinB1a蛋白則可以通過上調(diào)pSTAT3表達來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期以促進豬胰腺細(xì)胞增殖,提示了SerpinB1a與pSTAT3存在正調(diào)控關(guān)系。但尚未見肝臟相關(guān)疾病中有關(guān)SerpinB1a與pSTAT3調(diào)控關(guān)系的研究報道。

基于AFLD病理階段存在FOXO1和pSTAT3介導(dǎo)的肝臟自噬抑制作用及其分別與SerpinB1a的調(diào)控關(guān)系的研究認(rèn)識,設(shè)想SerpinB1a在肝組織表達水平的變化可能與AFLD的發(fā)生有關(guān)。因此,本文采用4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定、分析了SerpinB1a蛋白在AFLD小鼠肝組織中的表達水平及其在白藜蘆醇抗AFLD干預(yù)機制中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物

選取雄性無特殊病原體(SPF)級C57BL/6J小鼠9只[北京唯尚立德,SCXK(京)2016-0009],體重20～24 g,在有適宜溫度、濕度、光照的獨立通風(fēng)籠具(IVC)系統(tǒng)的動物房內(nèi)飼養(yǎng)。將小鼠隨機分為3組:正常對照組(C組)、模型組(M組)、白藜蘆醇干預(yù)組(R組),每組各3只。

1.1.2主要試劑

95%乙醇(上海阿拉丁生化科技股份有限公司);胰酶[普洛麥格(北京)生物技術(shù)有限公司];丙酮(浙江漢諾化工科技有限公司);蛋白酶抑制劑(美國Merck Millipore公司);碘乙酰胺、尿素、煙酰胺、二硫蘇糖醇、三氯乙酸及四乙基溴化銨(美國Sigma公司);甲酸(美國Fluka公司);去乙?；敢种苿?美國MedChemExpress公司);乙腈(美國Thermo Fisher Scientific公司);二喹啉甲酸(BCA)蛋白濃度測定試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司);超純水(美國Fisher Chemical公司)等。

1.2 方法

1.2.1AFLD小鼠模型建立及白藜蘆醇干預(yù)

參考文獻[15]方法進行AFLD模型制備,即使用江蘇南通特洛菲標(biāo)準(zhǔn)型Lieber-DeCarli乙醇液體、對照液體飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后,自由進食10 d乙醇液體飼料,第16天灌胃給予1次95%乙醇。經(jīng)鑒定模型制備成功后,按1次/d、400 mg/次灌胃給予白藜蘆醇溶液(美國Sigma公司,使用滅菌的30% Kolliphor HS15溶液配制),9 d后收集肝組織標(biāo)本,置于-80 ℃超低溫冰箱中以備蛋白質(zhì)組學(xué)檢測用。

1.2.2SerpinB1a蛋白的4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析

1.2.2.1鑒定思路

構(gòu)建UniProt數(shù)據(jù)庫來源的小鼠肝組織標(biāo)本特異性蛋白數(shù)據(jù)庫,進行標(biāo)本總蛋白提取和胰酶酶解后的蛋白肽段制備,經(jīng)基于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)獲得并分析標(biāo)本中肽段的質(zhì)量與信號強度,以及肽段碎裂后碎片離子的質(zhì)量和信號強度。利用Maxquant軟件(v1.6.15.0)進行二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)的檢索,通過算法打分過濾后獲得正確匹配的理論肽段序列。

1.2.2.2肝組織中總蛋白提取、胰酶消化

稱取適量小鼠肝組織樣品于液氮中充分研磨成粉狀并轉(zhuǎn)移至5 mL的離心管。然后,加入4倍體積的組織裂解液(含50 mmol/L煙酰胺,3 μmol/L去乙酰化酶抑制劑,1%蛋白酶抑制劑及8 mol尿素)超聲下裂解。在4 ℃下,12 000×g離心10 min,去除剩余碎片,收集上清液,采用BCA法測定蛋白質(zhì)水平。在胰蛋白酶消化過程中,首先向離心管中加入適量標(biāo)準(zhǔn)蛋白,再加入裂解液以調(diào)整體積至一致,緩慢向其中加入20%的三氯乙酸,利用渦旋混勻儀振蕩、混勻,4 ℃靜置2 h以充分沉淀。4 500×g離心5 min后,用預(yù)冷的丙酮3次洗滌所得蛋白沉淀,晾干后加入200 mmol/L的四乙基溴化銨并于超聲儀中充分打散,經(jīng)酶底比1∶50(m/m)的胰酶消化過夜。先后加入5 mmol/L二硫蘇糖醇56 ℃還原30 min、11 mmol/L碘乙酰胺室溫暗孵育15 min。

1.2.2.3液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

用NanoElute超高效液相系統(tǒng)分離溶解于液相色譜流動相A相(含2%乙腈和0.1%甲酸)中的樣品蛋白肽段。配制含0.1%甲酸和100%乙腈溶液的流動相B,以0～1 min,2%～5% B;>1～76 min,>5%～27% B;>76～82 min,>27%～35% B;>82～86 min,>35%～85% B梯度,300 nL/min流速洗脫多肽。分離后的多肽被注入Capillary離子源(電壓1.75 kV)中進行電離和隨后的飛行時間(time-of-flight,TOF)質(zhì)譜timsTOF Pro分析。采用高分辨的TOF質(zhì)譜檢測和分析肽段母離子及其二級碎片。參考文獻[16]方法進行二級質(zhì)譜掃描和數(shù)據(jù)收集。

1.2.2.4定量分析

根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的搜庫分析結(jié)果給出的每個肽段在不同樣品中的信號強度信息計算蛋白的相對定量。即首先將信號強度值(I)通過中心化變化后,按公式R_{ij}=I_{ij}/Mean(I_j)得到肽段在不同樣品中的相對定量值(R),i表示樣品,j表示肽段;然后采用中位數(shù)歸一化方法對得到的肽段相對定量值進行校正(NR)以消除不同樣品在質(zhì)譜檢測中上樣量的系統(tǒng)誤差,計算公式:NR_{ij}=R_{ij}/Median(R_i);最后采用蛋白對應(yīng)特異性肽段相對定量值的中值表示蛋白的相對定量值。計算公式:R_{ik}=Median(NR_{ij},j/in k),k表示蛋白,j表示蛋白所屬的特異性肽段。分別采用Person相關(guān)性、主成分分析和相對標(biāo)準(zhǔn)差3種統(tǒng)計分析方法評估蛋白定量重復(fù)性。

1.2.2.5SerpinB1a蛋白基因本體論(GO)功能富集分析

采用UniProt-GOA數(shù)據(jù)庫的GO分類分析方法,從分子功能、細(xì)胞組成和生物進程等角度對SerpinB1a蛋白的生物學(xué)作用進行注釋,并結(jié)合當(dāng)前AFLD發(fā)生機制相關(guān)國內(nèi)外研究文獻推測涉及AFLD發(fā)生、發(fā)展的內(nèi)容。

1.2.3SerpinB1a蛋白表達的驗證

1.2.3.1總體思路

采用基于質(zhì)譜技術(shù)的靶向蛋白質(zhì)組定量分析方法。將上述蛋白組學(xué)獲得的含SerpinB1a蛋白的肽段分別進行EASY-nLC 1000超高效液相系統(tǒng)分離和電離后的Q-ExactiveTMPlus質(zhì)譜分析,經(jīng)Max-Quant軟件(v1.6.15.0)數(shù)據(jù)庫搜索后進行數(shù)據(jù)處理。

1.2.3.2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

SerpinB1a蛋白肽段來自上述蛋白組學(xué)剩余肽段,經(jīng)液相色譜流動相A相(含0.1%甲酸和2%乙腈的水溶液)溶解后,使用EASY-nLC 1000超高效液相系統(tǒng)進行分離。流動相B為含0.1%甲酸和90%乙腈的水溶液。液相梯度設(shè)置:0～16 min,7%～25% B;>16～22 min,>25%～35% B;>22～26 min,>35%～80% B;>26～30 min,>80% B,流速維持在500 nL/min。肽段經(jīng)由超高效液相系統(tǒng)分離后被注入納米噴霧電離(NSI)離子源中進行電離,然后用Q ExactiveTMPlus質(zhì)譜進行分析。離子源電壓設(shè)置為2.1 kV,肽段母離子及其二級碎片都使用高分辨的Orbitrap進行檢測和分析。一級質(zhì)譜掃描范圍設(shè)置為360～1 020 m/z,掃描分辨率設(shè)置為70 000;二級質(zhì)譜Orbitrap掃描分辨率設(shè)置為17 500。數(shù)據(jù)采集模式使用數(shù)據(jù)非依賴型掃描(DIA)程序,高能碰撞離解(HCD)碰撞池的碎裂能量設(shè)置為27。一級質(zhì)譜自動增益控制(AGC)設(shè)置為3E6,最大離子注入時間(maximum IT)設(shè)置為50 ms;二級質(zhì)譜AGC設(shè)置為1E5,maximum IT設(shè)置為250 ms,隔離窗口設(shè)置為1.6 m/z。

1.2.3.3數(shù)據(jù)處理

肽段參數(shù)設(shè)置:蛋白酶為胰蛋白酶[KR/P],K、R、P分別代表賴氨酸、精氨酸、脯氨酸,最大漏切位點數(shù)為0,肽段長度為7～25個氨基酸殘基,設(shè)置半胱氨酸烷基化為固定修飾。Transition參數(shù)設(shè)置:母離子電荷為2,3;子離子電荷為1;離子類型為b,y。碎片離子選擇從第3個開始至最后1個,并設(shè)置離子匹配的質(zhì)量誤差容忍度為0.02 Da。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 SerpinB1a蛋白的4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定與定量結(jié)果

經(jīng)課題組前期造模成功后,在蛋白組學(xué)中各實驗組肝組織中均鑒定到SerpinB1a蛋白,蛋白質(zhì)登記號:Q9D154,肽段:FQSLNAEVSK。以3組中SerpinB1a蛋白質(zhì)重復(fù)測量平均值比值作為差異倍數(shù),當(dāng)P≤0.05且差異倍數(shù)≥2或≤0.5時被認(rèn)為具有明顯差異。與C組(2.18±0.51)比較,M組SerpinB1a蛋白相對表達水平(0.18±0.09)明顯下降(P=0.002),下調(diào)表達0.08倍;與M組比較,R組SerpinB1a蛋白相對表達水平(1.08±0.07)明顯升高(P=0.004),上調(diào)表達6.00倍。

2.2 SerpinB1a蛋白的GO富集分析結(jié)果

經(jīng)GO富集分析,顯示SerpinB1a蛋白共涉及8個分子功能、20個細(xì)胞組成和59個生物進程,進一步推測其中的2個分子功能、3個細(xì)胞組成和12個生物進程涉及AFLD的發(fā)生、發(fā)展,見表1。

表1 SerpinB1a蛋白的GO富集分析

2.3 SerpinB1a蛋白表達的驗證

利用以質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的靶向蛋白質(zhì)組定量技術(shù)對SerpinB1a蛋白表達水平進行驗證。采用峰面積進行定量,呈現(xiàn)的7種顏色條帶分別對應(yīng)肽段在質(zhì)譜儀中裂解后的7種特異性氨基酸序列,見圖1。結(jié)果顯示:與C組比較,M組SerpinB1a蛋白表達水平下調(diào)0.21倍,與上述4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)的定量結(jié)果一致。

C1～C3:C組;M1～M3:M組。

3 討 論

近年來,日益發(fā)展的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在基因組學(xué)等其他“組學(xué)”技術(shù)基礎(chǔ)上進一步表明了生物個體蛋白的身份、識別蛋白質(zhì)的分子構(gòu)成,為探究疾病的發(fā)病機制、尋找分子標(biāo)志物和了解藥物作用靶點等提供了重要線索[17-18]。運用蛋白組學(xué)方法在非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型和相應(yīng)的臨床患者肝臟中均發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)基因3(ATG3)是與脂肪變性發(fā)生有關(guān)的新分子,其表達與NAFLD脂肪變性分級和活動評分呈正相關(guān)[19]。CARLSSON等[20]運用蛋白質(zhì)組學(xué)方法發(fā)現(xiàn),生長分化因子15是糖尿病腎病和心血管事件發(fā)生的潛在生物標(biāo)志物,為糖尿病腎病和心血管疾病的機制研究提供了新的見解。DING等[21]運用等壓標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),發(fā)現(xiàn)超氧化物歧化酶2(SOD2)在唾液中可能作為肝細(xì)胞癌的潛在生物標(biāo)記物,提供了一種無創(chuàng)、廉價的唾液檢測方法來檢測肝細(xì)胞癌。本研究借助蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的優(yōu)勢,采用4D非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)檢測和分析了乙醇喂養(yǎng)AFLD小鼠和經(jīng)白藜蘆醇干預(yù)后的小鼠肝組織SerpinB1a蛋白表達水平變化。結(jié)果顯示,M組小鼠肝組織SerpinB1a蛋白表達水平較C組下調(diào)0.08倍,經(jīng)白藜蘆醇干預(yù)后上調(diào)6.00倍。表明慢性酒精攝入可以引起肝組織SerpinB1a蛋白表達水平下降,提示該蛋白可能同時參與了AFLD的發(fā)生和白藜蘆醇的AFLD保護作用。目前,尚未發(fā)現(xiàn)SerpinB1a蛋白與酒精性肝損傷及白藜蘆醇保護作用相關(guān)文獻報道,值得進一步關(guān)注和探討。

白藜蘆醇是一種存在于多種植物中的天然多酚,作為沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)激動劑[22],具有抗炎、抗缺血、抗氧化、抗癌、心臟保護等調(diào)節(jié)作用[23]。研究發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇可通過促進自噬以減少酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性[6],下調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子和細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)表達,減少活性氧(ROS)等有害物質(zhì)產(chǎn)生[24],加速巨噬細(xì)胞極化以抗凋亡[25],發(fā)揮酒精性肝損傷保護作用。但截至目前,其具體的分子干預(yù)機制尚不清楚。人類SerpinB1(小鼠SerpinB1a的功能同源物)與多種疾病有關(guān),如2型糖尿病患者血清SerpinB1水平明顯升高與胰島B細(xì)胞功能障礙、血糖控制和血脂異常有關(guān)[26],SerpinB1通過調(diào)控生長因子信號通路促進胰島B細(xì)胞增殖以應(yīng)對胰島素抵抗[27]。MOURAD等[28]檢測了葡聚糖硫酸酯鈉誘導(dǎo)的炎癥性結(jié)腸炎模型小鼠的結(jié)腸蛋白表達情況,發(fā)現(xiàn)SerpinBla表達上調(diào)并參與先天免疫反應(yīng)。運用蛋白組學(xué)串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽(TMT)和生物信息學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)早期大鼠急性胰腺炎中SerpinB1a低表達,并通過減弱對彈性蛋白酶的抑制發(fā)揮抗炎作用[29]。在癌癥領(lǐng)域也顯示,過表達SerpinB1會促進口腔癌細(xì)胞在侵襲性口腔鱗狀細(xì)胞癌中的轉(zhuǎn)移[30],相反地,在乳腺癌、肺癌與肝細(xì)胞癌等癌組織中SerpinB1表達增強并抑制基質(zhì)金屬蛋白酶2活性,從而發(fā)揮抑癌作用[31-32]。由此可見,SerpinB1a與多種疾病發(fā)生或保護作用有關(guān),涉及免疫防御、蛋白水解、抑癌或促進癌細(xì)胞擴散等多種反應(yīng),在不同疾病中存在正性或負(fù)性表達的差異性。本研究發(fā)現(xiàn)在慢性酒精攝入后,肝臟SerpinB1a表達水平明顯下調(diào)和經(jīng)白藜蘆醇干預(yù)后SerpinB1a表達水平明顯上調(diào),這提示有必要進一步證實其是否真的參與了AFLD發(fā)生的保護作用及其機制。

與4D非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測結(jié)果模式一致,靶向蛋白質(zhì)組定量技術(shù)驗證了SerpinB1a蛋白表達在AFLD小鼠肝組織明顯下調(diào),提示該蛋白在AFLD發(fā)生中的保護作用,白藜蘆醇干預(yù)后SerpinB1a蛋白表達明顯上調(diào)可初步證明這一點。根據(jù)前言所述,在研究基于AFLD疾病階段的肝臟自噬抑制作用,以及經(jīng)FOXO1和pSTAT3介導(dǎo)的酒精攝入引起的肝損傷與SerpinB1a的調(diào)控關(guān)系基礎(chǔ)上,作者提出了SerpinB1a在酒精誘導(dǎo)的肝損傷保護中可能通過FOXO1-STAT3介導(dǎo)的自噬信號通路發(fā)揮作用。已知FOXO1通過正向調(diào)控應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白3以抑制mTORc1、增強自噬相關(guān)基因(ATGs)的表達,實現(xiàn)自噬誘導(dǎo)的調(diào)控[11]。SINGH等[33]在肝細(xì)胞中對ATG7基因進行特異性敲除,并檢測了肝組織中甘油三酯水平,以研究自噬是否參與了脂質(zhì)分解代謝,結(jié)果顯示:在抑制自噬后肝臟中甘油三酯積累明顯增多。相反,激活自噬有助于肝細(xì)胞中脂質(zhì)的分解,通過脂吞噬或微脂噬兩種自噬形式,從而減少肝細(xì)胞中脂肪變性[34]。除了參與調(diào)控自噬和脂質(zhì)分解代謝的調(diào)節(jié),FOXO1還能降低過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的轉(zhuǎn)錄活性,減少游離脂肪酸的攝取,并抑制脂肪酸合成酶和乙酰輔酶a羧化酶1的表達,從而抑制脂肪的合成并減少肝臟中甘油三酯的積累[35-36]。此外,FOXO1的表達下調(diào)會降低超氧化物歧化酶(SOD)生成,加重氧化應(yīng)激發(fā)生[37]?；赟erpinB1a與FOXO1、PPARγ的關(guān)系[10-11,35-36],以及抗氧化應(yīng)激、自噬誘導(dǎo)在白藜蘆醇抗酒精性肝損傷的研究發(fā)現(xiàn)[6,24],作者認(rèn)為上調(diào)SerpinB1a的表達、經(jīng)FOXO1介導(dǎo)的PPARγ拮抗作用及自噬誘導(dǎo)可能是白藜蘆醇發(fā)揮AFLD保護作用的重要機制。此外,作為肝保護信號的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3),既可以通過上調(diào)Bcl-2互作蛋白3的表達誘導(dǎo)自噬[11],進而促進脂肪分解,減少脂肪變性,還可以通過抑制SREBP-1c的表達來抑制脂肪合成[38]。因此,SerpinB1a的肝臟保護作用也可能是通過激活肝細(xì)胞中的STAT3,進一步激活自噬以加快脂肪分解,并抑制SREBP-1c表達以減少脂肪生成來發(fā)揮的。

綜上所述,本文探討了SerpinB1a表達水平與AFLD發(fā)生的關(guān)系,提出了SerpinB1a可能作為FOXO1、STAT3介導(dǎo)的自噬誘導(dǎo)上游調(diào)控因子,其表達水平的變化參與了AFLD的形成及白藜蘆醇的抗AFLD作用,但還需要進一步驗證?？傊?本文為完善AFLD發(fā)生的分子機制及探討白藜蘆醇的AFLD保護機制提供了科學(xué)的實驗室依據(jù)。