單曉靜

摘 要：建立了固相萃取-高效液相色譜法測定豆豉制品中苯甲酸鈉、山梨酸鉀的方法。樣品經(jīng)提取后，經(jīng)C18 SPE固相萃取小柱凈化，C18色譜柱進行分離，DAD檢測器進行信號檢測。結(jié)果表明該方法檢出限低，目標物濃度在1～50 mg·L-1信號強度和濃度呈良好的線性關(guān)系，并具有良好的精密度與準確度，可作為檢測豆豉制品中苯甲酸鈉、山梨酸鉀的有效定量方法。

關(guān)鍵詞：固相萃取；高效液相色譜；豆豉制品；苯甲酸鈉；山梨酸鉀

Determination of Sodium Benzoate and Potassium Sorbate in Soybean Products by Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

SHAN Xiaojing

（Guangdong Meiweixian Flavoring Foods Co.， Ltd.， Zhongshan 528437， China）

Abstract： A method was developed for the determination of sodium benzoate and potassium sorbate in tempeh products by solid-phase extraction-high performance liquid chromatography. The extracted samples was purified by C18 SPE solid phase extraction column， separated by C18 chromatographic column and detected by DAD detector. The method has low detection limits and a good linear relationship when the target in the range of 1～50 mg·L-1， the method also has good precision and accuracy. It can be used as an effective quantitative method to measure sodium benzoate and potassium sorbate in soybean products.

Keywords： solid phase extraction; high performance liquid chromatography; soybean products; sodium benzoate; potassium sorbate

豆豉制品營養(yǎng)豐富，富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸等營養(yǎng)物質(zhì)，受到眾多消費者的青睞[1]。但豆豉制品容易因微生物污染而腐敗變質(zhì)，不容易保存[2]，不少廠家為了延長豆豉制品的貨架期，會選擇違規(guī)過量添加苯甲酸鈉、山梨酸鉀等防腐劑。

目前檢測調(diào)味品中山梨酸鉀和苯甲酸鈉的方法主要有液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）[3]、氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）[4]、液質(zhì)聯(lián)用法（High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，HPLC-MS）[5]。研究對象主要集中在醬油、醋等調(diào)味品，很少有涉及豆豉制品防腐劑檢測的方法研究。豆豉基體比較復(fù)雜，其中含有大量的色素、蛋白質(zhì)、油脂等成分，直接對目標成分進行測定時存在較大干擾，會對儀器造成較大損耗，易損壞色譜柱。本文采用固相萃取小柱（Solid Phase Extraction，SPE）技術(shù)對豆豉樣品進行預(yù)處理，實驗結(jié)果表明，本方法與傳統(tǒng)方法相比，準確度高，重復(fù)性好，樣品基體無雜質(zhì)干擾，適用于市面上的豆豉樣品苯甲酸鈉和山梨酸鉀含量檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

豆豉制品：市售。

甲醇、乙腈、異丙醇（HPLC級，Merck）；苯甲酸鉀、山梨酸鈉標準品（aladdin）；HC-C18固相萃取小柱（CNW，10 mL，填料2 g）；其余試劑均為分析純；實驗用水為一級水。

Agilent 1200型高效液相色譜儀：美國安捷倫公司（配置自動進樣器、二極管陣列檢測器）；超聲發(fā)生器；CNW 12位固相萃取真空裝置。

1.2 色譜條件

色譜柱：Phenomenon Luna Cl8柱（4.6 mm×

250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：230 nm；流動相：甲醇∶乙酸銨溶液（20 mmol·L-1）=5∶95。

1.3 樣品處理

將豆豉樣品用攪拌器打碎，稱取2 g打碎后豆豉樣品于50 mL塑料具塞離心管中。加10%甲醇水溶液約20 mL，渦旋混勻5 min，將超聲儀溫度調(diào)至50 ℃，并將樣品置于超聲儀中超聲20 min，樣品取出放涼后分別加2 mL乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液，用漩渦振蕩器混勻后6 000 r·min-1離心10 min。轉(zhuǎn)移水相層至

50 mL玻璃容量瓶中，于殘渣中加10%甲醇水溶液

20 mL，重復(fù)上述超聲和離心操作，將水相層轉(zhuǎn)移到同一50 mL玻璃容量瓶中。用0.01 mol·L-1鹽酸溶液將樣品溶液pH調(diào)節(jié)至4.0并定容至容量瓶刻度，混勻。將5 mL樣品溶液上樣到已活化的SPE固相萃取小柱，分別用5 mL水和5 mL 10%甲醇水溶液淋洗，然后用5 mL甲醇溶液洗脫目標物并將洗脫液接收到10.0 mL容量瓶，定容至刻度，混勻，待色譜分析。

1.4 標準溶液配制

精確稱取一定量的山梨酸鉀、苯甲酸鈉對照品，用甲醇稀釋配制混合標準系列工作液，濃度為

1 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1和50 mg·L-1。

1.5 結(jié)果定性定量

以目標物標準品的保留時間進行定性，外標法進行定量。以峰面積為縱坐標，溶液濃度為橫坐標在儀器工作站上作校正曲線，相關(guān)系數(shù)要求R2≥0.995，通過儀器工作站自動從校正曲線上讀取目標物濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 萃取劑的選擇

重點對比了用純水、10%甲醇水溶液、20%甲醇水溶液作為苯甲酸鈉和山梨酸鉀提取劑，發(fā)現(xiàn)用純水作為萃取劑，因豆豉中油脂含量較高，容易造成乳化，而且提取率不好，回收率低，而加入10%甲醇的水溶液能克服上述兩點不足，萃取率達到100%。20%甲醇水溶液因為有機相比例較高，在樣品溶液上樣固相萃取小柱時會造成目標物的部分洗脫，造成回收率偏低，故本文使用10%甲醇水溶液作為萃取溶劑。

2.2 固相萃取小柱方法條件優(yōu)化

由于苯甲酸、山梨酸極性較弱，C18固相萃取柱對上述兩種物質(zhì)的保留能力較強，樣品上柱后用少量水和10%甲醇水溶液淋洗柱子，去除部分雜質(zhì)，再用高比例有機相洗脫目標物，可獲得較好的回收率，純化效果較好。本文采用甲醇、乙腈和異丙醇

3種溶劑對目標物進行洗脫，考察其對目標物的洗脫效果。實驗結(jié)果表明，甲醇和乙腈的洗脫能力接近，目標物回收率較高，而異丙醇洗脫能力較差，回收率偏低。因此，本文選擇甲醇作為洗脫液，目標化合物被萃取柱吸附后，分別用5 mL水和5 mL 10%甲醇淋洗凈化，用甲醇洗脫目標化合物，上液相色譜分析后，得到的色譜圖如圖1所示。

2.3 樣液pH對回收率的影響

實驗中發(fā)現(xiàn)樣液的pH會影響目標物在固相萃取小柱上的吸附，從而對方法回收率造成影響。將樣液pH調(diào)節(jié)成2.0、4.0、6.0、8.0共4個梯度，將4個梯度樣液分別進行上柱，按上述樣品處理方法進行預(yù)處理，上機測定，計算相關(guān)組分的回收率，結(jié)果見表1。

由表1可知，當樣液pH≤4.0時，方法回收率在99.8%～101.3%，說明低pH能有效抑制苯甲酸鈉和山梨酸鉀的解離，使其在固相萃取柱上吸附牢固。當樣液pH＞4.0，目標物在水溶液中逐漸解離，不能很好地吸附在固相萃取柱上，造成回收率降低。

2.4 標準曲線線性范圍、回歸方程、方法檢測限及定量限

配制1～50 mg·L-1系列濃度梯度的標準工作液上機測定，回歸方程及相關(guān)系數(shù)R2見表2。進空白樣，以3倍信噪比對應(yīng)目標物含量為檢出限，10倍信噪比對應(yīng)目標物含量為定量下限，確定苯甲酸鈉、山梨酸鉀在豆豉制品中的方法檢出限及定量限如表2所示。

2.5 回收率與精密度

取空白樣品，每份2 g，共3組，分別定量加入苯甲酸鈉、山梨酸鉀標準物質(zhì)溶液，加標濃度為

400 mg·kg-1。按上述樣品處理方法進行預(yù)處理，上機測定，分別計算其回收率和精密度，回收率及精密度數(shù)據(jù)見表3。由表3可知，苯甲酸鈉、山梨酸鉀加標濃度為400 mg·kg-1時，苯甲酸鈉、山梨酸鉀加標回收率在98.7%～101.3%，相對標準偏差在0.81%～0.96%，方法回收率、精密度均符合方法學驗證中回收率在90%～107%、CV≤4.31%的要求，說明方法準確性高，重復(fù)性好。

表3 山梨酸鉀、苯甲酸鈉加標回收率及精密度

化合物 加標回收率/% RSD/%

苯甲酸鈉 101.3 0.81

山梨酸鉀 98.7 0.96

3 結(jié)論

采用固相萃取-高效液相色譜法對豆豉制品中苯甲酸鈉和山梨酸鉀含量進行了分析，在1～50 mg·L-1線性關(guān)系良好，加標回收率在98.7%～101.3%，相對標準偏差在0.81%～0.96%，滿足方法學驗證的要求。本方法準確度高，重復(fù)性好，樣品基體無雜質(zhì)干擾，適用于市面上豆豉樣品中苯甲酸鈉和山梨酸鉀含量的檢測。

參考文獻

[1]何麗華.豆制品防腐保鮮技術(shù)的研究進展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學，2007（2）：294-296.

[2]周潔萍，沈陽，楊玲巧，等.豆制品中防腐劑苯甲酸鈉、山梨酸鉀的調(diào)查和分析[J].食品科技，2010，35（1）：

300-302.

[3]劉義，朱顯琴，邱宏，等.高效液相色譜法同時測定食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、富馬酸二甲酯和脫氫乙酸鈉[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19（3）：582-583.

[4]張紅，陳子雷，王文正，等.氣相色譜法測定香辣醬中的防腐劑的含量[J].中國調(diào)味品，2007（3）：61-64.

[5]李小晶，陳曼實，戴金蘭，等.固相萃取高效液相色譜-質(zhì)譜法同時檢測啤酒中5種痕量防腐劑[J].分析測試學報，2013，32（8）：973-977.