陳森杰 胡凱歌 童佳雯 葉思昱 蔡榮榮 索茂榮

【摘要】目的：優(yōu)選天麻鉤藤飲緩釋顆粒的最佳制備工藝。方法：采用傳統(tǒng)水煎煮法提取有效成分，以天麻素為考察指標(biāo)，液料比、天麻鉤藤質(zhì)量比、提取溫度為考察因素，正交試驗(yàn)法優(yōu)選天麻鉤藤飲的提取工藝。以體外釋放度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選緩釋輔料的種類和用量，確定顆粒劑的制備工藝。結(jié)果：天麻鉤藤飲的最佳提取工藝參數(shù)為料液比為1∶10（g/mL）、提取溫度95 ℃、天麻鉤藤質(zhì)量比為3∶4，干浸膏與乙基纖維素質(zhì)量比為1∶2。天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑在12 h的累積釋放量為93.60%，天麻素的含量為7.33 mg/g。結(jié)論：該制備工藝能夠?yàn)樘炻殂^藤飲緩釋顆粒劑的研制提供有效參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】天麻鉤藤飲；緩釋顆粒劑；制備工藝；天麻素；正交實(shí)驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R283.6【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2023）10-0039-06

The Study on Preparation Technology of Tianma Gouteng Yin Sustained-release GranulesCHEN SenjieHU KaigeTONG JiawenYE SiyuCAI RongrongSUO Maorong*

Jiyang College of Zhejiang A&F University， Shaoxing 311800，ChinaAbstract：Objective? To optimize the preparation process of Tianma Gouteng Yin sustained-release granules.Methods Optimization of extraction parameters was carried out by an orthogonal array design， the gastrodin as the investigation index， the ratio of liquid to material， the ratio of Tianma to Gouteng， and the extraction temperature was chosen as variables. The preparation process of? sustained-release granules was studied by the releasing effect of granules in vitro， and the type and dosage of sustained-release excipients were investigated. Results The optimum preparation parameters of Tianma gouteng yin sustained-release granules were as follows： solid-to-solvent ratio of 1∶10（g/mL）， extracting temperature? 95 ℃， and the Tianma-to-Gouteng ratio of 3∶4 （g/g）， dried extract to ethyl cellulose ratio of 1∶2（g/g）. The cumulative release in 12 hours was 93.60%， and the content of gastrodin was 7.33mg/g of Tianma goutengyin sustained-release granules.Conclusion The preparation process can provide effective reference for the production of Tianma gouteng yin sustained-release granules.

Keywords：Tianma Gouteng Yin; Sustained-Release Granules; Preparation Technology; Gastrodin; Orthogonal Test

天麻鉤藤飲源自《中醫(yī)內(nèi)科雜病證治新義》，組方中天麻、鉤藤、石決明具有平肝息風(fēng)、平肝潛陽(yáng)之功，石決明有咸寒體重之性，可除熱明目；牛膝、益母草具有活血涼血、引血下行的功效，亦有利于平降肝陽(yáng)；黃芩清熱瀉火，杜仲、桑寄生補(bǔ)益肝腎治本，夜交藤、茯苓寧心安神。諸藥合用，共成平肝息風(fēng)、清熱活血、補(bǔ)益肝腎之劑［1］。臨床用于高血壓、腦血管意外、內(nèi)耳性眩暈等屬于肝陽(yáng)上亢的病癥［2］。天麻鉤藤飲作為臨床常用的治療肝陽(yáng)上亢型高血壓，需要長(zhǎng)期服藥，但煎煮不便，服藥次數(shù)多，患者順應(yīng)性低，因此有必要進(jìn)行劑型優(yōu)化。

緩釋劑型具有減少血藥濃度波動(dòng)，提高藥物生物利用度，減少給藥次數(shù)，增加患者順應(yīng)性的優(yōu)勢(shì)，目前緩釋技術(shù)逐漸應(yīng)用于中藥復(fù)方劑型的優(yōu)化。本文研究天麻鉤藤飲緩釋顆粒的制備工藝。首先采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選天麻鉤藤飲的最佳提取工藝，在此基礎(chǔ)上，選擇常用的緩釋輔料羧甲基纖維素鈉和乙基纖維素制備天麻鉤藤飲緩釋顆粒，比較二者的緩釋效果，確定天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑的緩釋輔料和制備工藝。 本研究可為經(jīng)典方劑天麻鉤藤飲優(yōu)化為緩釋劑型提供科學(xué)參考。

1材料

RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；B-220型恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠）； RCZ-6B3型藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；WFZ UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）。

天麻、鉤藤、石決明、山梔子、黃芩、牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、夜交藤。朱茯神（浙江諸暨市天壽中藥材有限公司）；天麻素對(duì)照品（安徽酷爾生物工程有限公司，純度>98%，批號(hào)：20210708）；乙基纖維素（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；羧甲基纖維素鈉（上海源葉生物科技有限公司）、無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、磷鉬酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）均為分析純。

2方法

2.1天麻鉤藤飲制備 將天麻鉤藤飲各藥味粉碎成粗粉。精密稱取天麻9 g，鉤藤12 g，石決明18 g，山梔、黃芩、牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、夜交藤、朱茯神各9 g，加一定比例水混合，室溫浸泡30 min，加熱提取兩次，第一次1 h，過(guò)濾，藥渣第二次加熱提取半小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液，可得天麻鉤藤飲提取液。

2.2天麻素含量測(cè)定方法的建立

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥天麻素標(biāo)準(zhǔn)品50.0 mg，適量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶并定容，得天麻素對(duì)照品（標(biāo)準(zhǔn)品）溶液的貯備液。

2.2.2供試品溶液的制備 ［3］取2.1中制備的天麻鉤藤飲50 mL，抽濾，低溫旋蒸干，加入乙醇20 mL，超聲5 min，重復(fù)一次，合并提取液，旋蒸蒸干，加適量乙醇溶解得薄層分離制備的樣品溶液，將樣品溶液和天麻素標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)于硅膠G薄層板，展開(kāi)劑為乙酸乙酯∶甲醇∶水=9∶1∶0.2，展開(kāi)后，在標(biāo)準(zhǔn)品區(qū)域噴顯色劑10％磷鉬酸乙醇溶液，于105 ℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰［4］，刮取與標(biāo)準(zhǔn)品展距相同的樣品區(qū)域的硅膠，加乙醇20 mL，超聲提取5 min，重復(fù)一次，抽濾，濾液用乙醇定容至50 mL，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照品溶液制備 去除天麻，按原方加入各項(xiàng)中藥，按本文2.2.2中制備，可得不含天麻成分的溶液，即為陰性對(duì)照品溶液。

2.2.4天麻素標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 ［5］將2.2.1中的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液稀釋至濃度分別為5 μg /mL、10 μg/mL、15 μg/mL、20 μg/mL、25 μg/mL，在221 nm處測(cè)定吸光度。以天麻素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。

2.2.5精密度試驗(yàn) ［6］精密吸取天麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液（50.00 μg/mL）3 mL，加入 10 mL容量瓶，共6組，乙醇定容，在221 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取天麻素含量為（50.00 μg/mL）天麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液3 mL，加入10 mL 容量瓶中，乙醇定容。在25 ℃條件下保存， 每小時(shí)測(cè)定1次，共測(cè)定6次，計(jì)算RSD。

2.2.7加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取天麻素含量確定的天麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液3 mL，加入50 mL 容量瓶，共6組，乙醇定容，得加樣溶液。轉(zhuǎn)移3 mL該溶液至10 mL容量瓶并用乙醇定容，去除其背景吸收，于221 nm處測(cè)得吸光度，計(jì)算RSD。

2.3天麻鉤藤飲提取工藝單因素實(shí)驗(yàn)［7］

2.3.1煎煮溫度對(duì)天麻素溶出率的影響 設(shè)定煎煮溫度分別為55 ℃、65 ℃、75 ℃、85 ℃、95 ℃，維持煎煮時(shí)間90 min，料液比1∶8，天麻鉤藤比3∶4不變，研究不同提取溫度條件下藥液中天麻素含量的變化。

2.3.2料液比對(duì)天麻素提取率的影響 設(shè)定料液比為1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12 ，保持煎煮時(shí)間90 min，煎煮水溫 75? ℃，天麻鉤藤比3∶4不變，研究不同料液比條件下藥液中天麻素含量的變化。

2.3.3天麻鉤藤比對(duì)天麻素提取率的影響 設(shè)定天麻鉤藤比為3∶5、3∶4、1∶1、4∶3、5∶3的五組提取實(shí)驗(yàn)，保持煎煮時(shí)間90 min，提取溫度 75? ℃，料液比 1∶8不變，研究不同天麻鉤藤比條件下藥液中天麻素含量的變化。

2.4正交試驗(yàn)優(yōu)選天麻素提取最佳條件及其驗(yàn)證? ［8］在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，以煎煮水溫，料液比，天麻鉤藤比為試驗(yàn)因素，天麻素提取率為篩選指標(biāo)，采用三因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平設(shè)計(jì)如表1所示。 進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

2.5緩釋顆粒劑成型工藝研究

2.5.1天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑制備 精密稱量干浸膏3 g，加適量水制成稠浸膏，將稠浸膏與一定比例的緩釋輔料混合，過(guò) 20目篩制備緩釋顆粒， 過(guò) 100目篩整粒。將所得顆粒放入65 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行干燥，得天麻鉤藤飲緩釋顆粒［9］ 。

2.5.2輔料和輔料添加量的選擇 以不同時(shí)間點(diǎn)天麻素的累積釋放百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察不同輔料和不同添加量對(duì)顆粒劑緩釋性能的影響。測(cè)定顆粒劑中天麻素在2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h的釋放度，篩選天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑的最佳輔料和最佳輔料添加量。

2.5.3釋放度的測(cè)定 依據(jù)中華人民共和國(guó)2020版藥典，采用轉(zhuǎn)籃法測(cè)定顆粒劑的體外釋放度。將待測(cè)顆粒劑放入轉(zhuǎn)速為100 r·min-1的轉(zhuǎn)籃中，溶出介質(zhì)由稀鹽酸和超純水組成，調(diào)節(jié)pH至1.5，（37±0.5）℃的溶液，每隔一定時(shí)間取樣 50 mL（補(bǔ)充50 mL超純水 ），按照2.2.2的操作測(cè)出并計(jì)算各采樣點(diǎn)樣品液中天麻素的含量與各組緩釋顆粒的累積釋放百分率［10］。

2.5.4天麻鉤藤飲緩釋顆粒工藝驗(yàn)證 按2.5.1制備天麻鉤藤飲緩釋顆粒，共3批，按照2.5.3法測(cè)定天麻素的含量和不同時(shí)間的釋放度，驗(yàn)證其緩釋效率。

3結(jié)果

3.1天麻素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 天麻素標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。通過(guò)數(shù)據(jù)分析得到天麻素的線性回歸方程為：y=0.0277x-0.0199， R2 = 0.9994，說(shuō)明天麻素在5～ 25 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果 該方法的精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD值分別為0.32%和0.41%。? 加樣回收率平均值為104.05%，RSD值為1.41%。

3.3單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3.1煎煮水溫 如圖2所示， 煎煮溫度在75 ℃以下時(shí)，天麻素提取率較低；當(dāng)溫度高于75 ℃時(shí)，煎煮水溫對(duì)天麻鉤藤飲中天麻素含量的影響不明顯，說(shuō)明溫度較低時(shí)，天麻中的有效成分難以溶出，溫度較高時(shí)，由于分子運(yùn)動(dòng)加劇，加速溶劑對(duì)藥材的滲透及對(duì)天麻素的解析和溶解，當(dāng)提取溫度達(dá)到75 ℃以上時(shí)，由于其他成分溶出增加，影響到天麻素的溶解，天麻素溶出量增加變緩，因此選擇溫度75 ℃、85 ℃、95 ℃進(jìn)行三水平正交試驗(yàn)。

3.3.2料液比 如圖3可知，天麻素提取率在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)隨著料液比增加呈現(xiàn)先增加后降低現(xiàn)象，當(dāng)料液比為1∶8以上時(shí)遞增減緩，1∶10時(shí)達(dá)到最大，說(shuō)明隨著溶劑增加，由于藥材內(nèi)外提取物濃度梯度差增大，天麻素的解析和溶解釋放增加，當(dāng)料液比達(dá)到1∶10時(shí)，濃度梯度差對(duì)天麻素的提取率達(dá)到最大。因此本試驗(yàn)選擇料液比1∶8、1∶9、1∶10進(jìn)行三水平正交試驗(yàn)。

3.3.3天麻鉤藤配比 由圖4可知，天麻鉤藤的配比對(duì)天麻素提取率有影響，天麻素的含量隨著天麻含量的增加，呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)，在天麻鉤藤比為3∶4時(shí)天麻素的含量最高，然后逐漸下降，說(shuō)明天麻素的溶出受鉤藤化學(xué)成分的影響，鉤藤中的某些成分會(huì)抑制天麻素的溶出和釋放。據(jù)此，采用天麻鉤藤比3∶4、1∶1、4∶3進(jìn)行三水平正交試驗(yàn)。

3.4正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 由表2、3可知：影響天麻素提取率的三個(gè)因素的主次順序?yàn)榱弦罕?天麻鉤藤比>溫度，料液比與天麻鉤藤比是天麻鉤藤飲中天麻素含量的主要決定因素，其中料液比對(duì)天麻素的提取率具有極顯著影響，天麻鉤藤比對(duì)天麻素的提取率具有顯著影響，提取溫度對(duì)天麻素的提取無(wú)顯著差異。 因此，天麻鉤藤飲的最佳提取條件是A3B3C1，也就是最優(yōu)條件為料液比1∶10，天麻鉤藤比 3∶4，煎煮水溫 95 ℃。在本試驗(yàn)中，煎煮水溫對(duì)天麻鉤藤飲中天麻素含量決定作用較弱，因此在實(shí)際生產(chǎn)工藝中，在綜合考察藥效的前提下，可以選擇提取溫度為75 ℃或85 ℃，以降低生產(chǎn)成本或避免某些對(duì)高溫敏感成分的破壞。

3.5緩釋顆粒劑最佳工藝篩選結(jié)果 結(jié)果如表4，表明在藥物和輔料比為1∶1的條件下，乙基纖維素的緩釋效果強(qiáng)于羧甲基纖維素。乙基纖維素作為輔料，在浸膏與輔料比為1∶2時(shí)，具有較好的緩釋作用，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)按照浸膏與乙基纖維素比為1∶2制備天麻鉤藤飲緩釋顆粒。

3.6天麻鉤藤飲緩釋顆粒工藝驗(yàn)證結(jié)果 ［11］如表5、表6可知，采用優(yōu)化工藝制備的3批次天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑均可緩慢釋藥達(dá)12 h以上，在12 h的平均累積釋藥率為93.21%以上，符合《中國(guó)藥典》的釋藥標(biāo)準(zhǔn)。3批次天麻鉤藤飲緩釋顆粒天麻素的平均含量為7.33 mg/g。

3.7天麻鉤藤飲緩釋顆粒與天麻鉤藤顆粒（藥典）工藝比較 關(guān)于天麻鉤藤飲顆粒的緩控釋工藝研究報(bào)道很少［10］，為探討天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑工藝的可行性，將其與藥典收載的天麻鉤藤顆粒的工藝條件比較，結(jié)果如表7所示，二者的天麻處理方法、提取溫度、添加輔料和制粒方法不同，天麻鉤藤飲緩釋顆粒的天麻素含量符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)，且遠(yuǎn)高于藥典要求的標(biāo)準(zhǔn)，表明傳統(tǒng)合煎法更有利于有效成分天麻素的溶出［11］。

4討論

中藥制劑含量測(cè)定指標(biāo)通常為相應(yīng)的特定成分和活性成分，一般多選取主藥和君藥中的有效成分和特定成分。天麻是天麻鉤藤飲的主藥，其中天麻素通常被認(rèn)為是天麻的主要活性成分［12］，常用來(lái)作為藥材或制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)，因此，本試驗(yàn)選擇天麻素作為含量測(cè)定指標(biāo)。

為保證天麻鉤藤飲的治療效果，本試驗(yàn)采用天麻鉤藤飲的傳統(tǒng)水煎法進(jìn)行工藝條件研究。單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察溫度、料液比、天麻鉤藤比三個(gè)因素對(duì)天麻鉤藤飲中天麻素提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)天麻素提取率的影響大小次序?yàn)榱弦罕?天麻鉤藤比>溫度，其中料液比與天麻鉤藤比對(duì)天麻鉤藤飲中天麻素含量有顯著性因素。料液比主要影響藥材內(nèi)外滲透壓，隨著溶劑的增加，藥材內(nèi)外的滲透壓相對(duì)增加，提高有效成分溶出的速率和程度；而天麻鉤藤配比對(duì)天麻素的提取率具有復(fù)雜的影響，隨著天麻鉤藤比的增加，天麻素提取率呈現(xiàn)先增加后減少的現(xiàn)象，這可能是由于鉤藤中的生物堿或其他成分對(duì)天麻素的溶出具有抑制或競(jìng)爭(zhēng)作用。實(shí)驗(yàn)所得天麻鉤藤的最佳比例為3∶4，與傳統(tǒng)配方要求的比例一致。

傳統(tǒng)煎煮工藝對(duì)高血壓有很好的效果，但患者服用湯劑量較大，服用次數(shù)多，煎煮不便。為了增加患者的順應(yīng)性，減少血藥濃度的峰谷現(xiàn)象，增強(qiáng)藥物療效，本試驗(yàn)在提取工藝篩選的基礎(chǔ)上，將天麻鉤藤飲優(yōu)化為緩釋顆粒劑。乙基纖維素是常用的緩釋輔料，還可以用作穩(wěn)定劑、防止藥品變潮變質(zhì)，羧甲基纖維素除了具有良好的緩釋、成膜和粘性外，還具有代謝惰性特點(diǎn)，但羧甲基纖維素和乙基纖維素的水溶性和黏度不同，添加量不同藥物的緩釋效果不同，故本文選擇這兩種輔料進(jìn)行比較研究。釋放度試驗(yàn)結(jié)果表明在同等條件下，乙基纖維素的緩釋作用強(qiáng)于羧甲基纖維素，在本試驗(yàn)研究范圍內(nèi)， 最佳的配比是干浸膏與乙基纖維素質(zhì)量比為1∶2。與天麻鉤藤顆粒比較，本試驗(yàn)研究的天麻鉤藤飲緩釋顆粒工藝條件如提取溫度和制粒方法相對(duì)溫和，實(shí)用性強(qiáng)。本試驗(yàn)為天麻鉤藤飲緩釋顆粒劑的制備提供科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)，對(duì)促進(jìn)中藥復(fù)方緩控釋劑型優(yōu)化具有一定實(shí)際參考意義。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2022-09-13編輯：陶希睿）