劉杰帆 林銘佳 張建桃 周騰媛

摘要：柑橘黃龍?。℉uanglongbing，簡(jiǎn)稱HLB）是柑橘生產(chǎn)中最具毀滅性的病害，給柑橘產(chǎn)業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為系統(tǒng)了解近年柑橘黃龍病的研究狀況，采用CiteSpace，從Web of Science（WOS）和中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索出2108 篇英文文獻(xiàn)和2359 篇中文文獻(xiàn)，再以發(fā)文量、研究主體（作者、機(jī)構(gòu)及國(guó)家）、研究熱點(diǎn)及前沿4 個(gè)角度進(jìn)行知識(shí)圖譜分析。由分析可得：（1）國(guó)內(nèi)外正加強(qiáng)對(duì)于黃龍病的研究，預(yù)計(jì)未來(lái)仍會(huì)保持熱度；（2）我國(guó)雖已成為黃龍病研究的重要力量，但其科研綜合實(shí)力與美國(guó)相比仍存在巨大差距；（3）中文文獻(xiàn)的研究熱點(diǎn)主要包括黃龍病綜合防治和黃龍病原體，近年關(guān)注優(yōu)勢(shì)品種的栽培技術(shù)及持續(xù)重視綜合防控；（4）英文文獻(xiàn)聚焦于提高柑橘生產(chǎn)力、防治藥物、柑橘木虱和黃龍病原體等方面，近年則關(guān)注柑橘木虱的生理生化特性和防治手段，并開(kāi)始重視非洲柑橘木虱對(duì)歐洲黃龍病的潛在威脅，然后對(duì)黃龍病的分類檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行不斷地創(chuàng)新。最后提出縮小我國(guó)與美國(guó)的黃龍病科研差距的建議。

關(guān)鍵詞：柑橘黃龍?。恢R(shí)圖譜；CiteSpace；研究熱點(diǎn)

中圖分類號(hào)：S666 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2023）04-0771-17

柑橘是世界第一大類水果，也是我國(guó)南方栽培面積最廣的果樹(shù)，在我國(guó)的農(nóng)業(yè)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占據(jù)十分重要的地位[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，從2007 年起，我國(guó)的柑橘種植面積和產(chǎn)量均已超過(guò)巴西，躍居全球第一位，成為世界第一大柑橘生產(chǎn)國(guó)[1-2]。然而，柑橘生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)遭受許多病害，這些病害直接威脅著柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

柑橘黃龍?。℉uanglongbing，簡(jiǎn)稱HLB）是柑橘生產(chǎn)中最具毀滅性的病害，由一種局限于韌皮部篩管細(xì)胞的革蘭氏陰性細(xì)菌引起，該菌歸屬于原核生物、薄壁菌門、α-變型菌綱（Proteobacteriacea）的候選韌皮部桿菌屬（Candidatus Liberibacter spp.）[3]，可導(dǎo)致葉片斑駁、發(fā)黃、缺鋅葉脈枯萎、枝條枯死、生長(zhǎng)遲緩、抑制新根生長(zhǎng)、變小、變綠等癥狀[4]。其致病機(jī)制為：先引起柑橘韌皮部組織壞死和篩管堵塞，進(jìn)而導(dǎo)致光合產(chǎn)物從源器官（主要為成熟葉）到庫(kù)器官（如嫩葉、幼果和根等）的運(yùn)輸受阻，最后造成植株代謝紊亂、衰退直至死亡[5]。目前共發(fā)現(xiàn)3 個(gè)黃龍病菌種：亞洲種（Candidatus Liberibacter asiaticus，簡(jiǎn)稱CLas）、非洲種（Candidatus Liberibacter africanus，簡(jiǎn)稱CLaf）和美洲種（Candidatus Liberibacter americaus，簡(jiǎn)稱CLam），其中亞洲種是目前分布最廣的，我國(guó)黃龍病菌皆為亞洲種[3，6]。3 種病菌都可在22～24 ℃致病，其中非洲種為熱敏型，在30 ℃以上癥狀減輕或消失[7]。美洲種與亞洲種為耐熱型，前者在24 ℃滴度很高，在32 ℃以上幾乎無(wú)法存活，而后者存活溫度超過(guò)30 ℃，并且在32 ℃和35 ℃有著高滴度，但在38 ℃時(shí)滴度不高[8]。黃龍病菌主要通過(guò)木虱和帶病接穗嫁接傳播，具有蔓延速度極快、傳播范圍廣、危害極大、尚無(wú)根治措施等特點(diǎn)，給柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展帶來(lái)極其嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2，9-10]。

目前黃龍病的研究方向大而廣，可涉及病原體、寄主抗性評(píng)價(jià)、防治藥劑、基因編輯、檢測(cè)方法、防控策略等多個(gè)方面。面對(duì)其海量的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，若想系統(tǒng)、精準(zhǔn)地了解該病害的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)，最好的方法是利用CiteSpace 對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。CiteSpace 是陳超美開(kāi)發(fā)的一款引文可視化分析軟件，用于分析科學(xué)文獻(xiàn)中蘊(yùn)含的潛在知識(shí)[11]。該軟件的工作原理基于共引分析理論和尋徑網(wǎng)絡(luò)算法，可對(duì)特定領(lǐng)域的文獻(xiàn)進(jìn)行信息分析和數(shù)據(jù)挖掘，從而得到各種科學(xué)的知識(shí)圖譜，進(jìn)而直觀地展示某領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)及前沿[12]。基于此，筆者在本文中采用信息可視化分析工具CiteSpace（版本號(hào)5.8.R3），以CNKI（1956-2021）和Web of Science（WOS）核心合集（2002-2021）為數(shù)據(jù)源，對(duì)中英文黃龍病研究文獻(xiàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)提取、計(jì)量分析，歸納兩者的熱點(diǎn)與前沿，以期了解最新的國(guó)際研究動(dòng)態(tài)，為我國(guó)黃龍病的研究提供參考。

1 數(shù)據(jù)來(lái)源和研究方法

1.1 中文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)

在中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)中，鑒于以往不同國(guó)家和地區(qū)對(duì)黃龍病的命名不一致的情況[13]，筆者在本文中采用高級(jí)檢索的方式，以“黃龍病+黃梢病+青果病+梢枯病”為主題詞進(jìn)行檢索，設(shè)置截止時(shí)間為2021年12 月31 日，取消勾選“中英文擴(kuò)展”，得到2021 年12 月31 日以前（包含）發(fā)表的有關(guān)結(jié)果共2910 條，然后選擇“學(xué)術(shù)期刊”，保留期刊文獻(xiàn)2359 篇，最后將文獻(xiàn)的標(biāo)題、作者、機(jī)構(gòu)、摘要、關(guān)鍵詞等題錄信息批量導(dǎo)出為Refworks 格式的純文本文件，即中文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)。

1.2 英文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)

在Web of Science 核心數(shù)據(jù)庫(kù)中，筆者在本文中以“TS=（Huanglongbing） OR TS=（Yellow shoot disease）OR TS=（Citrus greening） OR TS=（Likubing）OR TS=（Vein phloem degeneration） OR TS=（Leafmottle） OR TS=（Dieback）”為檢索式進(jìn)行檢索，截止時(shí)間設(shè)置為2021 年12 月31 日，得到2021 年12 月31日以前（包含）發(fā)表的有關(guān)結(jié)果2378 條。在文獻(xiàn)類型中勾選“論文”及“綜述論文”進(jìn)行精煉，保留論文及綜述論文共2108 篇，選擇文獻(xiàn)的“全記錄與引用的參考文獻(xiàn)”，批量導(dǎo)出為純文本格式文件，即可得到英文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)。

1.3 研究方法

筆者在本文中使用Excel及可視化軟件CiteSpace軟件對(duì)從CNKI與WOS檢索獲得的黃龍病研究相關(guān)文獻(xiàn)，從發(fā)文趨勢(shì)、研究主體（包括作者、機(jī)構(gòu)、國(guó)家）、研究熱點(diǎn)、研究前沿等4個(gè)角度，進(jìn)行發(fā)文量統(tǒng)計(jì)、研究主體共現(xiàn)、關(guān)鍵詞共現(xiàn)及聚類、突現(xiàn)詞探測(cè)，并進(jìn)行對(duì)比分析。

2 研究結(jié)果及分析

2.1 發(fā)文量統(tǒng)計(jì)

筆者在本文中對(duì)CNKI 和WOS數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的黃龍病相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索并篩選，分別以中文發(fā)文量和英文發(fā)文量進(jìn)行分析，具體如下。

2.1.1 中文文獻(xiàn)發(fā)文量 在1956—2021 年這66 年間，從CNKI 數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出來(lái)的黃龍病相關(guān)文獻(xiàn)共2359 篇，年均發(fā)文量約35.74 篇，年度發(fā)文趨勢(shì)如圖1 所示。

根據(jù)圖1 可劃分為3 個(gè)階段。1956—1978 年間為起步階段，該階段的年度發(fā)文量均在10 篇以下，23 年間總發(fā)文量為62 篇，年均發(fā)文量不足2 篇，甚至連續(xù)5 a（年）（1967—1971）的發(fā)文量為0。1979—2001 年間為發(fā)展階段，整體呈現(xiàn)穩(wěn)步增長(zhǎng)趨勢(shì)，少數(shù)年份出現(xiàn)回落，年度發(fā)文量保持在10 篇以上，最高達(dá)到30 篇（1996 年），總發(fā)文量為379 篇。2002—2021 年為快速階段，年均發(fā)文量為95 篇，2016 年度達(dá)到了185 篇的峰值?？焖匐A段的發(fā)文量總共為1903 篇，占據(jù)CNKI 總文獻(xiàn)數(shù)的80.67%，說(shuō)明近年來(lái)，我國(guó)比以往更加重視黃龍病的防治工作，預(yù)計(jì)未來(lái)黃龍病的研究熱度仍會(huì)繼續(xù)保持。

2.1.2 英文文獻(xiàn)發(fā)文量 在2002—2021 年這20 年間，WOS核心數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的黃龍病相關(guān)文獻(xiàn)共2108篇，年均發(fā)文量約106 篇，年度發(fā)文趨勢(shì)如圖2 所示。黃龍病英文文獻(xiàn)的發(fā)文量整體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，少數(shù)年份出現(xiàn)回落。2021年年度發(fā)文量達(dá)到了歷史峰值，為266 篇，說(shuō)明國(guó)際力量正不斷加強(qiáng)對(duì)黃龍病的研究。

2.2 研究主體分析

2.2.1 作者分析 對(duì)從CNKI獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行作者（Author）分析，繪制得到可視化圖譜，如圖3（左）所示。圖中共出現(xiàn)了1108 個(gè)節(jié)點(diǎn)，1940 條連線，其中節(jié)點(diǎn)數(shù)為對(duì)象數(shù)，節(jié)點(diǎn)越大，表明該對(duì)象的文章數(shù)量越多；節(jié)點(diǎn)之間的連線越粗，表明兩個(gè)對(duì)象之間的合作關(guān)系越密切。根據(jù)普賴斯定律，核心作者的認(rèn)證公式為M≈0.749× Nmax ，其中Nmax為發(fā)文最多的作者發(fā)文量，M為核心作者的最低文獻(xiàn)數(shù)[14]。經(jīng)計(jì)算，M≈0.749× 47 ≈5.13，因此該領(lǐng)域發(fā)文數(shù)不少于6篇的作者為核心作者。結(jié)合圖和有關(guān)數(shù)據(jù)可以看出，當(dāng)前國(guó)內(nèi)黃龍病領(lǐng)域的研究人員呈現(xiàn)出“流線型”，形成了以柯沖（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，47 篇，排名第一）、邱柱石（廣西柑橘研究所，43 篇，排名第二）、鄧曉玲（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，37 篇，排名第三）等作者為核心的作者群和合作網(wǎng)絡(luò)，和少數(shù)獨(dú)立的作者。

對(duì)從WOS獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行作者（author）分析，繪制作者合作網(wǎng)絡(luò)圖譜，如圖3（右）所示。圖中共出現(xiàn)了715 個(gè)節(jié)點(diǎn)，1378 條連線。根據(jù)普賴斯定律，可計(jì)算出發(fā)文量7 篇及以上的為核心作者。結(jié)合圖和有關(guān)數(shù)據(jù)，可看出“蛛網(wǎng)型”合作網(wǎng)絡(luò)密集分布，形成了以DAVID G HALL（美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究局，美國(guó)園藝研究實(shí)驗(yàn)室，80 篇，排名第一）、LUKASZL STELINSKI（美國(guó)佛羅里達(dá)大學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)和線蟲(chóng)學(xué)教授，77 篇，排名第二）、NABIL KILLINY（美國(guó)佛羅里達(dá)大學(xué)植物病理學(xué)副教授，63 篇，排名第三）等高產(chǎn)作者為核心的作者群及合作網(wǎng)絡(luò)。

2.2.2 機(jī)構(gòu)分析 對(duì)從CNKI獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行機(jī)構(gòu)（institution）分析，繪制得到可視化圖譜，如圖4（左）所示。圖中共出現(xiàn)了767 個(gè)節(jié)點(diǎn)，282 條連線。由圖及有關(guān)數(shù)據(jù)可以看出，廣西柑橘研究所（廣西桂林，94 篇，位列第一）、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑橘研究所（又稱“西南大學(xué)柑橘研究所”，重慶市，49 篇，位列第二）、浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)植物檢疫站（浙江臺(tái)州，26篇，位列第三）、浙江省柑橘研究所（浙江臺(tái)州，23篇，位列第四）、國(guó)家臍橙工程技術(shù)研究中心（江西贛州，17 篇，位列第五）等機(jī)構(gòu)周圍形成了較為密集的合作網(wǎng)絡(luò)，同省份的地區(qū)的機(jī)構(gòu)合作較為緊密，多數(shù)機(jī)構(gòu)的關(guān)系呈現(xiàn)出獨(dú)立、兩兩聯(lián)系的形式。

對(duì)從WOS獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行機(jī)構(gòu)（institution）分析，繪制得到可視化圖譜，如圖4（右）所示。圖中共出現(xiàn)了617 個(gè)節(jié)點(diǎn)，1215 條連線。結(jié)合圖和有關(guān)數(shù)據(jù)可看出，當(dāng)前國(guó)際黃龍病領(lǐng)域的研究機(jī)構(gòu)較多，整體呈現(xiàn)為密集的蛛網(wǎng)狀合作網(wǎng)絡(luò)，形成了以佛羅里達(dá)大學(xué)（Univ Florida，美國(guó)，580 篇，位列第一）、ARS（美國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，美國(guó)，201 篇，位列第二）、美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究局（USDA-ARS，美國(guó)，195 篇，位列第三）、圣保羅大學(xué)（Univ Sao Paulo，巴西，94 篇，位列第四）、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)（South China Agr Univ，中國(guó)，75 篇，位列第五）、西南大學(xué)（Southwest Univ，中國(guó)，73 篇，位列第六）等機(jī)構(gòu)為主要核心的合作關(guān)系，并向四周延展開(kāi)。

進(jìn)一步獲取CiteSpace 中機(jī)構(gòu)分析的有關(guān)數(shù)據(jù)，截取發(fā)文量30 篇以上的高產(chǎn)機(jī)構(gòu)共12 個(gè)。其中有6 個(gè)機(jī)構(gòu)屬于美國(guó)，4 個(gè)機(jī)構(gòu)屬于中國(guó)，2 個(gè)機(jī)構(gòu)屬于巴西。12 個(gè)機(jī)構(gòu)中，中國(guó)機(jī)構(gòu)的總發(fā)文量為225 篇，巴西機(jī)構(gòu)的總發(fā)文量為133 篇，而美國(guó)機(jī)構(gòu)的總發(fā)文量為1129 篇，是中國(guó)機(jī)構(gòu)和巴西機(jī)構(gòu)的發(fā)文量總和的2.15 倍，占據(jù)WOS數(shù)據(jù)庫(kù)總發(fā)文量（2108 條）的53.56%?？梢猿醪脚袛喑?，我國(guó)機(jī)構(gòu)雖已成為國(guó)際黃龍病研究領(lǐng)域的重要力量，但其科研實(shí)力與美國(guó)相比，仍存在較大差距。

2.2.3 國(guó)家分析 對(duì)從WOS獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行國(guó)家（country）分析，繪制得到可視化圖譜，如圖5 所示。圖中共出現(xiàn)了83 個(gè)節(jié)點(diǎn)，386 條連線。根據(jù)在CiteSpace 中獲取國(guó)家分析的有關(guān)數(shù)據(jù)，截取發(fā)文量排名前10 位的國(guó)家發(fā)文信息，然后匯總并制作成表格，如表1所示。

由表1 可以看出，當(dāng)前國(guó)際上已有較多國(guó)家在黃龍病領(lǐng)域展開(kāi)了相關(guān)研究，呈現(xiàn)出以美國(guó)（USA）、中國(guó)（China）、巴西（Brazil）等國(guó)家為核心的較為密集的合作網(wǎng)絡(luò)，可見(jiàn)國(guó)家之間存在深度的合作關(guān)系。此外，美國(guó)以1062 篇的發(fā)文量遙遙領(lǐng)先于其他國(guó)家，占據(jù)WOS數(shù)據(jù)庫(kù)總發(fā)文量的50.38%，比第二名（中國(guó)，475 篇）和第三名（巴西，255 篇）的總和還多出332篇，可見(jiàn)美國(guó)的黃龍病科研實(shí)力強(qiáng)勁。具有高中介中心性的文獻(xiàn)通常是連接兩個(gè)不同領(lǐng)域的關(guān)鍵樞紐[11]，當(dāng)某節(jié)點(diǎn)的中介中心性≥0.1 時(shí)，該節(jié)點(diǎn)為關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。一個(gè)節(jié)點(diǎn)的中介中心性越高，表明其在網(wǎng)絡(luò)中的連接程度越強(qiáng)，科研影響力越大[15]。美國(guó)的中介中心性以0.72 排名第一，比中國(guó)（第三名，0.22）還多0.5。澳大利亞（Austraila）的發(fā)文量雖只有53 篇，排名第九，其中介中心性卻以0.23 排名第二。綜上，美國(guó)的黃龍病研究的影響力在全球最強(qiáng)，澳大利亞與中國(guó)次之。

美國(guó)相關(guān)科研成果的全球影響力雖然大，但實(shí)際防控效果很差。據(jù)統(tǒng)計(jì)，佛羅里達(dá)州的甜橙產(chǎn)量由2005—2006 年的1.5 億箱下降至2019 年的7200萬(wàn)箱[9]。2021 年2 月，美國(guó)批準(zhǔn)使用涕滅威防控柑橘黃龍病，但早在2003 年，涕滅威就因?qū)θ祟愒斐山】祮?wèn)題而被歐盟禁用，中國(guó)自2020 年10 月1 日起禁止含涕滅威的產(chǎn)品在境內(nèi)銷售和使用[16]。澳大利亞并無(wú)黃龍病的困擾，其研究角度是僅從檢疫角度加以重視的，也難以說(shuō)明該國(guó)的相關(guān)研究水平比中國(guó)高。雖然中國(guó)的發(fā)文量及質(zhì)量不如美國(guó)，中介中心性稍差于澳大利亞，但應(yīng)用下三項(xiàng)基本措施的實(shí)際防控效果是喜人的，全國(guó)的柑橘產(chǎn)量由2000 年的878.31萬(wàn)t 持續(xù)增長(zhǎng)至2021 年的5 121.9 萬(wàn)t[17-18]，與美國(guó)形成了鮮明的對(duì)比，是生產(chǎn)防控和科研攻關(guān)相協(xié)調(diào)的體現(xiàn)。

2.3 研究熱點(diǎn)

2.3.1 中文文獻(xiàn)研究熱點(diǎn) 關(guān)鍵詞能夠反映一篇文章的內(nèi)容，凝練了最核心、最關(guān)鍵的信息，能協(xié)助了解到該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。對(duì)從CNKI獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)鍵詞（keyword）分析，然后選擇Pathfinder 算法，對(duì)同義詞進(jìn)行合并，生成關(guān)鍵詞共現(xiàn)圖譜。根據(jù)圖譜截取頻次大于25 的高頻關(guān)鍵詞信息，再選擇LLR（Log-likelihood Ratio）算法，對(duì)關(guān)鍵詞進(jìn)行聚類，得到15 個(gè)有效聚類標(biāo)簽，最后將聚類結(jié)果可視化展示，如圖6（左）所示。

15 個(gè)聚類標(biāo)簽有：栽培技術(shù)（#0）、柑橘木虱（#1）、黃龍?。?2）、柑橘（#3）、黃化?。?4）、初步研究（#5）、青果?。?6）、溫州蜜柑（#7）、柑橘生產(chǎn)（#8）、植物檢疫（#9）、吸果夜蛾（#10）、種群動(dòng)態(tài)（#11）、紅江橙（#12）、墨西哥（#13）、早結(jié)豐產(chǎn)（#14）。根據(jù)關(guān)鍵詞聚類圖，進(jìn)一步剔除與黃龍病無(wú)關(guān)的關(guān)鍵詞，再將中文文獻(xiàn)的黃龍病研究熱點(diǎn)歸納為以下兩個(gè)方面：

（1）黃龍病綜合防治的相關(guān)研究。1）目前我國(guó)的綜合防控按照20 世紀(jì)80 年代初我國(guó)農(nóng)業(yè)部組織多個(gè)研究小組所總結(jié)出來(lái)的三項(xiàng)必要措施，具體為：滅殺柑橘木虱、使用無(wú)毒繁殖材料、及時(shí)鏟除病原（樹(shù)）進(jìn)行綜合防治，其中防控柑橘木虱是關(guān)鍵措施，對(duì)此可建立生態(tài)隔離系統(tǒng)：種植喬木、灌木、杉木等樹(shù)種作為防護(hù)隔離林帶（切忌種植木虱寄主植物），以及利用天然或物理生態(tài)屏障來(lái)阻斷木虱大規(guī)模擴(kuò)散[19-20]；在氣候變暖的影響下，木虱適生區(qū)正在北移，預(yù)計(jì)在2081—2100 年，其生活北界將由北緯30° N轉(zhuǎn)移至32°～37° N，應(yīng)加強(qiáng)早期預(yù)警和檢疫防控措施[21-22]；目前防控柑橘木虱的方法以化學(xué)防治（殺蟲(chóng)劑）為主，也有研究提出采用綠色環(huán)保的生物防治，即通過(guò)投放捕食性天敵和寄生性天敵昆蟲(chóng)和微生物，如跳小蜂、嚙小蜂、六斑月瓢蟲(chóng)等，以及其他物理防治措施，如殺蟲(chóng)燈、黃色粘蟲(chóng)板、性誘劑、糖醋液和誘蠅球等，這些物理措施在我國(guó)湖南部分地區(qū)已投入使用，可嘗試用于其他地區(qū)[23-25]。2）治療藥劑：現(xiàn)今的藥劑以防治為主，暫無(wú)特效藥；土霉素可有效抑制黃龍病菌亞洲種，可減少柑橘葉片內(nèi)的淀粉含量，增加柑橘產(chǎn)量，也未對(duì)果實(shí)品質(zhì)產(chǎn)生顯著影響[26]；磺胺二甲氧嘧啶鈉鹽（sulfadimethoxine sodium salt，SDM）對(duì)黃龍?。ㄒ约~荷爾臍橙為對(duì)象）有一定的抑制效果[27]；對(duì)柑橘樹(shù)干注射1 g·L-1的鹽酸四環(huán)素能夠顯著降低黃龍病菌濃度，但經(jīng)葉面噴施和根際澆灌鹽酸四環(huán)素的方式防治效果不明顯[28]。3）其他治療手段：在研究早期，以林孔湘為代表的科研人員對(duì)黃龍病的治療開(kāi)展了一系列的初步研究，發(fā)現(xiàn)濕熱空氣熱處理可致使病菌鈍化甚至死亡，且植物活力不受影響，之后熱處理的方式發(fā)展成：溫控箱、熱空氣、熱水蒸汽、可透太陽(yáng)光的田間移動(dòng)溫室（國(guó)外）、遠(yuǎn)紅外、微波等，但上述實(shí)驗(yàn)尚無(wú)田間規(guī)模應(yīng)用的條件，而多用于無(wú)毒幼苗的培育[29-33]。除了熱處理，還有：a. 利用一些化學(xué)分子誘導(dǎo)或激發(fā)柑橘內(nèi)部抗??；b. 以寡糖為植物免疫識(shí)別、以納米碘為靶向消殺黃龍病菌的疫苗研制思路，對(duì)病樹(shù)處理后可達(dá)到PCR轉(zhuǎn)陰率50%的效果，但僅停留在試驗(yàn)階段[10]；c. 利用莖尖嫁接脫毒：依據(jù)病毒在植物體內(nèi)分布不均勻性原理，將頂端分生組織不帶毒區(qū)域切下并嫁接到健康砧木上進(jìn)行培育獲得無(wú)病毒植株[34]，是20 世紀(jì)80年代以來(lái)應(yīng)用最廣，也是迄今最為有用的技術(shù)。

（2）黃龍病原體的相關(guān)研究：1）病原體分布：CLas 在病枝中分布不均勻，在果實(shí)處（橘絡(luò)、果中軸或種皮）富集[35]；柑橘花器中的花瓣、雄蕊、雌蕊和花粉以及種子中的種皮和胚乳組織均可檢測(cè)到CLas，但未發(fā)現(xiàn)播種和授粉可傳播HLB[36]；廣東黃龍病菌以Type-2 原噬菌體類型和Type-1+3 混合原噬菌體類型為主，前者比后者更容易在柑橘木虱成蟲(chóng)體內(nèi)增殖，對(duì)柑橘也具有更強(qiáng)的致病力[37]。2）黃龍病原體的檢測(cè)技術(shù)：掌上納米孔測(cè)序儀MinION：可彌補(bǔ)因柑橘木虱蟲(chóng)體過(guò)小或損壞難以進(jìn)行光學(xué)識(shí)別的不足；可視化LAMP 快速檢測(cè)技術(shù)：具有成本低、30 min 即可觀察到檢測(cè)結(jié)果、操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，有望替代qPCR 在田間進(jìn)行黃龍病的快速鑒定；基于串聯(lián)重復(fù)序列的柑橘黃龍病菌聚合酶鏈?zhǔn)街脫Q反應(yīng)（TR-PCDR）檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)的檢測(cè)靈敏度比基于SYBR Green 的實(shí)時(shí)熒光定量PCR 高10倍，已大規(guī)模應(yīng)用于廣西全區(qū)柑橘樣品的黃龍病菌檢測(cè)[36，38-39]。3）離體培養(yǎng)：國(guó)內(nèi)外均有黃龍病菌成功分離純培養(yǎng)的報(bào)道，但未完成科赫氏法則檢驗(yàn)，也無(wú)法被他人重復(fù)，有待進(jìn)一步驗(yàn)證[40-41]；有研究將黃龍病菌與有益及有害的伴生菌在培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行共培養(yǎng)，并發(fā)現(xiàn)黃龍病菌的增殖量高達(dá)50 倍，實(shí)現(xiàn)了黃龍病菌與伴生菌的共培養(yǎng)，有望推動(dòng)病原學(xué)及生物學(xué)的基礎(chǔ)研究[42]。4）病原分泌蛋白：黃龍病菌亞洲種Psy62 基因組共有57 個(gè)可能的Sec 依賴分泌蛋白（HLB侵染過(guò)程中重要的毒力因子），其中分泌蛋白m3875 和m4405 具有抑制寄主PCD的功能，并且能影響寄主正常生長(zhǎng)[43]；CLas Sec6 為韌皮部桿菌屬亞洲種特異性分泌蛋白，可作為黃龍病感病指示分子標(biāo)志物[44]；分泌蛋白Clsp33 不具有跨膜結(jié)構(gòu)域，但具有典型的信號(hào)肽，長(zhǎng)度為20 aa，具有分泌能力，對(duì)本氏煙具有致病性，可推測(cè)其為潛在的毒力因子[45]。5）寄主抗性評(píng)價(jià)：CLas 侵染柑橘寄主后，會(huì)引起大多數(shù)寄主防御相關(guān)蛋白或轉(zhuǎn)錄因子的上調(diào)表達(dá)，如過(guò)氧化氫酶、Cu/Zn 超氧化物歧化酶、幾丁質(zhì)酶、植物凝集素相關(guān)蛋白及神秘果素樣蛋白等[46]；在黃龍病菌與柑橘互作早期，寄主葉脈和根分別調(diào)控糖代謝和次生代謝相關(guān)通路以響應(yīng)CLas 侵染，而CLas通過(guò)調(diào)控物質(zhì)跨膜運(yùn)輸和能量代謝來(lái)維持病原細(xì)胞在柑橘中的增殖和擴(kuò)散[47]；SA（水楊酸）與MeSA（水楊酸甲酯）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵酶基因CsSABP2-1 和CsSABP2-4 在柑橘SAR 響應(yīng)CLas 侵染中起著重要作用，其高水平表達(dá)與柑橘HLB 抗性緊密相關(guān)[48]；染HLB的椪柑，萜類化合物中相對(duì)含量顯著增加的有大根香葉烯D和大根香葉烯B（柑橘類植物次生化合物中半萜及倍半萜含量與病原真菌的抑制效果呈正相關(guān)）[49]。6）基因：目前針對(duì)黃龍病菌序列拼接策略更多的是結(jié)合從頭拼接和基于參考基因組的拼接方法進(jìn)行互補(bǔ)，從而得到最終的基因組序列；黃龍病菌基因組由保守的染色體區(qū)域序列和高變異的原噬菌體序列組成；原噬菌體區(qū)域的變異主要表現(xiàn)為噬菌體類型的差異，其基因組大小約為1.26 Mb，GC含量約為36.5%；黃龍病菌缺乏編碼毒素或特殊分泌系統(tǒng)的基因，含有一套完整的三羧酸循環(huán)（TCA）所需的酶，但是缺乏用于直接形成丙酮酸的酶，如絲氨酸脫水酶、丙氨酸消旋酶和丙氨酸脫氫酶[13]；黃龍病菌涉及DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂功能的管家基因表達(dá)較穩(wěn)定，在CLas 的基因表達(dá)研究中可選擇ftsZ+gyrA的基因組合作為內(nèi)參基因[50]。

2.3.2 英文文獻(xiàn)研究熱點(diǎn)對(duì)從WOS獲得的數(shù)據(jù)

進(jìn)行關(guān)鍵詞（keyword）分析，生成關(guān)鍵詞共現(xiàn)圖譜。根據(jù)圖譜截取頻次大于100 的高頻關(guān)鍵詞信息，再選擇LLR（Log-likelihood Ratio）算法，對(duì)關(guān)鍵詞進(jìn)行聚類，形成11 個(gè)有效聚類標(biāo)簽，最后將聚類結(jié)果可視化展示，如圖6（右）

11 個(gè)聚類標(biāo)簽有：Asian citrus psyllid（#0 亞洲柑橘木虱）、Penicillium digitatum（#1 柑橘綠霉?。?、greening disease（#2 青果病）、gene expression（#3 基因表達(dá)）、fruit yield（#4 果實(shí)產(chǎn)量）、cardiovasculardisease（#5 心血管疾?。habdovirus（#6 棒狀病毒）、asian citrus leafminer（#7 亞洲柑橘潛葉蛾）、campestris（#8 野生的）、pectin（#12 果膠）、essence（#14 本質(zhì)）。根據(jù)關(guān)鍵詞聚類圖，進(jìn)一步剔除與黃龍病無(wú)關(guān)的關(guān)鍵詞，再將英文文獻(xiàn)的黃龍病研究熱點(diǎn)歸納為以下3 個(gè)方面：

（1）提高柑橘生產(chǎn)力、防治藥物的相關(guān)研究：1）黃龍病流行的情況下，為提高柑橘生產(chǎn)力，近年國(guó)際果園管理成果有：評(píng)估微量元素的最佳用量，如在佛羅里達(dá)，受HLB 影響的的幼樹(shù)的最佳Mn 用量是8.9～11.5 kg·hm-2；改善灌溉系統(tǒng)：珍珠巖基質(zhì)的土壤可節(jié)約用水；潛灌長(zhǎng)凳比傳統(tǒng)滴灌節(jié)省98%的水，且潛灌長(zhǎng)凳所栽砧木的生長(zhǎng)速度比滴灌快4 周；對(duì)不同類型的柑橘樹(shù)精準(zhǔn)施肥：受HLB 影響的柑橘樹(shù)中，Mg肥對(duì)土壤和養(yǎng)分濃度的影響比N或Ca 的影響大；施用生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥[51-54]。2）藥物方面，用赤霉素或抗氧化劑（尿酸、蕓香苷）對(duì)受HLB影響的柑橘進(jìn)行葉面噴霧，可減少韌皮部組織中的細(xì)胞死亡和過(guò)氧化氫濃度，并減輕HLB 癥狀[55]；噻唑磷（FOS）和銅銨復(fù)合物（CAC）組成根浸液，對(duì)染病植株處理90 d 后，可有效控制HLB[56]；含有活性成分土霉素（OTC）的殺菌劑用于葉面噴霧，已用來(lái)控制美國(guó)佛羅里達(dá)州的HLB，其抑制植物中CLas種群的最低含量（w）為0.68 和0.86 μg·g-1 [57]；除了藥物，也有研究對(duì)染HLB的柑橘樹(shù)引入從健康柑橘樹(shù)中分離的本地內(nèi)生枯草芽孢桿菌L1-21，經(jīng)過(guò)2 a 的時(shí)間，病樹(shù)的CLas 發(fā)病率降低到不高于3%，因此有望利用本地內(nèi)生菌重組柑橘內(nèi)生微生物群，進(jìn)而建立可持續(xù)的HLB控制策略[58]。

（2）柑橘木虱的相關(guān)研究：1）能穿越潛在的地理障礙（如道路和休耕地）；可在15～30 min 內(nèi)從受感染的植物中獲得病原體，并在8～12 d 的潛伏期后，在不到1 h 內(nèi)將病原體傳播給健康的植物；具有顯著的飛行能力：沒(méi)有風(fēng)的輔助下，3 h 內(nèi)分散320 m，最遠(yuǎn)2.4 km，有風(fēng)的影響下，ACP會(huì)順風(fēng)而分散，并隨柑橘產(chǎn)區(qū)發(fā)生的高風(fēng)速而移動(dòng)；沒(méi)有惡劣天氣的影響下，12 d 內(nèi)ACP的傳播路徑至少2 km[59-61]；在-4 ℃的寒冷環(huán)境下，ACP可在兩周內(nèi)逐漸適應(yīng)并在短時(shí)間內(nèi)繼續(xù)存活[62]。2）化學(xué)防治：其合成殺蟲(chóng)劑丙溴磷+氯氰菊酯對(duì)ACP 毒性更大，但殺蟲(chóng)劑不可持續(xù)且成本高，可探究物理刺激（植物揮發(fā)物、光、色）、破壞ACP 的生理行為（喂養(yǎng)和消化）及寄主植物對(duì)ACP 的抗性，來(lái)改進(jìn)對(duì)ACP 的綜合管理[63-64]。3）物理防治：用單個(gè)保護(hù)罩（IPC）可有效隔離木虱與柑橘幼樹(shù)，IPC 引起的樹(shù)冠內(nèi)的微氣候變化也促進(jìn)植物生長(zhǎng)，適合于HLB流行地區(qū)的新柑橘種植園；3D打印的黃色圓筒誘捕器的捕獲率與黃色粘蟲(chóng)板接近，并且可重復(fù)利用和收集完好的ACP[65-67]。4）CLas 與ACP的部分互作如下：CLas 能在木虱體內(nèi)持續(xù)存在12 周，且木虱雌性產(chǎn)生的卵或后代未檢測(cè)到該菌[68]；CLas 對(duì)ACP的繁殖力（產(chǎn)卵、發(fā)育、交配）有著積極影響，可使成蟲(chóng)的饑餓程度更高，并使其更頻繁地覓食和更傾向于長(zhǎng)途飛行（可增加ACP的概率分布），以及降低對(duì)大多數(shù)商業(yè)殺蟲(chóng)劑的敏感性和提升對(duì)昆蟲(chóng)病原真菌的易感性；CLas 陽(yáng)性植物釋放的水楊酸甲酯明顯多于CLas 陰性植物，前者的枝條、成熟葉及著色對(duì)ACP更具有吸引力[4]。

（3）黃龍病原體的相關(guān)研究：1）離體培養(yǎng)：目前所有用CLas 實(shí)現(xiàn)無(wú)源生長(zhǎng)和完成科赫法則的嘗試都失敗了，有研究嘗試通過(guò)添加缺失的與可培養(yǎng)性相關(guān)的Lcr（Liberibacter crescens，新月自由桿菌）基因來(lái)實(shí)現(xiàn)CLas 的復(fù)制無(wú)源生長(zhǎng)，成功創(chuàng)造了初步的實(shí)驗(yàn)條件，為將大量“必要”的Lcr 基因轉(zhuǎn)移到CLas提供了一種實(shí)用方法[69]；目前新月體乳桿菌菌株BT-1 在遺傳上易受標(biāo)準(zhǔn)分子操作技術(shù)的控制，已被開(kāi)發(fā)為一種替代模型，用于基因、調(diào)控元件、啟動(dòng)子和來(lái)源于未培養(yǎng)的致病性Liberibacters 的分泌效應(yīng)子的功能研究[70]。2）病原分泌蛋白：CLas 基因組中，原噬菌體編碼蛋白AGH17470 為非經(jīng)典分泌蛋白，是第一個(gè)前噬菌體編碼的分泌蛋白，能引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)（HR）并誘導(dǎo)強(qiáng)的植物免疫反應(yīng)，可對(duì)本氏煙草進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)，導(dǎo)致整個(gè)植物矮化[71]；CLas 的分泌蛋白SDE1 可用作檢測(cè)標(biāo)記，用于各種血清學(xué)平臺(tái)以鑒定受感染的樹(shù)木，優(yōu)勢(shì)有：a. 監(jiān)測(cè)不同類型的標(biāo)記（即蛋白質(zhì)對(duì)DNA）；b. 潛在地增加了識(shí)別被感染的樹(shù)木，尤其是在無(wú)癥狀階段；c. 允許支持大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)調(diào)查的成本可控的測(cè)定，有望替代qPCR 檢測(cè)[72]。CLas的蛋白LasP235 和效應(yīng)子3 參與HLB的發(fā)病機(jī)制為：a. 兩者的顯著植物柑橘靶標(biāo)包括柑橘先天免疫蛋白；b. 能與多種柑橘蛋白質(zhì)互作并抑制其功能，然后導(dǎo)致高水平的活性氧、殺菌脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白（LTP）的阻斷和過(guò)早程序性細(xì)胞死亡（PCD）的誘導(dǎo)[73]。3）寄主抗性評(píng)價(jià)：SA（水楊酸）介導(dǎo)的SAR（植物獲得性抗性）信號(hào)的實(shí)現(xiàn)需要活性SA的閾值水平，當(dāng)SA水平升至某閾值以上時(shí)，SAR和其他防御反應(yīng)被觸發(fā)以防御病原體攻擊，而HLB感染則通過(guò)干擾SA信號(hào)傳導(dǎo)抑制柑橘免疫力[74]；寄主植物中與HLB 相關(guān)的潛在脂肪酸標(biāo)志物：POA、OA、ALA和ARA，可見(jiàn)CLas 感染可能導(dǎo)致長(zhǎng)鏈脂肪酸代謝的改變，也可能導(dǎo)致宿主對(duì)脂肪酸防御的操縱[75]。4）基因：遺傳工程技術(shù)，如遺傳轉(zhuǎn)化和基因組編輯，是開(kāi)發(fā)抗病作物的有效方法，目前有廣譜抗病基因AtNPR1（一種修飾的植物硫素基因）和抗菌肽基因Cecropin B 和attacin A 已分別引入柑橘，均有效提高了植株對(duì)HLB的抗性；近年來(lái)，基于簇狀規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR）的系統(tǒng)使基因組編輯成為一種不可或缺的遺傳操作工具，已應(yīng)用于包括柑橘在內(nèi)的許多作物；在木虱的基因編輯方面也有創(chuàng)新突破，如BAPC輔助的CRISPR/Cas9 系統(tǒng)，能夠在成年雌性卵巢附近注射，并產(chǎn)生可遺傳的種系基因編輯，不僅繞過(guò)了卵子顯微注射的需要，也能抑制ACP的內(nèi)共生體和Liberibacter 病原體，不過(guò)仍面臨著監(jiān)管審批時(shí)間長(zhǎng)和成本高的問(wèn)題[76]；有研究已成功實(shí)現(xiàn)納米粒子介導(dǎo)的體外被動(dòng)給藥和體內(nèi)被動(dòng)給藥，有著高效低毒被動(dòng)給藥的潛力，其原理為：納米顆粒可用作載體系統(tǒng)，將質(zhì)粒DNA、RNA和寡核苷酸等遺傳物質(zhì)高效、快速地傳遞到細(xì)胞中，從而減少當(dāng)前農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因傳遞系統(tǒng)的缺點(diǎn)和限制[77]。

2.4 研究前沿

關(guān)鍵詞突現(xiàn)是指在某一時(shí)期內(nèi)與研究主題相關(guān)的詞的頻次顯著增加，它能夠挖掘研究熱點(diǎn)，反映研究趨勢(shì)[78]。與關(guān)鍵詞分析相比，突現(xiàn)詞分析可以捕捉到研究領(lǐng)域拐點(diǎn)和熱點(diǎn)的出現(xiàn)時(shí)段，從而推斷該領(lǐng)域的研究前沿。

2.4.1 中文文獻(xiàn)研究前沿筆者在本文中基于關(guān)鍵

詞（keyword）分析的基礎(chǔ)，對(duì)黃龍病領(lǐng)域的突現(xiàn)詞進(jìn)行探測(cè)，得到突變強(qiáng)度最高的25 個(gè)關(guān)鍵詞，如圖7（左）所示。圖中突現(xiàn)詞列表按照起始年份的先后順序進(jìn)行排序，“Strength”表示關(guān)鍵詞的突變強(qiáng)度，值越大表示突變強(qiáng)度越強(qiáng)，紅色部分表示該突現(xiàn)詞持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)度，其起止年份分別與“Begin”和“End”列下的年份相對(duì)應(yīng)。

圖7（左）反映出中文文獻(xiàn)的黃龍病研究領(lǐng)域于1956—2021 年間的研究趨勢(shì)及研究前沿。根據(jù)該圖可劃分為3 個(gè)時(shí)間段：1956—1978 年、1979—2001年、2002—2021 年，剔除與黃龍病無(wú)關(guān)的突現(xiàn)詞，然后進(jìn)行如下具體分析：

1956—1978 年，涌現(xiàn)出“黃梢病”（黃龍病的舊稱）、“柑橘樹(shù)”、“林孔湘”、“病毒病”、“病原體”、“類菌原體”等突現(xiàn)詞，其中“病毒病”的突現(xiàn)強(qiáng)度最高，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，表明這一階段內(nèi)，以林孔湘為主力的研究人員就黃龍病的致病原因展開(kāi)了大量研究。黃龍病的致病因子在1956 年首次被證明為病毒，在未更正為韌皮部桿菌之前得到學(xué)界的廣泛認(rèn)可。林孔湘嘗試用濕熱空氣處理柑橘芽條，發(fā)現(xiàn)能短時(shí)間內(nèi)有效破壞黃龍病的致病力且不損傷柑橘芽條的生活力，表明柑橘芽條的致死溫度與黃龍病菌受破壞的溫度有明顯差距，為熱治療奠定了基礎(chǔ)。1964 年，廣西柳州園藝場(chǎng)的病樹(shù)分布并非向原來(lái)病樹(shù)區(qū)的四周擴(kuò)散，而是沿邊緣線擴(kuò)展，病害田間發(fā)病中心不明顯，是最早確認(rèn)黃龍病害在田間存在著邊界效應(yīng)的事例[7]。1974—1975 年，趙學(xué)源等[79]用四環(huán)素浸泡染病柑橘芽條2 h，然后將其嫁接在健康的柑橘樹(shù)上，并發(fā)現(xiàn)柑橘樹(shù)在未來(lái)5 年都沒(méi)有發(fā)病，并首次確定出黃龍病原體對(duì)抗生素敏感的事實(shí)。

1979—2001 年，“柑橘生產(chǎn)”的突現(xiàn)強(qiáng)度最高，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。說(shuō)明在這一階段，由于改革開(kāi)放及進(jìn)入WTO（世界貿(mào)易組織）后，在水果消費(fèi)市場(chǎng)的沖擊及黃龍病的影響下，我國(guó)開(kāi)始重視柑橘的生產(chǎn)及布局優(yōu)化工作，如擴(kuò)大出口、根據(jù)適宜的生態(tài)區(qū)發(fā)展名特優(yōu)新品種、建立規(guī)模化柑橘生產(chǎn)基地、提高果農(nóng)福利、柑橘產(chǎn)業(yè)化及建立市場(chǎng)營(yíng)銷策略等[80]。這一時(shí)期，柑橘木虱的棲息地逐漸北移，其防治及預(yù)警勢(shì)在必行，并總結(jié)出防控措施：控制人為傳播（如引種）、及時(shí)挖除病樹(shù)及藥劑防治、通過(guò)種植適合天敵的棲息地進(jìn)行生物防治[81]，在爭(zhēng)取提高柑橘產(chǎn)量的同時(shí)做好防護(hù)工作。

2002—2021 年，“栽培技術(shù)”突現(xiàn)強(qiáng)度最高，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，證明近年來(lái)，我國(guó)就柑橘的栽培技術(shù)持續(xù)展開(kāi)研究，如栽培生草（百喜草、白三葉）來(lái)提高果實(shí)產(chǎn)量及提高土壤礦質(zhì)養(yǎng)分（氮、鉀、鐵和鋅等）含量[82-83]，以及廣西的姑婆山野生元橘等16 種野生柑橘種質(zhì)資源表現(xiàn)出更強(qiáng)的耐病性，可嘗試用于培育抗病品種[84]?！胺揽亍薄熬C合防控”持續(xù)時(shí)間分別從2009—2017 年、2015—2019 年，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，足以看出我國(guó)持續(xù)重視黃龍病的防控。這一期間，我國(guó)制定了HLB的診斷標(biāo)準(zhǔn)、防控規(guī)范、發(fā)放救災(zāi)基金和設(shè)立國(guó)家重點(diǎn)研究項(xiàng)目等。2015—2019 年，中國(guó)農(nóng)業(yè)（農(nóng)村）部安排近4 億元農(nóng)業(yè)生產(chǎn)救災(zāi)資金用于支持防控黃龍病[85]。2017 年，“國(guó)家柑橘優(yōu)勢(shì)帶HLB 綜合防控協(xié)同創(chuàng)新聯(lián)盟”成立，加強(qiáng)全國(guó)協(xié)同聯(lián)動(dòng)[2]。2019 年，廣西壯族自治區(qū)人大常委會(huì)通過(guò)了《廣西壯族自治區(qū)柑橘黃龍病防控規(guī)定》，這是我國(guó)首部黃龍病防控地方性法規(guī)[86]。相信黃龍病的防控工作以及柑橘優(yōu)質(zhì)品種的培育仍將是研究的主要趨勢(shì)。

2.4.2 英文文獻(xiàn)研究前沿 在關(guān)鍵詞（keyword）分析的基礎(chǔ)上，筆者對(duì)該領(lǐng)域的突現(xiàn)詞進(jìn)行探測(cè)，得到突變強(qiáng)度較高的25 個(gè)關(guān)鍵詞，如圖7（右）所示。該圖反映出英文文獻(xiàn)的黃龍病研究領(lǐng)域在2002—2021 年間的研究趨勢(shì)及前沿。將年段細(xì)分為2002—2004 年、2005—2011 年、2012—2021 年3 個(gè)時(shí)間段，剔除與黃龍病無(wú)關(guān)的突現(xiàn)詞，然后分別探討各個(gè)階段的研究狀況。

2002—2004 年間，該階段出現(xiàn)了“strain（ 菌株）”，可見(jiàn)當(dāng)時(shí)研究前沿側(cè)重于對(duì)病菌的探索。此時(shí)多數(shù)研究已采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）快速且靈敏的檢測(cè)方法，其中的實(shí)時(shí)熒光PCR（RT-PCR，也叫定量PCR（qPCR））自1996 年開(kāi)始商用以來(lái)，已成為迄今為止用于檢測(cè)和定量HLB病原體最準(zhǔn)確和最靈敏的方法[87]。在PCR檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用下，巴西作為僅次于中國(guó)的柑橘生產(chǎn)大國(guó)，于2004 年首次報(bào)告由CLas 引起的HLB[88]。HLB在亞非拉地區(qū)也相繼被發(fā)現(xiàn)，但只有成本高昂且耗時(shí)長(zhǎng)的PCR技術(shù)可以確認(rèn)病原體的存在，為了及早控制病情，最好通過(guò)綜合疾病管理來(lái)管控，包括使用健康的苗圃材料、清除受感染的樹(shù)木或樹(shù)枝以及綜合病媒控制，同時(shí)在無(wú)HLB的柑橘產(chǎn)區(qū)做好消殺傳播媒介的預(yù)警工作[89]。

2005—2011 年間，“DNA（脫氧核糖核酸）”的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，“PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）”的突現(xiàn)強(qiáng)度最大，表明在該階段，分子生物學(xué)為研究前沿。美國(guó)于2005 年9 月在佛羅里達(dá)州首次發(fā)現(xiàn)到由黃龍病菌亞洲種CLas 引起的HLB[61]。CLas 的全基因序列通過(guò)測(cè)序及PCR等多種手段被獲取并注釋[90]。利用PCR 也可確定病原體在寄主中的分布，如：柑橘木虱的唾液腺是CLas 的重要傳播屏障，以及CLas可能在木虱的消化道和唾液腺中復(fù)制或積累[91]；CLas 分布在柑橘樹(shù)的樹(shù)皮組織、葉中脈、根部以及不同的花果部分，但不存在于胚乳和胚芽中，分布也不均勻，可從感染部位傳播到植物全身的不同部位[92]。此外，CLas 可影響寄主植物中的基因表達(dá)變化，包括細(xì)胞防御、運(yùn)輸、細(xì)胞組織、光合作用和碳水化合物代謝等，尤其可誘導(dǎo)韌皮部中特異性凝集素PP2 樣蛋白的轉(zhuǎn)錄物積累[93]。足以看出在此階段，黃龍病的分子研究領(lǐng)域正處在蓬勃發(fā)展中。

2012—2021 年間，突現(xiàn)詞有“classification（分類）”、“hemiptera psyllidae（半翅目木虱科）”、“triozaerytreae（非洲柑橘木虱）”、“performance（性能）”，持續(xù)時(shí)間都較短，其中“hemiptera psyllidae（半翅目木虱科）”突現(xiàn)強(qiáng)度最大，可看出此時(shí)國(guó)際研究開(kāi)始關(guān)注非洲柑橘木虱（簡(jiǎn)稱AfCP）。AfCP在歐洲持續(xù)蔓延，對(duì)歐洲的柑橘產(chǎn)業(yè)造成潛在風(fēng)險(xiǎn)，目前有研究者主張對(duì)未檢測(cè)到HLB的地方實(shí)行生物防治，對(duì)檢測(cè)到HLB 的地方進(jìn)行嚴(yán)格的化學(xué)防治[94]。黃龍病的分類檢測(cè)技術(shù)也在不斷創(chuàng)新，具體為：（1）使用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增：簡(jiǎn)稱LAMP，可在單一溫度下進(jìn)行特異性擴(kuò)增DNA模板，比傳統(tǒng)PCR 需要更少的專業(yè)設(shè)備；（2）LAMP側(cè)向流動(dòng)試紙：具有qPCR 的功效，并且經(jīng)濟(jì)、方便、響應(yīng)迅速，尚未商用；（3）重組酶聚合酶擴(kuò)增：簡(jiǎn)稱RPA，使用對(duì)象為粗提物和便攜式加熱塊，可在大約30 min 內(nèi)完成整個(gè)測(cè)試過(guò)程，靈敏度與qPCR 相當(dāng)，但距離替代qPCR 還需長(zhǎng)期的驗(yàn)證；（4）基于生物標(biāo)志物和植物揮發(fā)物（病原體分泌物）和感染宿主釋放的揮發(fā)性有機(jī)化合物（VOC））的氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、氣相色譜/差示遷移譜或者犬科動(dòng)物進(jìn)行HLB 識(shí)別檢測(cè)的技術(shù)[87]；（5）解吸電噴霧電離與質(zhì)譜成像：簡(jiǎn)稱DESI-MSI，可快速、有效地檢測(cè)甜橙中的生物標(biāo)志物，有望開(kāi)發(fā)成實(shí)時(shí)、快速的診斷技術(shù)[95]；（6）高光譜遙感設(shè)備：將高光譜相機(jī)安裝于無(wú)人機(jī)，基于像素級(jí)識(shí)別HLB，分類準(zhǔn)確率不低于99%，有望用于柑橘病害的早期無(wú)損檢測(cè)和分級(jí)[96]。

3 結(jié)論與展望

3.1 結(jié)論

筆者在本文中基于知識(shí)圖譜技術(shù)，通過(guò)檢索CNKI、Web of Science 數(shù)據(jù)庫(kù)，收集與黃龍病研究相關(guān)的文獻(xiàn)，再采用CiteSpace 軟件構(gòu)建知識(shí)圖譜并進(jìn)行可視化分析，可總結(jié)出4 條結(jié)論：（1）國(guó)內(nèi)外正加強(qiáng)對(duì)黃龍病的研究，預(yù)計(jì)未來(lái)仍會(huì)保持熱度；（2）美國(guó)的發(fā)文量全球最多，國(guó)際影響力最強(qiáng)。我國(guó)機(jī)構(gòu)雖已成為國(guó)際黃龍病研究領(lǐng)域的重要力量，但其科研實(shí)力與美國(guó)相比，仍存在巨大差距；（3）中文文獻(xiàn)的研究熱點(diǎn)主要包括黃龍病綜合防治和黃龍病病原體，英文文獻(xiàn)的研究熱點(diǎn)聚焦于提高柑橘生產(chǎn)力、防治藥物、柑橘木虱和黃龍病病原體方面等；（4）中文文獻(xiàn)近年關(guān)注優(yōu)勢(shì)品種的栽培技術(shù)以及持續(xù)重視綜合防控，英文文獻(xiàn)近年則關(guān)注柑橘木虱的生理生化特性及防治手段，開(kāi)始重視非洲柑橘木虱對(duì)歐洲黃龍病的潛在威脅，并對(duì)黃龍病的分類檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行不斷創(chuàng)新。

進(jìn)一步討論，美國(guó)的主體研究形式是小單元開(kāi)展，發(fā)表文章時(shí)甚至有國(guó)際合作人員（大多為海外進(jìn)修人員）。我國(guó)通常以大合作為主，只是考慮到知識(shí)產(chǎn)權(quán)的歸屬問(wèn)題，成果大多為分開(kāi)發(fā)表的形式，攻關(guān)起始時(shí)間也比美國(guó)早幾十年。正常來(lái)說(shuō)，我國(guó)在黃龍病領(lǐng)域的影響力應(yīng)高于美國(guó)，但根據(jù)圖譜分析，我國(guó)在黃龍病的科研影響力遠(yuǎn)低于美國(guó)。究其原因，除了歷史因素外，主要與經(jīng)費(fèi)限制有關(guān)。我國(guó)黃龍病的研究經(jīng)費(fèi)遠(yuǎn)低于美國(guó)的研發(fā)投入[97]，美國(guó)自2005年發(fā)現(xiàn)該病后，所投入的研究經(jīng)費(fèi)是中國(guó)的40余倍，因此客觀上我國(guó)黃龍病科研綜合實(shí)力不如美國(guó)。本文也存在不足之處，在于：（1）選用的WOS數(shù)據(jù)庫(kù)的收錄年限只有2002—2021 年，原因是所屬機(jī)構(gòu)所訂購(gòu)的WOS數(shù)據(jù)庫(kù)只收錄進(jìn)20 a 的文獻(xiàn)，故無(wú)法系統(tǒng)分析發(fā)表時(shí)間更早的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)；（2）部分英文作者有很大可能性來(lái)自同一國(guó)家，尤其是我國(guó)，因此我國(guó)與國(guó)際的熱點(diǎn)與前沿部分有難以避免的交叉重合之處，同時(shí)也存在著導(dǎo)致小部分?jǐn)?shù)據(jù)漏檢的問(wèn)題：我國(guó)部分作者發(fā)表基于其他語(yǔ)種的文獻(xiàn)及使用不同英文名字寫法發(fā)表英文文章，種種因素致使本次研究無(wú)法完美地統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，也難以詳細(xì)區(qū)分出我國(guó)與國(guó)際一流水平的科研差異，只能通過(guò)中英文發(fā)文量及研究主體對(duì)我國(guó)相關(guān)研究進(jìn)行計(jì)量分析，并得出“我國(guó)黃龍病的綜合科研實(shí)力落后于美國(guó)”的初步結(jié)論。

3.2 展望

為了縮小我國(guó)與美國(guó)的黃龍病的科研差距，除了政府持續(xù)投入大量資金及進(jìn)一步完善防控法規(guī)外，還需科研機(jī)構(gòu)牽頭建立線上溝通平臺(tái)，以便即時(shí)答疑，同時(shí)也要定期舉行全國(guó)性的會(huì)議，以便確定各大機(jī)構(gòu)接下來(lái)的具體攻關(guān)方向和更為細(xì)致的分工合作，從而更加從容地應(yīng)對(duì)黃龍病廣且深的攻關(guān)難題。此外，由于黃龍病菌暫時(shí)無(wú)法進(jìn)行離體培養(yǎng)，科研人員難以從形態(tài)學(xué)、生物學(xué)、病原學(xué)等方面對(duì)病原體進(jìn)行深入研究[3]，應(yīng)需堅(jiān)持尋找黃龍病菌離體培養(yǎng)的技術(shù)，或者另尋其他可替代的方式。

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