陳燕霞 孫亦群 李得堂

【摘 要】 目的：對不同批次加味雙柏膏進(jìn)行質(zhì)量研究。方法：采用顯微鑒別法對大黃及關(guān)黃柏進(jìn)行顯微特征研究，采用薄層色譜法對大黃進(jìn)行薄層色譜研究及其方法考察。結(jié)果：不同批次加味雙柏膏的大黃及關(guān)黃柏顯微特征明顯易見；大黃的薄層色譜分離效果良好，色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)方法簡便可行，重現(xiàn)性好，可用于加味雙柏膏的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 加味雙柏膏；大黃 ；關(guān)黃柏；顯微鑒別；薄層色譜鑒別

【中圖分類號】R917? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號】1007-8517（2023）08-0050-04

Abstract：Objective Studies on the qualities of different batches of Modified Shuangbai Ointment.Methods The Microscopical Identification was used to study the microscopic characters between Rheum Officinale and Cortex Phellodendri Amurensis， the TLC Identification was used to study the thin-layer chromatogram of Rheum Officinale， etc.Results There were obvious differences in microscopic characters between Rheum Officinale and Cortex Phellodendri Amurensis. The separation effect of the thin-layer chromatogram in Rheum Officinale is good， the TLC spots developed were fairly clear， and the blank test showed no interference.Conclusion This is a simple and reproducible testing method to be used to control the quality of Modified Shuangbai Ointment.

Key words：Modified Shuangbai Ointment；Rhei Radix et Rhizoma；Phellodendri Amurensis Cortex；Microscopical Identification；TLC Identification

“院有?？啤⒖浦螌２?、病有專藥、藥有特色”，醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑是醫(yī)院各科室名老中醫(yī)在長期的臨床使用過程中總結(jié)出來的智慧結(jié)晶，是醫(yī)院重點(diǎn)?？茩z查項目的重要指標(biāo)，是大型中醫(yī)醫(yī)院彰顯重點(diǎn)?？坪诵母偁幜Φ闹匾w現(xiàn)之一。醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑不僅能滿足臨床需求、彌補(bǔ)已上市中成藥品種的不足，還為中藥新藥的創(chuàng)新、轉(zhuǎn)化過程中提供了寶貴的臨床實(shí)踐基礎(chǔ)［1-5］。

加味雙柏膏是廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨傷科的?？浦苿纱簏S、關(guān)黃柏、側(cè)柏葉等5 味中藥組成，軟膏的基質(zhì)為黃凡士林。大黃主要含有蒽醌類等，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃之功效［6-10］。關(guān)黃柏主要含有小檗堿等，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡之功效［11-12］。薄荷主要含有揮發(fā)油等，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、利咽、透疹、疏肝行氣之功［13-14］。澤蘭主要含有揮發(fā)油等，具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀消癰、利水消腫之功［15］。側(cè)柏葉主要含有揮發(fā)油等，具有涼血止血、化痰止咳、生發(fā)烏發(fā)之功效［16］。方中大黃、關(guān)黃柏清熱解毒，祛瘀生新；側(cè)柏葉、澤蘭活血祛瘀；薄荷清涼祛瘀；全方具有活血祛瘀、消腫之功，主要治療扭傷、挫傷等外傷。該醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑臨床使用效果良好，年銷售量約為28.5 萬貼，是我院骨傷科的特色治療制劑，深受廣大患者喜愛。近年來國家相關(guān)部門對于醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑質(zhì)量要求不斷提高。為確保質(zhì)量可控，保證用藥安全，本文對醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑加味雙柏膏進(jìn)行質(zhì)量研究，以進(jìn)一步提高及完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 儀器試藥 顯微鏡攝鏡頭儀（CX41，奧林巴斯Olympus）；半自動點(diǎn)樣儀（Linomat-5，瑞士卡瑪CAMAG）；全自動展開儀（ADC2，瑞士卡瑪CAMAG）；

1.2 試藥 大黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號120984-200301）；大黃酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110757-200206）；關(guān)黃柏對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號120937-201007）；黃柏酮對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號111923-201303）；加味雙柏膏（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心）；大黃陰性對照樣品（按工藝制成不含大黃的樣品）；關(guān)黃柏陰性對照樣品（按工藝制成不含關(guān)黃柏的樣品）；硅膠H預(yù)制板（煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所，批號20140403；青島海洋化工廠，批號20140108）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別法

2.1.1 處方顯微特征分析 加味雙柏膏為大黃、關(guān)黃柏等五味藥材細(xì)粉混勻后，加入適量凡士林后制得的軟膏劑。經(jīng)過處方顯微特征分析（見表1），方中大黃、關(guān)黃柏粉末具有專屬性特征，可作為顯微鑒別依據(jù)。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果 取三個不同批次的加味雙柏膏（S1，S2，S3）各 1 g，加二氯甲烷50 mL，攪拌使其完全溶解，靜置分層，棄去上層溶液，下層沉淀物用二氯甲烷分次洗滌至上層溶液近無色，棄去上層溶液，下層沉淀物濾過，取濾渣，揮干溶劑，取適量粉末置于載玻片，滴加水合氯醛試液1～2 滴，透化2 次，滴加稀甘油1～2 滴，加蓋玻片，置顯微鏡下觀察。

2.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 三個不同批次加味雙柏膏顯微鑒別結(jié)果中均有一下特點(diǎn)：草酸鈣簇晶大，直徑20～140 μm（大黃）；纖維鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；含晶細(xì)胞壁木化增厚（關(guān)黃柏）。該顯微鑒別方法操作簡單，顯微特征明顯，可作為加味雙柏膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。如圖1所示。

2.2 大黃薄層色譜鑒別方法 大黃是加味雙柏膏的一味君藥，主要成分為蒽醌類成分，其中大黃酸是鑒別大黃和土大黃的重要方法之一。本實(shí)驗(yàn)擬建立以大黃酸及大黃對照藥材為對照的薄層色譜鑒別方法。參考《中國藥典》2020版一部大黃項下的薄層鑒別方法［17］24，制備供試品溶液及對照藥材溶液。

2.2.1 大黃供試品溶液的制備 取三個不同批次的加味雙柏膏（S1、S2、S3）各2 g，加20 mL二氯甲烷，攪拌溶解，傾去上清液；再加20 mL二氯甲烷，攪拌溶解，過濾，濾渣加30 mL甲醇，加熱回流30 min，放冷，過濾，濾液蒸干，殘渣加10 mL水使溶解；再加1 mL鹽酸，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加1 mL三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 大黃對照藥材溶液的制備 另取大黃對照藥材0.1 g，加20 mL甲醇，浸泡1 h，濾過，取10 mL濾液蒸干，殘渣加10 mL水使溶解；再加1 mL鹽酸，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加1 mL三氯甲烷使溶解，作為對照藥材溶液。

2.2.3 大黃酸對照品溶液的制備 取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.4 大黃陰性對照液的制備 取大黃陰性對照樣品2 g，按“2.2.1”項下供試品溶液的制備方法，同法制成大黃陰性對照溶液。

2.2.5 具體實(shí)驗(yàn)方法 吸取三個不同批次加味雙柏膏的供試品溶液8 μL、大黃陰性對照溶液8 μL、大黃對照藥材溶液10 μL和大黃素對照品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。

2.2.6 大黃薄層色譜鑒別結(jié)果 三個不同批次的加味雙柏膏供試品（S1、S2、S3）的色譜，在與大黃酸對照品色譜和大黃對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的紅色斑點(diǎn)，且大黃陰性對照無干擾，故該方法可作為加味雙柏膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。如圖2所示。

2.3 關(guān)黃柏薄層色譜鑒別方法 關(guān)黃柏系方中另一味君藥，主要成分為黃柏酮。本實(shí)驗(yàn)擬建立以黃柏酮及關(guān)黃柏對照藥材為對照的薄層色譜鑒別方法。參考《中國藥典》2020版一部關(guān)黃柏項下的薄層鑒別方法［17］156，制備供試品溶液及對照藥材溶液。

2.3.1 具體實(shí)驗(yàn)方法 取三個不同批次加味雙柏膏各 2 g（約含關(guān)黃柏0.2 g），加40 mL二氯甲烷，攪拌，使其溶解，靜置分層，棄去上層液，取下層沉淀物濾過，濾渣揮干，加40 mL乙酸乙酯，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。另取關(guān)黃柏對照藥材0.2g，加20 mL乙酸乙酯，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為對照藥材溶液，再取黃柏酮對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.6 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各5 μL和15 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.3.2 關(guān)黃柏的薄層色譜鑒別結(jié)果 試驗(yàn)設(shè)置了兩個不同的點(diǎn)樣量（5 μL和15 μL），供試品溶液點(diǎn)樣量高達(dá)15 μL，為藥典點(diǎn)樣量的3倍，然而三個不同批次的加味雙柏膏供試品（S1、S2、S3）溶液薄層色譜中與黃柏酮對照品相對應(yīng)位置上的斑點(diǎn)仍較淡。這由于黃柏酮為脂溶性成分，使用二氯甲烷去除凡士林的同時也損耗了黃柏酮。故不將關(guān)黃柏鑒別方法列入標(biāo)準(zhǔn)正文。如圖3所示。

3 討論

3.1 大黃草酸鈣簇晶 《中國藥典》大黃［17］24項下的顯微特征包括草酸鈣簇晶（直徑20～160 μm，有的至190 μm）、導(dǎo)管、淀粉粒?！吨袊幍洹分泻簏S的復(fù)方制劑（“通幽潤燥丸”和“跌打鎮(zhèn)痛膏”）［17］1568，1724中大黃顯微特征均描述為“草酸鈣簇晶大，直徑20～140 μm”，考慮到大簇晶所占比例不多，且只有大黃含草酸鈣簇晶，因此，參考大黃復(fù)方的特征描述為20～140 μm。

3.2 關(guān)黃柏晶纖維 《中國藥典》關(guān)黃柏［17］153項下的顯微特征包括晶纖維、石細(xì)胞及草酸鈣方晶?！吨袊幍洹分泻}）關(guān)黃柏的復(fù)方制劑（“固經(jīng)丸”）［17］1142中（鹽）關(guān)黃柏顯微特征均描述為“纖維鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維；含晶細(xì)胞壁木化增厚”，因此，采用含關(guān)黃柏復(fù)方制劑中的描述特征。

3.3 大黃薄層色譜 本研究還考察了大黃的薄層鑒別方法的專屬性、耐用性，結(jié)果均證明本方法操作簡便、專屬性強(qiáng)、耐用性好，可用于該加味雙柏膏的質(zhì)量控制。試驗(yàn)中，曾把該方法的薄層板置紫外光燈（365 nm）下檢視，但供試品中大黃酸的斑點(diǎn)與另一斑點(diǎn)未完全分離且陰性有干擾。氨熏顯色后，供試品中的大黃酸等特征斑點(diǎn)顯紅色，分離度理想，陰性無干擾。因此未將置紫外光燈（365 nm）下檢視未列入標(biāo)準(zhǔn)正文。鑒于本制劑在建立大黃薄層鑒別方法時，紫外燈（365 nm）下檢視效果不理想，課題組參考文獻(xiàn)［18］的大黃薄層鑒別方法，采用另一展開劑正己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶4∶0.2）進(jìn)行研究，結(jié)果在供試品色譜中大黃酸的斑點(diǎn)與另一斑點(diǎn)也未完全分離，與藥典法比較，其大黃酸的位置存在差異。故未將該展開劑列入標(biāo)準(zhǔn)正文。

3.4 關(guān)黃柏薄層色譜 關(guān)黃柏系方中另一味臣藥，主要成分為黃柏酮。本實(shí)驗(yàn)擬建立以黃柏酮及關(guān)黃柏對照藥材為對照的薄層色譜鑒別方法。由于加味雙柏膏中含有黃凡士林，實(shí)驗(yàn)試過用加硅藻土稀釋，參照《中國藥典》關(guān)黃柏鑒別方法進(jìn)行試驗(yàn)，薄層色譜結(jié)果不理想，故不將關(guān)黃柏鑒別方法作為加味雙柏膏的質(zhì)量控制方法。

3.5 其它 由于薄荷、澤蘭、側(cè)柏葉其顯微并不具有專屬性，因此薄荷、澤蘭及側(cè)柏葉顯微特征也不能作為加味雙柏膏的質(zhì)量控制方法。且薄荷、澤蘭、側(cè)柏葉作為加味雙柏膏處方中佐使藥，該文并未對其進(jìn)行薄層色譜研究。后續(xù)研究將對加味雙柏膏中的大黃及關(guān)黃柏這兩味君臣藥進(jìn)行含量測定，進(jìn)一步提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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（收稿日期：2022-08-24 編輯：劉 斌）