趙瑩

摘 要：本文對(duì)不同炮制工藝對(duì)大黃中成分含量的影響進(jìn)行研究。固定相為：依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u ），甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；大黃素在50～950μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。本法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、回收率高，可用于不同大黃炮制品中大黃素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：大黃；炮制；測(cè)定

大黃始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品。大黃具有瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)等功效。大黃常用于實(shí)熱便秘，積滯腹痛，血熱吐衄，腸癰腹痛，瀉痢不爽，濕熱黃疸，癰腫疔瘡，瘀血經(jīng)閉等?！侗静萁?jīng)解》記載：“入手太陽(yáng)小腸經(jīng)、手少陰心經(jīng)。手少陽(yáng)三焦經(jīng)，兼入足陽(yáng)明胃經(jīng)、手陽(yáng)明大腸經(jīng)?！辈煌拇簏S炮制品具有不同的功效。生大黃沉降，氣味重濁，走而不守，直達(dá)下焦，瀉下作用峻烈，易傷胃氣。醋大黃活血解毒作用較強(qiáng)，以消積化瘀為主。酒大黃善清上焦血分熱毒。大黃炭瀉下作用極弱，有涼血化瘀止血止瀉的功效。熟大黃瀉下力緩，瀉火解毒。本文對(duì)不同炮制工藝對(duì)大黃中成分含量的影響進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：PURIST超純水系統(tǒng)（上海瑞楓生物科技有限公司）；PHS-550智能型臺(tái)式酸度計(jì)（杭州陸恒生物科技有限公司）；JF2004北京電子分析天平（北京金泰科儀檢測(cè)儀器有限公司）；HX-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；HWS24電熱恒溫水浴鍋（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；DR5000臺(tái)式紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京創(chuàng)譽(yù)科技有限公司）；iChrom 5100高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2 試藥：乙腈（上海斯信生物科技有限公司）、鹽酸（南京大唐化工有限公司）、氯仿（南京大唐化工有限公司）、醋酸鈉（廣州自力色譜科儀有限公司）、甲醇（上海斯信生物科技有限公司）、冰乙酸（南京科捷分析儀器有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u）；甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 炮制品的制備

2.2.1 生大黃。取大黃，除去雜質(zhì)，水適量洗凈，時(shí)間不宜太長(zhǎng)，以水盡藥透為度，切塊或片，燜潤(rùn)至內(nèi)外濕度均勻，低溫干燥，篩去碎屑備用。

2.2.2 熟大黃。取大黃片或塊，置蒸制容器內(nèi)，隔水蒸至大黃內(nèi)外均呈黑色，取出干燥。取大黃片或塊，用黃酒拌勻，悶1～2h至酒被吸盡，置適宜容器內(nèi)密閉，隔水燉24～32h至內(nèi)外均呈黑色時(shí)，取出干燥（黃酒用量：大黃100kg用黃酒30kg）。

2.2.3 酒大黃。取大黃片或塊，加黃酒噴淋攪拌均勻，稍悶，待酒被吸盡后，用文火微炒，不斷翻動(dòng)，眼觀斷面淺棕色時(shí)，水分已干，取出攤晾涼，篩去碎屑（黃酒用量：大黃100kg用黃酒10kg）。

2.2.4 醋大黃。取大黃片或塊，加米醋噴淋攪拌均勻，悶潤(rùn)至透，待米醋被吸盡后，置炒鍋內(nèi)用文火加熱炒干，不斷翻動(dòng)，炒至色澤加深，取出晾涼，篩去碎屑。

2.2.5 大黃炭。取大黃片或塊，置炒制容器，武火炒至片面焦黑色，內(nèi)部焦褐色，如有火星時(shí)當(dāng)噴灑水粒，滅盡火星，文火炒干，取出晾干。

2.3 供試品溶液的制備

取大黃適量，粉碎成粗粉，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入1.0mol/L鹽酸30ml與氯仿20ml，回流30min，放冷，分取氯仿層、酸水層再分別加氯仿萃取3次，每次20ml，合并氯仿層，回收氯仿，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品約100mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流動(dòng)相超聲波振蕩溶解并用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含大黃素200μg）。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為50μg·mL-1、150μg·mL-1、250μg·mL-1、350μg·mL-1、450μg·mL-1、550μg·mL-1、650μg·mL-1、750μg·mL-1、850μg·mL-1、950μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，大黃素對(duì)照品在50～950μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取大黃素對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.63%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱(chēng)取同批大黃樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.66%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，1，2，3，4h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品大黃素峰面積積分值的RSD為0.62%。結(jié)果表明大黃素至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定大黃三批樣品中大黃素的含量，結(jié)果大黃素含量酒大黃>熟大黃>生大黃>醋大黃>大黃炭。

3 討論

分別考察甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01），乙腈-甲醇-1%醋酸鈉-冰醋酸（18：12：70∶0.1），甲醇-0. 025mol/L磷酸（9∶1），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）為流動(dòng)相。大黃素含量生片>黑豆制>黑豆黃酒制>蒸制>酒制。

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