李風(fēng)玲 張?jiān)? 李培海 李華 楊桂文 劉可春

摘要：目的 利用斑馬魚急性炎癥模型，對純綠青霉醇（viridicatol）抗炎作用及其機(jī)制進(jìn)行初步研究。方法 采用硫酸銅（CuSO4）構(gòu)建斑馬魚急性炎癥模型，評價(jià)純綠青霉醇的抗炎活性。將炎癥狀態(tài)下的斑馬魚（3 dpf）暴露在不同濃度的純綠青霉醇（30、60和90 μg/mL）中2 h，布洛芬（ibuprofen，IBF）作為陽性對照，觀察斑馬魚神經(jīng)側(cè)線炎癥細(xì)胞遷移和聚集的數(shù)量變化情況并計(jì)算熒光強(qiáng)度；利用RT-PCR技術(shù)測定各組斑馬魚炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 與炎癥模型組相比，布洛芬組和純綠青霉醇組斑馬魚炎癥細(xì)胞遷移和聚集的數(shù)量以及熒光強(qiáng)度均顯著降低，同時(shí)30、60、90 μg/mL劑量下的純綠青霉醇能顯著提高pparγ的mRNA表達(dá)水平，抑制炎癥相關(guān)因子iκbαa、ap-1、nf-κb、il-1b、il8、ptges和myd88的mRNA表達(dá)。結(jié)論 本研究通過建立斑馬魚急性炎癥模型探究了純綠青霉醇的抗炎作用，首次發(fā)現(xiàn)其機(jī)制可能是純綠青霉醇激活pparγ表達(dá)，抑制nf-κb和ap-1轉(zhuǎn)錄活性，降低炎癥因子表達(dá)，從而緩解炎癥，為純綠青霉醇的應(yīng)用開發(fā)提供了新思路。

關(guān)鍵詞：純綠青霉醇；斑馬魚；抗炎；作用機(jī)制

中圖分類號(hào)：R9 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Anti-inflammatory activity of viridicatol based on zebrafish model

Li Feng-ling1，2，3， Zhang Yun2，3， Li Pei-hai2，3， Li Hua1， Yang Gui-wen1 and Liu Ke-chun2，3

（1 School of Life Sciences， Shandong Normal University， Jinan 250014;

2 Qilu University of Technology （Shandong Academy of Sciences）Institute of Biology， Jinan 250103;

3 Engineering Research Center og Zebrafish Models for Human Diseases and Drug Screening of Shandong ， Jinan 250103））

Abstract Objective The anti-inflammatory effect and mechanism of viridicatol were studied by using zebrafish acute inflammation model. Methods The acute inflammation model of zebrafish was constructed with CuSO4 to evaluate the anti-inflammatory activity of viridicatol. zebrafish （3 dpf） in inflammatory state were exposed to different concentrations of viridicatol （30， 60， or 90 μg/mL） for two hours， with ibuprofen as a positive control. The migration and aggregation of ?inflammatory cells in zebrafish nerve lateral line were observed， and the fluorescence intensity was calculated. The transcription levels of inflammation related genes in zebrafish were measured by RT-PCR. Results ? ?Compared with the inflammation model group， the number and fluorescence intensity of inflammatory cell migration and aggregation in zebrafish in ibuprofen group and viridicatol group were significantly reduced. At the same time， viridicatol at the dose of 30， 60， or 90 μg/mL could significantly increase the mRNA level of pparγ and inhibit the mRNA expression of inflammation related factors， such as iκbαa、ap-1、nf-κb、il-1b、il8、ptges and myd88. Conclusion ?This study explored the anti-inflammatory effect of viridicatol by establishing an acute inflammation model of zebrafish. It was found for the first time that the mechanism may be viridicatol activating the expression of pparγ， inhibiting the transcription activities of nf-κb and ap-1， and reducing the expression of inflammatory factors， so as to alleviate inflammation， which provides a new idea for the application and development of viridicatol.

Key words Viridicatol; Zebrafish; Anti-inflammatory; Mechanism

炎癥是對外來生物體（包括人類病原體、塵埃顆粒和病毒）的一系列全面的生理反應(yīng)[1]，是多細(xì)胞因子通過調(diào)節(jié)促炎和抗炎系統(tǒng)之間的平衡而參與炎癥發(fā)生、發(fā)展的過程。但過度炎癥或長時(shí)間的慢性炎癥會(huì)造成免疫系統(tǒng)對機(jī)體自身正常組織的攻擊，使機(jī)體正常功能受到損傷，甚至引發(fā)一系列的病理反應(yīng)[2]。研究表明，多種疾病都與炎癥反應(yīng)相關(guān)，例如靜脈和慢性動(dòng)脈疾病、急性腦卒中[3]、心肌缺血[4]、阿爾茲海默癥、癌癥[5-6]和動(dòng)脈高血壓[7]。此外，在高度抑郁患者中也有一些炎癥指標(biāo)[8]。與炎癥分子介質(zhì)相關(guān)的疾病數(shù)量巨大且不斷擴(kuò)大，基于已有抗炎藥物的副作用和耐藥性，以及炎癥類型的復(fù)雜性，研發(fā)高效低毒的新型抗炎藥物符合臨床需求。近年來，從海洋來源的曲霉中發(fā)現(xiàn)了大量的新次生代謝產(chǎn)物，如聚酮、生物堿、萜烯、甾體和肽等[9]，并表現(xiàn)出抗菌、抗腫瘤、抗氧化和抗炎等多種生物活性[10]。本實(shí)驗(yàn)室從曲霉中分離獲得已知化合物純綠青霉醇，并初次發(fā)現(xiàn)其具有抗炎活性[11]，但對其機(jī)制尚不明確，因此，本研究首次對純綠青霉醇的抗炎作用機(jī)制進(jìn)行初步研究，以期獲得具有成藥潛力的海洋抗炎先導(dǎo)化合物，對于探索海洋生物資源挖掘利用具有重要借鑒意義。

近年來，隨著斑馬魚（Danio rerio）藥物篩選模型的多樣化和日益成熟，正越來越多的用于藥物先導(dǎo)分子的發(fā)現(xiàn)。斑馬魚的生理結(jié)構(gòu)和功能與哺乳動(dòng)物高度相似，與人類基因同源性達(dá)87%。作為模式生物，具有飼養(yǎng)成本低、發(fā)育周期短、體積小、透明易觀察、用藥量低等優(yōu)勢，特別適用于天然產(chǎn)物的活性篩選評價(jià)和作用機(jī)制研究[12]。本實(shí)驗(yàn)采用硫酸銅誘導(dǎo)法建立斑馬魚炎癥模型，研究純綠青霉醇的抗炎活性及作用機(jī)制，為純綠青霉醇的應(yīng)用開發(fā)提供參考。

1 純綠青霉醇的分子結(jié)構(gòu)

純綠青霉醇（圖1）[11，13]是從海洋真菌澳大利亞曲霉（Aspergillus austroafricanus）Y32-2的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離出來的一種喹啉酮類生物堿，分子式為C15H11NO3。

2 材料與儀器

2.1 樣品和試劑

純綠青霉醇由山東省科學(xué)院生物研究所斑馬魚藥物篩選實(shí)驗(yàn)室從海洋真菌代謝產(chǎn)物中分離鑒定所得。

硫酸銅購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.0%；布洛芬購自上海源葉生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%；RNA提取試劑盒購于南京諾唯贊生物科技股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為斑馬魚胚胎培養(yǎng)用水（5.0 mmol/L NaCl，0.17 mmol/L KCl，0.4 mmol/L CaCl2，0.16 mmol/L MgSO4）。

2.2 儀器

SZX16 型熒光顯微鏡及DP2-BSW圖像采集系統(tǒng)購自日本奧林巴斯公司；體視顯微鏡AXIO Zoom V16購于德國蔡司公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購于美國羅氏公司；斑馬魚養(yǎng)殖飼養(yǎng)設(shè)備購于北京愛生科技公司。

3 方法

3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的獲取

本實(shí)驗(yàn)采用由山東省科學(xué)院生物研究所斑馬魚藥物篩選平臺(tái)提供的成熟綠色熒光標(biāo)記炎癥細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚品系Tg（zlyz： EGFP），雌雄斑馬魚在28℃標(biāo)準(zhǔn)條件下、照明14 h/黑暗10 h分開飼養(yǎng)。用卵時(shí)，選取健康性成熟的斑馬魚，按照雌： 雄為1：1或1：2的數(shù)量比放入交配缸內(nèi)，第二天抽板交配，10時(shí)至11時(shí)獲得受精卵，將受精卵清洗并消毒，移入斑馬魚胚胎培養(yǎng)用水中，28℃下控光培養(yǎng)。

3.2 硫酸銅誘導(dǎo)斑馬魚炎癥模型及步驟

將發(fā)育至3 dpf的斑馬魚從培養(yǎng)箱中取出，在顯微鏡下隨機(jī)挑取熒光正常的轉(zhuǎn)基因斑馬魚，移入6孔板中，每孔40尾，分別設(shè)置空白組、模型組、陽性藥布洛芬（ibuprofen）組和純綠青霉醇（viridicatol）組。在藥物作用2 h后，向除空白組外的各組分別加入硫酸銅（CuSO4），使CuSO4作用濃度為20 ?mol/L，作用1 h后，在熒光顯微鏡下拍照觀察斑馬魚神經(jīng)側(cè)線炎癥細(xì)胞的遷移情況，統(tǒng)計(jì)熒光強(qiáng)度變化以及遷移至側(cè)線的炎癥細(xì)胞個(gè)數(shù)。

3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定炎癥相關(guān)基因的mRNA水平

將給藥后的斑馬魚用PBS清洗后，放入勻漿器中勻漿，利用試劑盒FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2提取RNA。將各組樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，采用BIO-RAD CFX96實(shí)時(shí)系統(tǒng)測定與炎癥相關(guān)基因的表達(dá)量，分3個(gè)重復(fù)進(jìn)行。

實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性30 s 1個(gè)循環(huán)后，變性95℃ 10 s，退火60℃ 10 s，共40個(gè)循環(huán)后，最后95℃ 15 s，60℃ 60 s，95℃ 15 s 1個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參對結(jié)果進(jìn)行相對定量分析。內(nèi)參基因β-actin以及目的基因的PCR引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成、純化，并經(jīng)質(zhì)量檢測。相關(guān)基因引物設(shè)計(jì)見表1。

3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

運(yùn)用軟件GraphPad Prism 7.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以（x±s）表示。P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。

4 結(jié)果

4.1 純綠青霉醇對硫酸銅引起的炎癥細(xì)胞聚集的影響

利用CuSO4損傷斑馬魚體表側(cè)線器的末梢器官——神經(jīng)丘，造成斑馬魚炎癥細(xì)胞向神經(jīng)丘周圍（側(cè)線部位）遷移，建立CuSO4誘導(dǎo)的斑馬魚炎癥模型，通過計(jì)算遷移到斑馬魚側(cè)線部位的炎癥細(xì)胞數(shù)目以及熒光強(qiáng)度變化情況來評價(jià)化合物的抗炎活性。如圖2～3所示，空白組與DMSO組的炎癥細(xì)胞遷移情況無顯著性差異；與空白對照組相比，硫酸銅模型組斑馬魚遷移至側(cè)線的炎癥細(xì)胞數(shù)量顯著增多，硫酸銅導(dǎo)致斑馬魚體內(nèi)發(fā)生炎癥反應(yīng)。陽性藥（布洛芬）組和30、60和90 μg/mL純綠青霉醇組斑馬魚機(jī)體內(nèi)遷移至側(cè)線部位的炎癥細(xì)胞數(shù)量，與硫酸銅模型組相比顯著降低。同樣，與模型組相比，陽性藥組和30、60和

90 μg/mL純綠青霉醇組斑馬魚熒光強(qiáng)度顯著降低。

4.2 純綠青霉醇對斑馬魚炎癥相關(guān)基因表達(dá)水平的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對照組相比，硫酸銅模型組斑馬魚中nf-κb、iκbαa、ap-1和mapk8的mRNA表達(dá)升高（P<0.05），炎癥因子il-1b、il8、ptges和myd88的mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.05），pparγ的mRNA表達(dá)顯著下降。與模型組相比，30、60和90 μg/mL純綠青霉醇組基因ptges、il-1b和ap-1的mRNA表達(dá)量顯著降低并呈劑量依賴性，基因pparγ的mRNA表達(dá)量呈劑量依賴性顯著升高。與模型組相比，30、60和90 μg/mL純綠青霉醇組nf-κb、il8的mRNA表達(dá)顯著降低，60和90 μg/mL純綠青霉醇組iκbαa、myd88的mRNA表達(dá)顯著降低，90 μg/mL純綠青霉醇組基因mapk8的mRNA的表達(dá)量顯著降低，見圖4。

5 討論

布洛芬屬于非甾體抗炎藥（non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID），是臨床上第一個(gè)被用于抗炎的丙酸衍化物類制劑，具有類似于阿司匹林的藥理特性，并且其對胃的不良影響較小。已有研究[14]發(fā)現(xiàn)：布洛芬具有對全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）患兒血清炎癥因子進(jìn)行早期干預(yù)的功效，能夠抑制白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）生成增多、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）的釋放等。因此，目前已有多項(xiàng)抗炎研究[11，15]將布洛芬作為陽性對照藥，以評價(jià)目的化合物的抗炎活性。

純綠青霉醇具有抗過敏、抗菌和抗腫瘤[16]等多種活性。Shu等[17]通過建立卵清蛋白誘導(dǎo)的食物過敏小鼠模型和大鼠嗜堿性粒細(xì)胞白血?。╮at basophil leukemia，RBL）-2H3細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn)從深?；尹S青霉中分離出的純綠青霉醇通過抑制肥大細(xì)胞活化來減輕過敏反應(yīng)并修復(fù)小鼠的腸道屏障。本實(shí)驗(yàn)利用斑馬魚炎癥模型研究了純綠青霉醇的抗炎活性和作用機(jī)制。采用硫酸銅造成斑馬魚炎癥模型的方法，與對照組相比，造模后斑馬魚體內(nèi)炎癥細(xì)胞遷移或聚集數(shù)量顯著增多，表明斑馬魚產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。向斑馬魚暴露2 h的不同濃度純綠青霉醇（30、60和90 μg/mL）溶液中加入硫酸銅作用1 h，結(jié)果顯示，與炎癥模型組相比，各化合物組斑馬魚體內(nèi)炎癥細(xì)胞遷移和聚集數(shù)量顯著減少，表明化合物純綠青霉醇具有抗炎活性。

銅作為先天性免疫系統(tǒng)中的一個(gè)重要成分，可以通過活性氧（reactive oxygen species，ROS）等途徑誘導(dǎo)氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。硫酸銅誘導(dǎo)的斑馬魚急性炎癥模型是目前斑馬魚實(shí)驗(yàn)通常采用的模擬免疫系統(tǒng)對于炎癥的應(yīng)激過程的方法之一，是無創(chuàng)傷性的[18]。在斑馬魚的成魚和幼魚中，硫酸銅可以刺激斑馬魚炎癥細(xì)胞向神經(jīng)隆起迅速遷移，具有抗炎活性的化合物可以抑制這一遷移，使炎癥細(xì)胞返回，利用這一結(jié)果來評價(jià)化合物是否具有抗炎活性。Zhang等[19]將炎癥狀態(tài)斑馬魚暴露于不同濃度異煙肼（isoniazid，INH）中，觀察斑馬魚炎癥細(xì)胞遷移和聚集變化情況，1、2和4 mmol/L INH組斑馬魚機(jī)體中遷移至側(cè)線部位的炎癥細(xì)胞數(shù)量，與硫酸銅模型組比顯著降低（P＜0.05），驗(yàn)證了INH具有抗炎作用，為異煙肼的臨床應(yīng)用提供了參考。本實(shí)驗(yàn)采用相同的CuSO4造模方法驗(yàn)證了純綠青霉醇具有抗炎活性。

白細(xì)胞介素1b（interleukin-1b，IL-1b）由活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)[20]。白細(xì)胞介素8（interleukin-8，IL-8）可以吸引和激活中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞產(chǎn)生一系列活性分子并引起炎癥反應(yīng)[21]。前列腺素E2合成酶（prostaglandin E2 synthase，ptges）是一種調(diào)節(jié)前列腺素E2生成的重要酶，前列腺素E2是公認(rèn)的炎癥預(yù)后標(biāo)志物，在炎癥反應(yīng)中常被視為治療靶點(diǎn)[22-23]。核因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）轉(zhuǎn)錄因子家族是天然免疫和獲得性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵參與者，是炎癥過程的中心介質(zhì)[24-25]。分布在真核細(xì)胞中的NF-κB抑制劑α（inhibitor of NF-κB alpha，iκbα）是iκb的家族成員之一。在靜息狀態(tài)下，NF-κB與iκb聚合，以非激活形式存在于細(xì)胞核外；當(dāng)受到細(xì)胞外基質(zhì)降解產(chǎn)物和促炎細(xì)胞因子等因素的刺激時(shí)，iκb降解，NF-κB跨過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞核，與有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)的基因結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄進(jìn)程[26]。激活蛋白-1（activator protein-1，AP-1）是一個(gè)統(tǒng)稱，指的是由Jun，F(xiàn)os或激活轉(zhuǎn)錄因子（activating transcription factor，ATF）亞基組成的二聚體轉(zhuǎn)錄因子，這些亞基與共同的DNA位點(diǎn)（AP-1結(jié)合位點(diǎn)）結(jié)合，AP-1在炎癥反應(yīng)中具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，增加黏附因子和炎性因子合成等功能[27-28]。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）是核激素受體家族中的配體激活受體，是炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵負(fù)反饋調(diào)節(jié)器[29]，可通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制炎癥反應(yīng)，比如PPAR γ與NF-κB形成轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物，抑制NF-κB與DNA相互作用，進(jìn)而抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性[30-31]。與此一致，硫酸銅暴露后斑馬魚體內(nèi)pparγ的mRNA表達(dá)呈下降趨勢。絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信號(hào)通路由4個(gè)不同的級(jí)聯(lián)反應(yīng)共享，包括細(xì)胞外信號(hào)激酶（extracellular signal-related kinases，ERK1 / 2），Jun氨基末端激酶（Jun amino-terminal kinases，JNK1/2/3），p38-MAPK和ERK5[32]，與細(xì)胞的生長、分化、對環(huán)境的應(yīng)激適應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種重要的細(xì)胞生理/病理過程有關(guān)。髓系分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）可介導(dǎo)多種Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs）、白介素1受體（interleukin-1 receptor，IL-1R）、白介素18受體（interleukin-18 receptor，IL-18R），是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要接頭蛋白，MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是參與機(jī)體炎癥反應(yīng)的一種重要信號(hào)通路，具有調(diào)控炎性因子生成與釋放的作用，抑制該信號(hào)通路的激活，可有效抑制促炎因子的分泌[33-34]。本研究給予硫酸銅誘導(dǎo)的炎癥模型不同濃度純綠青霉醇干預(yù)后，結(jié)果顯示，斑馬魚組織中pparγ的表達(dá)顯著增加，炎癥介質(zhì)nf-κb、ap-1、il-1b、il8、myd88、iκbαa和ptges的表達(dá)明顯降低，從而達(dá)到緩解炎癥的效果，而mapk8的表達(dá)量并沒有降低，猜測可能是化合物純綠青霉醇并不通過此通路來調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明純綠青霉醇具有一定的抗炎作用。其機(jī)制可能是純綠青霉醇激活pparγ表達(dá)，抑制nf-κb和ap-1轉(zhuǎn)錄活性，降低炎癥因子表達(dá)，從而緩解炎癥（圖5）。本實(shí)驗(yàn)首次在斑馬魚模型中系統(tǒng)的探究了純綠青霉醇的抗炎活性和作用機(jī)制，為純綠青霉醇的深入研究奠定基礎(chǔ)，也為海洋來源天然產(chǎn)物的有效利用提供了新思路。

參 考 文 獻(xiàn)

Arulselvan P， Fard M T， Tan W S， et al. Role of antioxidants and natural products in inflammation[J]. Oxid Med Cell Longev， 2016： 5276130.

Lu F F， Lan Z X， Xin Z Q， et al. Emerging insights into molecular mechanisms underlying pyroptosis and functions of inflammasomes in diseases[J]. J Cell Physiol， 2020， 235（4）： 3207-3221.

Schmid-Sch?nbein G W， Hugli T E. A new hypothesis for microvascular inflammation in shock and multiorgan failure： self-digestion by pancreatic enzymes[J]. Microcirculation， 2005， 12（1）： 71-82.

Entman M L， Michael L， Rossen R D， et al. Inflammation in the course of early myocardialis chemia[J]. The FASEB J， 1991， 11（5）： 2529-2537.

Cabrales P. RRx-001 acts as a dual small molecule checkpoint inhibitor by downregulating CD47 on cancer cells and SIRP-α on monocytes/macrophages[J]. Transl Oncol， 2019， 12（4）： 626-632.

Haidari F， Abiri B， Iravani M， et al. Randomized study of the effect of vitamin D and omega-3 fatty acids cosupplementation as adjuvant chemotherapy on inflammation and nutritional status in colorectal cancer patients[J]. J Diet Suppl， 2020， 17（4）： 384-400.

Suematsu M， Suzuki H， Delano F A， et al. The inflammatory aspect of the mi-crocirculation in hypertension： Oxidative stress， leukocytes/endothelial inter-action， apoptosis[J]. Microcirculation， 2002， 9（4）： 259-276.

Toker S， Shirom A， Shapira I， et al. The association between burnout， depression， anxiety， and inflammation biomarkers： C-reactive protein and fibrinogen in men and women[J]. J Occup Health Psychol， 2005， 10（4）： 344-62.

Lee Y M， Kim M J， Li H， et al. Marine-derived Aspergillus species as a source of bioactive secondary metabolites[J]. Mar Biotechnol， 2013， 15（5）： 499-519.

Wang K.W， Ding P. New bioactive metabolites from the marine-derived fungi Aspergillus[J]. Mini Rev Med Chem， 2018， 18（13）： 1072-1094.

Li P H， Zhang M Q， Li H N， et al. New prenylated indole homodimeric and pteridine alkaloids from the marine-derived fungus Aspergillus austroafricanus Y32-2[J]. Mar Drugs， 2021， 19（2）： 98.

Wittmann C， Reischl M， Shah A M， et al. Facilitating drug discovery： An automated high-content inflammation assay in zebrafish[J]. J Vis Exp， 2012， 16（65）： e4203.

何平. 南五味子及海洋真菌肉色曲霉化學(xué)成分的研究[D]. 保定： 河北大學(xué)， 2015.

余嘉璐， 鄧力. 布洛芬退熱作用和對炎癥因子早期干預(yù)的臨床研究[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2005， 21（13）： 1412-1414.

王炎焱， 趙征， 黃烽， 等. 紅曲對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清趨化因子的影響[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志， 2010， （2）： 80-83.

Liang P， Zhang Y Y， Yang P， et al. Viridicatol and viridicatin isolated from a shark-gill-derived fungus Penicillium polonicum AP2T1 as MMP-2 and MMP-9 inhibitors in HT1080 cells by MAPKs signaling pathway and docking studies[J]. Med Chem Res， 2019， 28： 1039-1048.

Shu Z D， Liu Q M， Xing C P， et al. Viridicatol isolated from deep-sea Penicillium griseofulvum alleviates anaphylaxis and repairs the intestinal barrier in mice by suppressing mast cell activation[J]. Mar Drugs， 2020， 18（10）： 517.

段秀英， 馬瑞嬌， 張?jiān)疲?等. 斑馬魚炎癥模型及其在中藥抗炎領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 藥物評價(jià)研究， 2021， 44（8）： 1573-1580.

Zhang Y， Wang C， Jia J L， et al. Isoniazid promotes the anti-inflammatory response in zebrafish associated with regulation of the PPARγ/NF-κB/AP-1 pathway[J]. Chem Biol Interact， 2020， 25， 316： 108928.

Ghafelehbashi H， Kakhki M P， Kular L， et al. Decreased expression of IFNG-AS1， IFNG and IL-1B inflammatory genes in medicated schizophrenia and bipolar patients[J]. Scand J Immunol， 2017， 86（6）： 479-485.

Zheng J， Zhang H Q， Lu X， et al. Influence of ulinastatin auxiliary general anesthesia on TNF-α IL-6 and IL-8 levels of patients with chronic obstructive pulmonary disease[J]. J North Sichuan Med Coll， 2017， 18： 47-53.

Zhang W， Zhang R X， Wang T C， et al. Selenium inhibits LPS-induced pro-inflammatory gene expression by modulating MAPK and NF-κB signaling path ways in mouse mammary epithelial cells in primary culture[J]. Inflammation， 2014， 37（2）： 478-485.

Sun X， He Y， Guo Y， et al. Arsenic affects inflammatory cytokine expression in Gallus gallus brain tissues[J]. BMC Vet Res， 2017， 13（1）： 157-172.

DiDonato J A， Mercurio F， Karin M. NF-κB and the link between inflammation and cancer[J]. Immunol Rev， 2012， 246（1）： 379-400.

Karin M. NF-kappa B as a critical link between inflammation and cancer[J]. Cold Spring Harb Perspect Biol， 2009， 1（5）： a000141.

趙澤明， 張柳. NF-κB信號(hào)通路與骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 華北理工大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2021， 23（3）： 232-238.

Bi C J， Cai Q P， Shan Y Y， et al. Sevoflurane induces neurotoxicity in the developing rat hippocampus by upregulating connexin 43 via the JNK/c-Jun/AP-1 pathway[J]. Biomed Pharmacother， 2018， 108：1469-1476.

Papavassiliou A G and Musti A M. The multifaceted output of c-Jun biological activity： Focus at the junction of CD8 T cell activation and exhaustion[J]. Cells， 2020， 9（11）： 2470.

Zhang C， Deng J J， Liu D， et al. Nuciferine inhibits proinflammatory cytokines via the PPARs in LPS-induced RAW264.7 cells[J]. Molecules， 2018， 23（10）： 2723.

Xu G M， Zan T， Li H Y， et al. Betulin inhibits lipopolysaccharide/D-galactosamine-induced acute liver injury in mice through activating PPAR-γ[J]. Biomed Pharmacother， 2018， 106： 941-945.

Chung S W， Kang B Y， Kim S H， et al. Oxidized low density lipoprotein inhibits interleukin-12 production in lipopolysaccharide-activated mouse macrophages via direct interactions between peroxisome proliferator-activated receptor gamma and nuclear factor-kappa B[J]. J Biol Chem， 2000， 275（42）： 32681-32687.

Sun Y， Liu W Z， Liu T， et al. Signaling pathway of MAPK/ERK in cell proliferation， differentiation， migration， senescence and apoptosis[J]. J Recept Signal Transduct Res， 2015， 35（6）： 600-604.

Liu M， Li G， Zhao G Q， et al. Boxb mediate BALB/c mice corneal inflammation through a TLR4/MyD88-dependent signaling pathway in Aspergillus fumigatus keratitis[J]. Int J Ophthalmol， 2018， 11（4）： 548-552.

王燕碧， 趙采芹， 唐宏， 等. 雞SPOP和MyD88基因分子特征及其組織表達(dá)特性分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2021， 52（11）： 3111-3120.

收稿日期：2022-03-09

基金項(xiàng)目：齊魯工業(yè)大學(xué)生物及生物化學(xué)ESI培育學(xué)科開放課題（No. ESIBBC202002），濟(jì)南市“高校20條”資助項(xiàng)目（No. 2020GXRC053， No. 2021GXRC047），齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）科教產(chǎn)融合創(chuàng)新試點(diǎn)工程項(xiàng)目（No. 2020KJC-ZD08）

作者簡介：李風(fēng)玲，女，生于1995年，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)榛诎唏R魚模型的藥物活性篩選與安全性評價(jià)，E-mail： 17853532669@163.com

通訊作者，楊桂文，E-mail： yanggw@sdnu.edu.cn; 劉可春，E-mail： hliukch@sdas.org.