黃小玲 林尤冠 林道壯

慢性萎縮性胃炎（CAG）是一種與幽門(mén)螺桿菌（Hp）感染密切相關(guān)的、伴胃黏膜上皮及腺體萎縮的胃部疾病。該病惡變率較低，但若患者病程較長(zhǎng)、病情較重或存在胃癌相關(guān)高危因素，其惡變率可達(dá)50%[1-2]。胃鏡和病理檢查是目前診斷CAG 的主要手段[3]。然而，有研究報(bào)道胃鏡檢查對(duì)CAG 的檢出率僅為17.7%，病理檢查對(duì)CAG 的檢出率為25.8%，這提示胃鏡和病理檢查均存在檢出率較低和漏診率較高的問(wèn)題[4-5]。因此，亟待探尋更多的檢測(cè)手段以準(zhǔn)確診斷CAG。Liu 等[6]分析了CAG 與慢性非萎縮性胃炎患者血清外泌體中miRNA 表達(dá)譜的差異，發(fā)現(xiàn)CAG 患者血清外泌體中hsa-miR-122-5p 和hsa-miR-122-3p 的表達(dá)均上調(diào)，但hsa-miR-122-3p 的表達(dá)不穩(wěn)定，這提示血清外泌體中的hsa-miR-122-5p 有潛力成為CAG 診斷的生物標(biāo)志物。研究表明，hsa-miR-122-5p 與胃癌的早期病變有關(guān)，且可有效區(qū)分萎縮性胃炎與胃癌[7]。本研究通過(guò)測(cè)定CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平，探究其對(duì)CAG 的診斷價(jià)值及與患者病理特征的相關(guān)性，以期為CAG 的臨床診斷和病情評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選 擇2019 年12 月 至2021 年6 月 瓊 海 市 中 醫(yī)院消化內(nèi)科收治的60 例CAG 患者納入研究組，另選擇同期在該院接受胃鏡檢查的60 名健康體檢者納入對(duì)照組。研究組中男性34 例，女性26例，年齡25～69 歲，平均年齡為（45.78±10.23）歲，平均BMI 為（22.14±1.68） kg/m2；根據(jù)胃黏膜萎縮程度劃分，輕度16例，中度26例，重度18 例；根據(jù)腸上皮化生程度劃分，無(wú)腸上皮化生21 例，輕度19 例，中度12 例，重度8 例；根據(jù)異型增生程度劃分，無(wú)異型增生43 例，輕度10 例，中度4 例，重度3 例。對(duì)照組中男性34 人，女性26 人，年齡24～70 歲，平均年齡為（46.11±10.26）歲，平均BMI 為（22.21±1.73）kg/m2。2 組的性別、年齡、BMI 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書(shū)，本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

研究組的納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡為18～80 歲；（2）符合《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)（2012 年，上海）》[8]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)胃鏡及病理檢查確診；（3）入組前未接受CAG 相關(guān)治療；（4）意識(shí)清楚，無(wú)認(rèn)知功能障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并消化道潰瘍；（2）合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病或惡性腫瘤；（3）有抗生素等藥物濫用史；（4）妊娠期或哺乳期婦女。

對(duì)照組的納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡為18～80 歲；（2）胃鏡及病理檢查均顯示胃黏膜無(wú)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近3 個(gè)月內(nèi)有抗炎藥物、胃藥等影響本次檢驗(yàn)結(jié)果的治療史；（2）其余同研究組。

1.3 樣本收集和處理

血清樣本：抽取受試者清晨空腹肘靜脈血5 mL，1 500 r/min 離心10 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存，待測(cè)。胃黏膜組織樣本：胃鏡下取受試者的胃黏膜組織，-80 ℃冰箱保存，待測(cè)。

1.4 血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法測(cè)定血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平。采用TRIzol法（試劑盒購(gòu)自上?？道噬锟萍加邢薰?，貨號(hào)KL058）提取血清和胃黏膜組織的總RNA，使用NanoDropTMOne 紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher 公司）測(cè)定RNA 的濃度和純度。按照BioSciTMWitEnzy First-Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，合成cDNA。應(yīng)用Primer 3.0軟件設(shè)計(jì)引物，引物序列見(jiàn)表1。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；之后95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35 個(gè)循環(huán)。以U6 作為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2 組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。等級(jí)資料比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)法分析CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平與病理特征的相關(guān)性。采用ROC 曲線分析CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平對(duì)疾病的診斷效能。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平比較

如圖1 所示，與對(duì)照組比較，研究組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p的表達(dá)水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

圖1 2 組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平比較

2.2 血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平對(duì)CAG 的診斷價(jià)值分析

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清hsa-miR-122-5p的表達(dá)水平診斷CAG 的敏感度為77.59%，特異度為79.74%，ROC 曲線下面積（AUC）為0.687；胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平診斷CAG的敏感度為71.24%，特異度為69.98%，AUC為0.623；2 項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷CAG 的敏感度、特異度和AUC分別為79.83%、80.11%和0.695。見(jiàn)圖2。

圖2 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平診斷CAG 的ROC 曲線

2.3 不同病理特征患者的血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平比較

由表2 可知，隨著CAG 患者胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度加重，其血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

表2 不同病理特征患者的血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平比較

2.4 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平與病理特征的相關(guān)性分析

Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平與其胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度均呈顯著正相關(guān)（P均＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平與病理特征的相關(guān)性分析

3 討論

CAG 為消化內(nèi)科常見(jiàn)疾病，且被認(rèn)為是一種胃癌前病變[9]。CAG 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，普遍認(rèn)為是由多因素共同作用所致，這一特點(diǎn)為該病的診斷和治療帶來(lái)困難[10]。因受多種因素影響，故胃鏡檢查和病理檢查診斷CAG 的敏感度均較低，且其均為侵入性檢查，患者依從性較低[11]。因此，亟待尋求新的無(wú)創(chuàng)診斷方法，以提高診斷CAG 的準(zhǔn)確率，并減輕患者痛苦。

研究顯示，部分miRNA 的異常表達(dá)參與了胃黏膜損傷過(guò)程，有可能成為鑒別診斷和病理分級(jí)的重要參考指標(biāo)[12]。You 等[13]在CAG 脾氣虛證患者白細(xì)胞和血清中發(fā)現(xiàn)了一種特異性miRNA——hsa-miR-122-5p，其介導(dǎo)的白細(xì)胞特征和功能的基因調(diào)控可能是CAG 的重要發(fā)病機(jī)制。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康人群比較，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 表達(dá)上調(diào)，這與以往的研究結(jié)果相符[6,13]。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平診斷CAG 的AUC 分別為0.687、0.623（均＞0.5），且聯(lián)合檢測(cè)診斷CAG 的AUC 為0.695，這提示hsamiR-122-5p 的表達(dá)水平可為CAG 的診斷提供一定參考，且血清和胃黏膜組織聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷準(zhǔn)確率。因胃黏膜組織的獲取需通過(guò)胃鏡檢查，屬于有創(chuàng)性檢查，故臨床可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。Xu 等[14]的研究發(fā)現(xiàn)，miR-122-5p 在胃癌組織和細(xì)胞中表達(dá)均顯著下調(diào)，并可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。Liu 等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，hsa-miR-122-5p 在CAG 患者血清中表達(dá)上調(diào)，且其表達(dá)水平可隨腺體萎縮程度加重而升高。本研究結(jié)果顯示，隨著CAG 患者胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度加重，其血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平顯著升高，這提示hsa-miR-122-5p 可能參與了CAG 的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，并可能成為該疾病臨床診斷和病情評(píng)估的重要生物標(biāo)志物，其機(jī)制可能與調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)有關(guān)[15-16]。

綜上所述，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 表達(dá)上調(diào)，其可能參與了CAG 的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，并有可能成為該疾病臨床診斷和病情評(píng)估的新指標(biāo)。臨床可根據(jù)實(shí)際情況制定診療方案，以提高診斷CAG 的準(zhǔn)確率。本研究尚存在不足之處，如未探討不同中醫(yī)證型CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達(dá)水平是否存在差異，且本研究的樣本量較小，故需在今后研究中擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步探討其在疾病診斷和病情評(píng)估中的價(jià)值。