李聰然 楊信怡 王秀坤 胡辛欣 李國慶 游雪甫

摘要：抗菌藥物藥效學(xué)非臨床研究屬于抗菌藥物臨床前研究的重要內(nèi)容，是指研究藥物在體外或體內(nèi)抑制病原菌生長和復(fù)制（抑菌）或使病原菌死亡（殺菌）的作用，主要包括抗菌藥物對細(xì)菌的最低抑菌濃度、最低殺菌濃度、殺菌曲線、抗生素后效應(yīng)和半數(shù)有效劑量等測定。本技術(shù)指南對抗菌藥物藥效學(xué)非臨床研究的常用術(shù)語、研究內(nèi)容及方法進(jìn)行論述，旨在為創(chuàng)新抗菌藥物，包括化學(xué)藥物、生物藥物和中藥的臨床前藥效學(xué)研究提供參考。

關(guān)鍵詞：抗菌藥物；藥效學(xué)；技術(shù)指南；抑菌活性；殺菌活性

中圖分類號：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Abstract Preclinical pharmacodynamic study of antibacterial agents is an important part of preclinical evaluation of antibacterial agents. It refers to the study of the effect of drugs on inhibiting the growth and replication （bacteriostasis） or killing （bactericidal action） of pathogenic bacteria in vitro or in vivo， mainly including? determinations of the minimal inhibitory concentration， the minimal bactericidal concentration， the time-killing curve， the post antibiotic effect， and the half effective dose. These technical guidelines summarize the common methods for preclinical pharmacodynamic evaluations of antibacterial agents， in order to provide a reference for the preclinical pharmacodynamic evaluations of new antibacterial agents， including chemical drugs， biological drugs， and traditional Chinese medicine.

Key words? ? Antibacterial agents；Pharmacodynamics；Technical guidelines；Bacteriostatic activity；Bactericidal activity

抗菌藥物是臨床最常用藥物之一，抗菌藥物不直接作用于機(jī)體，而是作用于機(jī)體內(nèi)的細(xì)菌，機(jī)體、細(xì)菌和抗生素三者之間相互作用、相互制約，因此抗菌藥物藥效學(xué)非臨床研究方法不同于其他藥物，有其自身的特點(diǎn)。本技術(shù)指南就抗菌藥物藥效學(xué)非臨床研究的常用術(shù)語、研究內(nèi)容及相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行論述，包括體外藥效學(xué)研究的最低抑菌濃度、最低殺菌濃度、殺菌曲線、抗生素后效應(yīng)等，體內(nèi)藥效學(xué)研究的全身感染試驗(yàn)和腿部感染試驗(yàn)等，同時(shí)基于細(xì)菌耐藥嚴(yán)峻狀況和新藥研發(fā)考慮，增加了作用機(jī)制、耐藥預(yù)測及耐藥機(jī)制研究相關(guān)內(nèi)容，以期為創(chuàng)新抗菌藥物研發(fā)提供參考和助力。

1 概述

1.1 抗菌藥物的定義

抗菌藥物（antibacterial agents）是指對細(xì)菌具有殺菌或抑菌活性的藥物，通常包括來源于微生物次級代謝產(chǎn)物的天然抗生素、在天然抗生素結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上改造獲得的半合成抗生素，以及全合成抗菌藥。

1.2 抗菌藥物臨床前藥效學(xué)研究

抗菌藥物臨床前藥效學(xué)（pharmacodynamics，PD）研究屬于抗菌藥物臨床前研究的重要內(nèi)容，是指研究藥物在體外或體內(nèi)抑制病原菌生長和復(fù)制（抑菌）或使病原菌死亡（殺菌）的作用。藥效學(xué)研究主要包括抗菌藥物對細(xì)菌的最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）、最低殺菌濃度（minimal bactericidal concentration，MBC）、殺菌曲線（time-killing curves，KCs），抗生素后效應(yīng)（post antibiotic effect，PAE）和半數(shù)有效劑量（50% effective dose，ED50）等測定。

1.3 本技術(shù)指南的目的、應(yīng)用范圍

抗菌藥物臨床前藥效學(xué)研究的目的包括以下幾個(gè)方面：①評價(jià)藥物體外、體內(nèi)抗菌效果及抗菌特點(diǎn)；②基本揭示抗菌藥物作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制；③反映藥物用于人體時(shí)可能的抗菌藥理效應(yīng)，為新藥臨床試驗(yàn)提供重要依據(jù)。

本技術(shù)指南所涉及的抗菌藥物指具有殺菌或抑菌活性，主要供全身或局部應(yīng)用的抗菌藥物。本技術(shù)指南適用于創(chuàng)新抗菌藥物，包括化學(xué)藥物、生物藥物和中藥。

2 體外藥效學(xué)研究

體外藥效學(xué)研究中的最低抑菌濃度（MIC）測定、最低殺菌濃度（MBC）測定等有國際比較公認(rèn)的方法，如美國的CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）和歐洲的EUCAST（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）編寫的操作規(guī)范。本指南體外藥效學(xué)研究方法主要參考這兩個(gè)機(jī)構(gòu)的資料以及部分權(quán)威專著和文獻(xiàn)，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室研究經(jīng)驗(yàn)積累編寫。

2.1 最低抑菌濃度（MIC）測定

最低抑菌濃度（MIC）指抑制細(xì)菌可見生長的某種抗菌藥物的最低濃度。最低抑菌濃度測定的受試菌一般應(yīng)選擇近2～3年的臨床分離菌，一些收集困難的菌種可考慮5年內(nèi)的臨床分離株。受試菌種應(yīng)包括臨床常見的需氧革蘭陽性菌和革蘭陰性菌，必要時(shí)應(yīng)包括厭氧菌。受試菌種的總株數(shù)視受試藥的類別和抗菌譜特點(diǎn)而定，通常測定創(chuàng)新藥物時(shí)不少于1000株，必要時(shí)需根據(jù)受試菌的耐藥特點(diǎn)（如是否產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶、是否為甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌等）進(jìn)行分類測定。可選擇同類藥物或具有相似抗菌譜的已知藥物作為對照藥。根據(jù)受試藥的抗菌作用水平選擇適當(dāng)?shù)氖茉嚌舛?，通常?.03～128 μg/mL范圍內(nèi)。藥物配制時(shí)按實(shí)際活性藥物計(jì)算。

MIC測定方法[1-5]有瓊脂稀釋法、微量稀釋法、試管稀釋法等，可根據(jù)受試藥物及受試菌的種類選擇適當(dāng)?shù)臏y定方法。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)包括廣泛使用的質(zhì)控菌株，如來自美國典型培養(yǎng)物保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）、英國國家典型培養(yǎng)物保藏中心（National Collection of Type Cultures，NCTC）等機(jī)構(gòu)的質(zhì)控菌株。質(zhì)控菌株MIC測定結(jié)果應(yīng)在藥敏標(biāo)準(zhǔn)的可接受范圍內(nèi)。結(jié)果描述中需包括抗菌藥物對各種受試細(xì)菌的MIC50、MIC90和MIC范圍（MICrange）等，參照表1格式。

2.2 最低殺菌濃度（MBC）測定

在給定條件下培養(yǎng)一定時(shí)間（通常為24 h）能殺死大部分接種受試菌（活菌數(shù)減少≥99.9%）的最低藥物濃度稱為最低殺菌濃度（MBC）或最低致死濃度（minimal lethal concentration，MLC）。根據(jù)抗菌藥物對目標(biāo)病原菌的MIC測定結(jié)果，選擇能體現(xiàn)受試藥物藥效學(xué)特點(diǎn)的細(xì)菌進(jìn)行MBC測定。每種細(xì)菌應(yīng)包含敏感及耐藥菌株，通常不少于20株。MBC測定方法主要為試管稀釋法和微量稀釋法等[3，5-6]。結(jié)果描述中需包括MBC范圍（MBCrange）、MBC50、MBC90、MBC50/MIC50、MBC90/MIC90、MBC/MIC比值分布等重要指標(biāo)。

2.3 時(shí)間殺菌曲線（KCs）測定

KCs是反映抗菌藥物對受試菌殺菌速率的一種時(shí)-效動態(tài)曲線。受試菌一般應(yīng)覆蓋目標(biāo)適應(yīng)證的主要病原菌種，每種細(xì)菌最好包含質(zhì)控菌株、敏感菌株、耐藥菌株。

將受試菌接種于培養(yǎng)基中， 接種量約為106 CFU/mL。加入適當(dāng)濃度的藥物，終濃度通常為1/2×MIC、1×MIC、2×MIC、4×MIC、8×MIC、16×MIC，置35℃繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中定時(shí)取樣， 通常在0、2、4、6、8、12和24 h， 取樣后適當(dāng)稀釋，涂布瓊脂平皿上計(jì)活菌落數(shù)， 將菌落數(shù)取對數(shù)值，繪制時(shí)間—菌落數(shù)對數(shù)曲線即KCs。與初始接種量相比，如果藥物可導(dǎo)致菌計(jì)數(shù)log10值降低≥3（相當(dāng)于殺死99.9%以上的初始接種菌），則可判斷藥物具有殺菌活性[3，5-6]。

2.4 抗菌活性影響因素

觀察體外培養(yǎng)條件對抗菌藥物抗菌活性的影響，通常包括培養(yǎng)基的pH、細(xì)菌接種量、血清濃度，必要時(shí)包括金屬離子（鈣、鎂、鈉等）濃度[5，7]。受試菌一般應(yīng)覆蓋目標(biāo)適應(yīng)證的主要病原菌種，通常為3～5種，每種20～30株。

（1）不同pH的影響：測定培養(yǎng)基不同pH值，如pH5.0、6.0、7.0、8.0和9.0時(shí)，對抗菌藥物MIC值的影響。

（2）細(xì)菌接種量的影響：測定細(xì)菌不同接種量，如細(xì)菌接種濃度為103、104、105、106和107 CFU/mL時(shí)，對抗菌藥物MIC值的影響。

（3）血清蛋白結(jié)合的影響： 測定培養(yǎng)基內(nèi)不同血清濃度，如血清濃度為0%、25%、50%和75%時(shí)， 對抗菌藥物MIC值的影響。

（4）金屬離子的影響：測定培養(yǎng)基內(nèi)含不同濃度金屬離子，如鈣離子濃度為0、25、50、75和100 μg/mL時(shí)，對抗菌藥物MIC值的影響。

2.5 抗生素后效應(yīng)（PAE）的測定

抗生素后效應(yīng)（PAE）是指抗菌藥物與細(xì)菌短暫接觸后去除受試藥物，在一定時(shí)間內(nèi)細(xì)菌生長仍然持續(xù)受到抑制的生物效應(yīng)[8-9]。PAE以時(shí)間來衡量，計(jì)算公式為PAE=T-C，其中T為給藥組細(xì)菌與藥物作用一定時(shí)間后，去除受試藥物，菌落數(shù)增加十倍（log10值增加1）所需要的時(shí)間，C為對照組菌落數(shù)增加十倍（log10值增加1）所需要的時(shí)間。

根據(jù)抗菌藥物MIC和MBC結(jié)果選擇受試菌株，應(yīng)覆蓋目標(biāo)適應(yīng)證的主要菌種。每種細(xì)菌應(yīng)包含敏感菌株、耐藥菌株，以及同種細(xì)菌的質(zhì)控菌株。藥物濃度通常為1/4×MIC、1/2×MIC、1×MIC、2×MIC和4×MIC。藥物作用時(shí)間視藥物作用特點(diǎn)而定，可從幾分鐘到幾小時(shí)不等。去除受試藥物的方式包括反復(fù)洗滌、稀釋、過濾和使藥物失活等，其中最常用的方法為稀釋，需要注意稀釋后應(yīng)確保殘余藥物量不會對細(xì)菌生長產(chǎn)生影響。通常1×MIC濃度100倍稀釋即可，更高的藥物濃度則需要1000倍、10000倍稀釋。PAE結(jié)果描述中通常需包括PAE曲線圖，以及PAE值等。

2.6 作用機(jī)制研究

抗菌藥物作用機(jī)制是抗菌藥物臨床前藥效學(xué)研究的重要組成，應(yīng)在條件允許情況下盡可能開展作用機(jī)制研究。對于已知結(jié)構(gòu)類型的抗菌藥物，可從結(jié)構(gòu)類似物的已有抗菌機(jī)制入手進(jìn)行研究，如β-內(nèi)酰胺類抗生素，可以研究其對細(xì)胞壁的影響、對β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性等。對于全新結(jié)構(gòu)類型的抗菌藥物，或者作用機(jī)制存在疑問的抗菌藥物，可以通過誘導(dǎo)耐藥突變株篩選、全基因組測序、突變株突變位點(diǎn)/耐藥機(jī)制驗(yàn)證等來反推抗菌藥物的可能作用機(jī)制，再通過分子生物學(xué)、酶學(xué)、表型等多種方法進(jìn)行作用機(jī)制驗(yàn)證[5，10-12]。

2.7 耐藥預(yù)測與耐藥機(jī)制研究

在抗菌新藥研發(fā)過程中，應(yīng)關(guān)注新藥的耐藥發(fā)展情況及可能的耐藥機(jī)制，為新藥上市和臨床應(yīng)用提供重要依據(jù)。耐藥預(yù)測與耐藥機(jī)制研究[10-14]通常包括：

（1）耐藥頻率測定：取適當(dāng)濃度菌液（通常為109 ～1010 CFU/mL），100～200 μL/平皿涂布于含不同濃度受試藥物（通常2×MIC～64×MIC）的瓊脂平皿中，培養(yǎng)一定時(shí)間（通常為24或48 h）后，記錄耐藥突變菌落數(shù)，耐藥突變菌落數(shù)與接種活菌落數(shù)的比值即為耐藥頻率。

（2）耐藥突變株篩選及耐藥機(jī)制分析：將一定量菌液涂布于含不同濃度受試藥物的瓊脂平皿中，每天觀察平皿中突變菌落生長情況，并對突變菌落進(jìn)行鑒定、耐藥水平測定、全基因組測序、耐藥突變位點(diǎn)分析驗(yàn)證、耐藥突變株適應(yīng)性代價(jià)測定等，為藥物可能的耐藥情況提供前瞻性預(yù)測，并為藥物可能的作用機(jī)制提供思路。

（3）連續(xù)傳代對藥物MIC值的影響：通常用肉湯法觀察連續(xù)傳代對藥物MIC值的影響。方法為將菌株接種于含亞抑制濃度（如1/4×MIC）受試藥物的肉湯中，每天用新鮮含藥培養(yǎng)基稀釋傳代（通常為1：1000稀釋，傳代2～4周）。保存?zhèn)鞔?，測定其對藥物的MIC值，觀察隨著傳代次數(shù)的增多，藥物MIC值變化的趨勢。

3 體內(nèi)藥效學(xué)研究

抗菌藥物體內(nèi)藥效學(xué)研究分為全身感染試驗(yàn)和局部感染試驗(yàn)，后者又包括腿部感染、呼吸系統(tǒng)感染和泌尿系統(tǒng)感染等試驗(yàn)。本部分內(nèi)容主要依據(jù)比較權(quán)威的專著、文獻(xiàn)，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室研究經(jīng)驗(yàn)積累編寫。

3.1 全身感染試驗(yàn)

全身感染試驗(yàn)常用菌液經(jīng)腹腔或尾靜脈注射引發(fā)感染，其中小鼠腹膜炎模型是抗菌藥物研究中的第一個(gè)實(shí)驗(yàn)動物模型，也是抗菌藥物體內(nèi)藥效學(xué)研究中的常規(guī)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚5，8，15-16]。

（1）動物：選擇外觀健康的封閉群（如昆明種或ICR）小鼠，體重18～22 g。必要時(shí)可選用大鼠、豚鼠等其他動物。

（2）藥物：配制時(shí)按實(shí)際活性藥物折算含量，對于不穩(wěn)定的藥物，要現(xiàn)配現(xiàn)用。藥物劑量的選擇可參照藥物的體外MIC結(jié)果和已知對照藥的體內(nèi)療效劑量，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定。原則上藥物給藥途徑應(yīng)與擬推薦的臨床給藥途徑一致。

（3）感染細(xì)菌：根據(jù)藥物的抗菌作用特點(diǎn)和體外MIC結(jié)果選擇不同的菌種和菌株。廣譜抗菌藥物應(yīng)包括革蘭陽性菌和革蘭陰性菌各1～2種。創(chuàng)新藥物應(yīng)包括革蘭陽性菌和革蘭陰性菌各2種以上，每種細(xì)菌至少2株，并應(yīng)包括臨床分離致病菌。選擇能使感染動物全部死亡的最小菌量即最小致死量（minimal lethal dose，MLD）作為感染菌量。小鼠感染途徑通常為腹腔注射、尾靜脈注射。尾靜脈注射通常用生理鹽水菌懸液，而腹腔注射需用含5%干酵母或5%胃膜素（mucin）的菌懸液。

（4）試驗(yàn)過程：將小鼠按體重隨機(jī)分組，每個(gè)藥物設(shè)4～6個(gè)劑量組，另設(shè)感染對照組，必要時(shí)增設(shè)溶媒或賦形劑對照組，每組至少10只，雌雄各半。小鼠腹腔注射（0.5 mL/鼠）或尾靜脈注射（0.2 mL/鼠）100%最小致死量（100% MLD）的菌液引發(fā)感染。首次給藥通常為感染后1 h，給藥頻率及次數(shù)根據(jù)藥物PK/PD特點(diǎn)而定。給藥后觀察動物的活動和反應(yīng)情況，必要時(shí)檢查體溫、體重、局部反應(yīng)及血液學(xué)指標(biāo)，記錄動物死亡時(shí)間和數(shù)量，通常觀察感染7～14 d內(nèi)動物死亡數(shù)，計(jì)算半數(shù)有效劑量（ED50）及其95%可信限，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并與對照藥進(jìn)行比較。資料整理可參照表2～3。

3.2 局部感染試驗(yàn)

評價(jià)創(chuàng)新抗感染藥物的體內(nèi)抗菌活性，僅用全身感染試驗(yàn)不能滿足新藥評價(jià)要求，需要有與臨床感染近似的局部感染試驗(yàn)。本部分列出了常用的腿部感染、呼吸系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng)感染試驗(yàn)的研究方法。局部感染試驗(yàn)除了上述3種類型外，還有骨髓內(nèi)感染、心內(nèi)膜感染、眼角膜感染、蛛網(wǎng)膜下感染、副睪丸感染、肌肉感染、皮內(nèi)感染、皮下感染等，可參考上述3種類型研究方法進(jìn)行。

3.2.1 腿部感染試驗(yàn)

腿部感染[5，8，15， 17-18]一般用小鼠或大鼠經(jīng)腿部肌肉注射菌液引發(fā)感染，感染菌通常選用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等。

（1）感染動物：常用小鼠或大鼠，通常選用環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫抑制狀態(tài)動物。

（2）藥物：配制時(shí)按實(shí)際活性藥物折算含量，藥物劑量可參照藥物的體外MIC結(jié)果及已知對照藥的體內(nèi)療效劑量，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定。原則上藥物給藥途徑應(yīng)與擬推薦的臨床給藥途徑一致。

（3）感染細(xì)菌：根據(jù)菌株致病力，將新鮮培養(yǎng)菌液配制為所需濃度的生理鹽水菌懸液作為感染菌液，小鼠腿部肌肉注射菌液引發(fā)感染。

（4）試驗(yàn)過程：以小鼠為例，實(shí)驗(yàn)前小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺致免疫抑制狀態(tài)。小鼠按體重隨機(jī)分組，每個(gè)藥物設(shè)3～5個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)感染對照組，必要時(shí)增設(shè)溶媒或賦形劑對照組。每組至少10只動物，雌雄各半。小鼠腿部注射部位消毒后，肌肉注射50～100 ?L的感染菌液進(jìn)行感染。一般感染后2 h開始給藥，給藥次數(shù)、間隔時(shí)間根據(jù)藥物PK/PD特點(diǎn)及療效而定。末次給藥后18 h處死動物，取腿部肌肉，組織勻漿菌計(jì)數(shù)法檢查腿部活菌數(shù)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3.2.2 呼吸系統(tǒng)感染試驗(yàn)

呼吸系統(tǒng)感染[5，8，15，19-20]（肺部感染）的常用感染方法有滴鼻法、支氣管插管法和感染箱法。療效判斷指標(biāo)一般包括肺部組織菌計(jì)數(shù)、動物生存數(shù)、肺部炎癥變化、細(xì)菌學(xué)和組織病理學(xué)檢查等。感染菌通常選用肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌等。

（1）感染動物：常用小鼠，亦可選用大鼠、豚鼠等其他動物。必要時(shí)可選用環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫抑制狀態(tài)動物。

（2）藥物：配制時(shí)按實(shí)際活性藥物折算含量，藥物劑量可參照藥物的體外MIC結(jié)果和已知對照藥的體內(nèi)療效劑量，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定。原則上藥物給藥途徑應(yīng)與擬推薦的臨床給藥途徑一致。

（3）感染細(xì)菌：根據(jù)菌株致病力，將新鮮培養(yǎng)菌液配制為所需濃度的生理鹽水菌懸液作為感染菌液，小鼠經(jīng)滴鼻、支氣管插管等方式感染，體積一般為20～50 ?L/鼠。

（4）試驗(yàn)過程：以小鼠為例，將小鼠按體重隨機(jī)分組，每個(gè)藥物設(shè)3～5個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)感染對照組等，每組至少10只動物，雌雄各半，動物麻醉后用選定方法感染。首次給藥時(shí)間一般為感染后4～12 h，給藥次數(shù)根據(jù)藥物PK/PD特點(diǎn)及療效而定。末次給藥后18 h，處死小鼠，取出肺，組織勻漿菌計(jì)數(shù)法檢查肺活菌數(shù)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。若需做肺部組織病理學(xué)檢查，觀察肺感染后損傷程度，可適當(dāng)增加每組動物數(shù)。

3.2.3 泌尿系統(tǒng)感染試驗(yàn)

泌尿系統(tǒng)感染[5，15，21-22]常采用上行性腎感染模型，常用方法有膀胱注射菌液上行性腎感染和泌尿道插管注入菌液上行性腎感染兩種。感染菌通常選用大腸埃希菌，也可選用肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌等。

（1）感染動物：常用雌性小鼠或大鼠，感染前16～24 h和感染后4～6 h禁水。

（2）藥物：配制時(shí)按實(shí)際活性藥物折算含量，藥物劑量可參照藥物的體外MIC結(jié)果和已知對照藥的體內(nèi)療效劑量，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定。原則上藥物給藥途徑應(yīng)與擬推薦的臨床給藥途徑一致。

（3）感染細(xì)菌：根據(jù)菌株致病力，將新鮮培養(yǎng)菌液配制為所需濃度的生理鹽水菌懸液作為感染菌液，小鼠感染體積一般為10～50 ?L/鼠。

（4）試驗(yàn)過程：以小鼠為例，將小鼠按體重隨機(jī)分組，每個(gè)藥物設(shè)3～5個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)感染對照組等，每組至少10只動物，動物麻醉后用選定方法感染。首次給藥時(shí)間一般為感染后4～6 h，給藥次數(shù)根據(jù)藥物PK/PD特點(diǎn)及療效而定。末次給藥后18 h處死小鼠，取出雙側(cè)腎臟，用腎組織勻漿菌計(jì)數(shù)法或腎剖面蓋印法檢查腎臟活菌數(shù)量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。若需做腎臟組織病理學(xué)檢查，觀察腎臟感染后損傷程度，可適當(dāng)增加每組動物數(shù)。局部感染資料整理可參考表4。

參 考 文 獻(xiàn)

Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI）. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S]. M100， 31st Edition. CLSI， 2021.

Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI）. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically[S]. M07， 11th Edition. CLSI， 2019.

European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing[S]. https：//www.eucast.org.

Schwalbe R， Steele-Moore L， Goodwin A C. Antimicrobial susceptibility testing protocols[M]. CRC Press Inc.， 2007.

Amsterdam D， Editor. Antibiotics in laboratory medicine [M]. Sixth Edition. Philadelphia： Wolters Kluwer， 2015.

Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI）. Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents [S]. Approved Guideline. M26-A. CLSI， 1999.

中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局. 新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)）[M]. 北京： 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局， 1993.

Vinks A A， Derendorf H， Mouton J W， Editors. Fundamentals of antimicrobial pharmacokinetics and pharmacodynamics [M]. New York： Springer， 2014.

Bush L M， Boscia J A， Wendeler M， et al. In vitro postantibiotic effect of daptomycin （LY146032） against Enterococcus faecalis and methicillin-susceptible and methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains[J]. Antimicrob Agents Chemother， 1989， 33（8）： 1198-1200.

汪復(fù)， 張嬰元. 實(shí)用抗感染治療學(xué)（第三版）[M]，北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2020.

丁健. 高等藥理學(xué)（第二版）[M]. 北京： 科學(xué)出版社， 2019.

張致平. 微生物藥物學(xué)[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社， 2003.

Martínez J L， Baquero F， Andersson D I. Predicting antibiotic resistance[J]. Nat Rev Microbiol， 2007， 5（12）： 958-965.

Hughes D， Andersson D I. Evolutionary trajectories to antibiotic resistance[J]. Annu Rev Microbiol， 2017， 71： 579-596.

Zak O， Sande M A， Editors. Handbook of Animal Models of Infection： Experimental Models in Antimicrobial Chemotherapy[M]. New York： Academic Press， 1999.

Frimodt-M?ller N. The mouse peritonitis model： Present and future use[J]. J Antimicrob Chemother， 1993， 31： 55-60.

Asempa T E， DeRosa N A， Cassino C， et al. Efficacy assessment of lysin CF-296 in addition to daptomycin or vancomycin against Staphylococcus aureus in the murine thigh infection model[J]. J Antimicrob Chemother， 2021， 76（10）： 2622-2628.

Gill C M， Abdelraouf K， Nicolau D P. In vivo activity of WCK 4282 （high-dose cefepime/tazobactam） against serine β-lactamase-producing Enterobacterales and Pseudomonas aeruginosa in the neutropenic murine thigh infection model [J]. J Antimicrob Chemother， 2021， 76（4）： 993-1000.

Murgia X， Kany A M， Herr C， et al. Micro-rheological properties of lung homogenates correlate with infection severity in a mouse model of Pseudomonas aeruginosa lung infection[J]. Sci Rep， 2020， 10（1）： 16502.

Beckmann N， Pugh A M， Auteri N J， et al. Therapeutic inhaled sphingosine for treating lung infection in a mouse model of critical illness[J]. Cell Physiol Biochem， 2020， 54（5）： 1054-1067.

閆桂華， 甄永蘇， 余蘭香， 等. 小鼠實(shí)驗(yàn)性腎上行性大腸桿菌感染及治療[J]. 抗生素， 1980， 5（3）： 31-36.

Carey A J， Tan C K， Ipe D S， et al. Urinary tract infection of mice to model human disease： Practicalities， implications and limitations[J]. Crit Rev Microbiol， 2016， 42（5）： 780-799.

項(xiàng)目基金：國家自然科學(xué)基金（No. 32141003）；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目（No. 2021-I2M-1-030，No.2021-I2M-1-055， No. 2021-I2M-1-039）

作者簡介：李聰然，女，生于1979年，研究員，主要研究方向?yàn)榭咕幬锏陌l(fā)現(xiàn)、評價(jià)及機(jī)制研究，E-mail： congranli@imb.pumc.edu.cn